Utilizaci n de anticuerpos en biomedicina
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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA PowerPoint PPT Presentation


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UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

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Presentation Transcript


UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

  • Métodos y Técnicas de Estudio en Biología Celular

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA


UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

UTILIZACIÓN DE ANTICUERPOS EN BIOMEDICINA

  • Inmunoblotting (western blot), Dot/slot blot

  • Inmunocitoquímica

  • Inmunofluorescencia

  • Inmunoprecipitación

  • ELISA/EIA/RIA

  • Cromatografía de inmunoafinidad

  • Microscopia electrónica (morfología)


Estructura de los anticuerpos


Tipos de Anticuerpos


Selección clonal: Delección


Selección clonal: expansión


Conceptos

Conceptos

  • Inmunógeno, antígeno.

  • Carrier: BSA, KLH.

  • Unión covalente (cross-linking): MBS, glutaraldehido, DSS.

  • Péptidos inmunogénicos

  • Proteínas nativas y desnaruralizadas.

  • Otras moléculas

  • Adjuvante de Freund: completo e incompleto.

  • Primera inmunización y recuerdos.


Anticuerpos policlonales

  • Inmunización del conejo

  • Recuerdos

  • Extracción de sangre

  • Preparación del suero

  • Purificación del anticuerpo (métodos opcionales)

  • Caracterización del antisuero


Anticuerpos policlonales


Anticuerpos monoclonales

  • Inmunización del ratón

  • Extracción del bazo

  • Preparación de hibridomas (mieloma+B)

  • Selección de los clones

  • Producción y uso de anticuerpos


Elección del tipo de anticuerpo


Marcaje de Anticuerpos


Marcaje de Anticuerpos para uso en Células


Immunoblotting (western blot)

Immunoblotting (western blot)


Inmunocitoquímica

Las flechas indican la presencia de neuronas con hormona liberadora de la hormona del crecimiento en el Núcleo Arcuato (cerebro) de rata de 4 meses.


Inmunocitoquímica

Localización de la “calbinding” (calbindina) en cerebelo de rata


Microscopia (confocal e inmunofluorescencia)


Inmunoprecipitación


Inmunoprecipitación


ELISA


ELISA


Cromatografía de inmunoafinidad


Oro Coloidal

Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm) en células endoteliales. La barra corresponde a 0,25 mM.


Oro Coloidal

Internalización de transferrina marcada con oro coloidal (6,6 nm). G: aparato de Golgi; Lu: lumen vascularLa barra corresponde a 0,25 mM.


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