甜草化学成分研究
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甜草化学成分研究. 答辩人:刘文基 指导教师:李厚金 副教授 中山大学有机所. 内容提要. 一、前言 二、研究目的 三、实验内容 四、实验结果 五、结论 致谢. 一、前 言. 甜草是我国南方的一种民间草药,是茜草科植物,在 《 江西草药 》《 中国草药大全 》 有其药用记载, “ 性平,味甘,有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效 ” 。其叶子榨汁,可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤,疗效显著。. 二、研究目的. 目前尚未见到关于甜草 Oldenlandia cantonensis How 的研究报告。甜草化学成分的研究可发现新的具有药用价值的化合物。.

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Presentation Transcript

甜草化学成分研究

答辩人:刘文基

指导教师:李厚金 副教授

中山大学有机所


内容提要

  • 一、前言

  • 二、研究目的

  • 三、实验内容

  • 四、实验结果

  • 五、结论

  • 致谢


一、前 言

甜草是我国南方的一种民间草药,是茜草科植物,在《江西草药》《中国草药大全》有其药用记载,“性平,味甘,有治疗黄疸型肝炎、糖尿病、外伤出血、清热解毒的功效”。其叶子榨汁,可用于蜜蜂、黄蜂等蜂类的蛰伤,疗效显著。


二、研究目的

目前尚未见到关于甜草Oldenlandia cantonensis How的研究报告。甜草化学成分的研究可发现新的具有药用价值的化合物。


三、实验内容

(一)甜草的采集与提取

原料甜草,2004年7月份采集于江西省地区的向阳山坡,取地上全草,收集后晒干剪碎,用95%乙醇多次浸泡,合并浸泡液,用旋转蒸发仪浓缩至干,浓缩物再用甲醇溶解,溶解液拌硅胶。硅胶拌样后吹干进行下一步分离操作。


三、实验内容

(二)分离提纯

实验用柱层析,薄层层析,以及重结晶的方法分离提纯甜草中的化学成分。用GCMS,紫外光谱法,红外光谱法,质谱法,核磁共振等方法分析确定甜草化学成分。


将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用PE:EA=10:1, 5:1, 3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3溶液梯度冲洗柱子。对初次柱层析得到的溶液进行再次的柱层析分离操作。用重结晶方法对化合物进一步提纯,分离得到的低极性成分用GCMS分析,中等极性成分中得到四个化合物成分(A,B,C,D)。


四、实验结果将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

表1 甜草Oldenlandia cantonensis How的低极性成分及相对含量

低极性成分分析,液体油状物用氯仿溶解,进行GC-MS分析。


中等极性成分分析将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

共分离得到4个纯化合物,分别为十二碳脂肪酸,谷甾醇,2个三萜化合物,其中1个三萜是新的化合物。2个三萜化合物活性显著,对人肝癌细胞株Bel-7402的IC50值分别为6.5g/ml,7.0g/ml ,对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值分别为8.0g/ml,7.0g/ml。


化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用A为浅白色奶油状固体,微加热即融化,1H-NMR(CDCl3,TMS,ppm):7.223,3.634,2.340,2.316,2.291,2.272,2.246,1.277,1.232,1.144,1.123,0.877,0.855,0.832,0.810。

A红外光谱,IR/cm-1(KBr):3448,2920,2851,2366,2342,1740,1652,1545,1463,1438,1378,1172。 鉴定A为十二碳脂肪酸。


A h nmr
化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用A的H-NMR图


化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用B,白色粉末固体,1H-NMR(CD3COCD3,TMS,ppm):5.226,5.215,2.793,2.057,2.049,1.293,1.171,1.128,0.988,0.969,0.952,0.943,0.918,0.898,0.884,0.865,0.839,0.810,0.783。

IR/cm-1(KBr):3421,2927,1690,1651,1574,1456,1407,1273,1185。通过数据比较确定其为谷甾醇。


B h nmr
化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用B的H-NMR图


化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用C,白色固体,可结晶成透明针状晶体。 1H-NMR(CD3COCD3,TMS,ppm):7.981,5.222,5.208,5.197,2.794,2.250,2.213,2.045,1.957,1.943,1.933,1.922,1.902,1.891,1.168,1.125,0.982,0.964,0.949,0.937,0.914,0.894,0.870,0.835,0.777。

IR/cm-1(KBr):3428,2927,2856,2337,1736,1689,1632,1574,1458,1404,1385,1274,1254,1170,1107,1042,997。 此化合物比较复杂,为三萜类化合物,结构确定工作尚在进行中。


C 1 h nmr
化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用C的1H-NMR图


位置编号将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

DEPT

13C NMR

1H NMR

1

CH2

38.2

1.54

2

CH2

23.7

1.50, 1.91

3

CH

76.8

3.00

4

C

38.3

——

5

CH

54.7

0.66

6

CH2

26.9

1.46

7

CH2

32.6

1.57

8

C

46.7

——

9

CH

46.9

1.45

10

C

41.6

——

11

CH2

22.7

1.86

12

CH

124.5

5.13

13

C

138.1

——

14

C

41.5

——

15

CH2

27.5

1.80

16

CH2

17.9

1.46, 1.30

17

CH2

32.6

1.25,1.43

四、实验结果

表2 化合物D的NMR数据(DMSO-d6, TMS, 500MHz)


18将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

CH

52.3

2.11

19

CH3

15.9

0.68

20

CH3

28.1

0.90

21

CH3

15.1

0.87

22

CH3

16.9

0.76

23

CH3

23.2

1.04

24

CH

38.3

0.94

25

C

178.1

——

26

CH2

30.0

1.42

27

CH

38.4

0.95

28

CH3

16.8

0.82

29

CH3

20.9

0.92

3-OH

——

4.15

25-COOH

——

11.8

分子式为 C29H48O3, FABMS:m/z 445[M+1]+,相对分子量为444。元素分析结果:C, 78.33; H, 10.90; N, 0.000。IR(KBr):3420, 2970, 2928, 2871, 1693, 1575, 1455, 1407, 1313, 1279, 1249, 1142, 1091, 1032, 996, 758, 661, 568。


D 13 c nmr
化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用D的13C-NMR图


D 1 h nmr
化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用D的1H-NMR图


化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用D 的结构:

新化合物


对化合物将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用D衍生物制备

将D与苯甲酸反应

+


产物编号将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

结构

产物来源

IC50

(μg/mL)

C

三萜类

甜草

18

D

三萜

甜草

15

对化合物C,D进行药理测试得到以下结果。

表3 对拓扑异构酶(hTOP I )的IC50测定结果


4 bel 7402 ic 50

产物编号将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

产物编号

结构

结构

产物来源

产物来源

IC50

(μg/mL)

IC50

(μg/mL)

C

C

三萜类

三萜类

甜草

甜草

6.5

8.0

D

D

三萜

三萜

甜草

甜草

7.0

7.0

表4 对肝癌细胞株Bel-7402的IC50值测定结果

表5 对人胃腺癌细胞株Mcg-803的IC50值测定结果


五、结论将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

实验成功分离到预期的化合物,并对化合物的种类及结构进行了鉴定。

对分离所得到的2个三萜类化合物进行了结构鉴定, 确定其中1个化合物结构式,为新化合物,另外1个还在测定过程中。

同时对2个三萜类化合物进行了药理测试,得到明显的药理效果。确定甜草中具有抗肿瘤活性的三萜类化合物。对这些化合物进行深入的药理研究,有助于抗肿瘤药物的发明。


致 谢将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用

  • 本实验是在李厚金副教授的亲自指导下完成的。在实验中碰到不少困难,李老师都耐心仔细的给予指导,引导我从实验中发现问题、分析问题和解决问题。致诚挚的感谢!

  • 同时也得到实验室其他师兄、师姐的帮助,在此一并向他们表示感谢。

  • 谢谢朋友给我的支持与帮助。


谢谢!将硅胶拌样吹干至样品呈粉末状态,进行柱层析初步分离。先用石油醚湿法装柱,然后依次用


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