Análisis por HPLC

1. BIOTRANSFORMACIÓN DE MEVASTATINA POR ASPERGILLUS NIGER 123 Análisis por HPLC La solución estándar tanto de pravastatina como de mevastatina se preparan con 2 mg de soluto y se diluyen con 5 mL de metanol aproximadamente. La columna es de C18, de fase inversa, la muestra se corre con H2O/ MeCN (40:60) con una l = 220. El tiempo de retención de la pravastatina es de 3.1 min. y el de la mevastatina es de 11.6 min. Resultados Para el medio Sabouraud maltosa se tiene un pico en 3.13 min., esta es la señal más grande que se puede observar en el cromatograma y también aparece una señal pequeña en 11.62 min., la relación que guardan los picos es de 7:3. Con el medio de levaduras Baker aparecen señales en 3.12 y 11.69 la relación que guardan los picos es aproximadamente de 3:7 en otras palabras solo se transformó el 30 % del sustrato. En el medio que contiene las levaduras S. cerevisiae presenta una señal intensa en 1.61 y otra muy pequeña en 11.73 esto indica que la S. cerevisiae también realiza la reacción de hidroxilación pero en otro lugar de la molécula. Independientemente del resultado adverso, se rescata que este microorganismo realiza la transformación casi en su totalidad. Para el medio de licor de maíz los resultados son totalmente adversos la señal más intensa aparece en 11.99 y no existe señal alguna en el tiempo de retención de la pravastatina. Análisis de resultados La diferencia entre los medios de cultivo radica en la fuente de nitrógeno utilizada, en el medio de cultivo Sabouraud maltosa dicha fuente es la peptona, esta es la mejor fuente de nitrógeno que se puede utilizar, además aporta algunas vitaminas. Por otra parte la fuente de nitrógeno de los medios restantes es el extracto de levadura o la levadura misma; la cual es una excelente fuente de vitamina B principalmente pero muy poco nitrógeno orgánico. Conclusión La fuente de nitrógeno juega un papel muy importante para la biotransformación de la mevastatina con A. niger. Bibliografía: *Madigan, M.T., Martinko, J.M., Brock, Biología de los microorganismos. Octava edición . PRENTICE HALL IBERIA, Madrid 1999. *K.Kieslich, Microbial transformation of non-steroid cyclic hidrocarbons.,Thieme, Stuttgar 1976. -H.A.Arfmann, W.R. Abraham and K.Kieslich, Biocatalysis, 1988,2,59. -N. Serizawa, K. Nakagawa, Y. Tsujita, A. Terahara and H. Kuwano., J. Antibiot., 1983, 36, 604. -K. Gbewonyo., B. C. Buckland., M. D. Lilly. Biotechnology and Bioengineering, vol. 37, pp 1101-1107 (1991). Pasante de Química Edith Mendoza Villavicencio, M. en C. Consuelo Sandoval, Dr. Héctor Barrios López Instituto de Química, U.N.A.M. Este trabajo describe un proceso de hidroxilación microbiana de Mevastatina por A. niger para obtener la Pravastatina. Esta es un agente inhibidor competitivo de la 3-hidroxi-3-metil-glutaril-coenzima A (HMG-CoA) reductasa, que es la enzima que cataliza la conversión de HMG-CoA a mevalonato, limitando en un paso inicial la biosíntesis del colesterol. La pravastatina forma parte de una nueva clase de compuestos hipolipemiantes, los inhibidores de la HMG-CoA reductasa que disminuye la biosíntesis del colesterol. Introducción Las biotransformaciones en la industria es la disciplina que utiliza los microorganismos, generalmente cultivados a gran escala, para obtener productos comerciales de valor, o para realizar importantes transformaciones químicas. Las biotrasformaciones industriales se originaron como procesos de fermentación alcohólica, tales como la fabricación de vino y cerveza. Posteriormente se desarrollaron procesos microbianos para la producción de compuestos farmacéuticos (como antibióticos), aditivos alimentarios (como amino-ácidos), enzimas y compuestos químicos tales como butanol y ácido cítrico. Las transformaciones microbianas son de gran interés para la industria farmacéutica debido a su regioselectividad y su estereoselectividad para la modificación de moléculas complejas. Método Cepa de Aspergillus niger Medios de cultivo Se utilizaron cuatro medios de cultivo diferentes; el primero Sabouraud maltosa 50 g/L y los tres restantes son medios de cultivos compuestos: uno es el que está compuesto por levaduras Baker, miel y dextrosa; el siguiente es Saccharomyces cerevisiae, miel y dextrosa y por último el de licor de maíz, dextrosa y extracto de levaduras. (Todos los reactivos los distribuye Sigma). Se prepara 50 mL de cada medio de cultivo y posteriormente se esterilizan en autoclave a 120 °C con 1.5 lb de presión durante 20 min. Los medios de cultivo se inoculan con esporas de A. niger y se incuban por 48 hrs a 28 °C con agitación constante (100 r.p.m.). Concluido el tiempo se agrega 10 mg del sustrato y se coloca en el agitador por siete días más en las mismas condiciones. Reacción de hidroxilación de mevastatina mediante biotrasformación por A. niger