Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile

1. Les nouveaux outils pour maitriser la mise en bouteille stérile

2. Vin avec une forte population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel Filtration = réduction proportionnelle de la charge

3. La filtration de mise Mise en bouteille stérile = levures/bouteille <10 (voir <1)

4. Vin avec une forte population levurienne • Analyses de la population levurienne par cytométrie de flux • Analyse du SO2 moléculaire, libre et total Filtration = réduction proportionnelle de la charge • Adaptation du traitement de mise • Adaptation du type de filtration à la population levurienne Risque de « relargage » Pollution du matériel = Maîtrise des risques 1 vin contaminé peu mettre en cause tout le travail d’une journée • Suivi microbiologique de la mise en bouteille Augmentation des risques de contamination du matériel = garantie de qualité de la mise en bouteille stérile

5. La cytométrie de flux • Quoi ? • Pourquoi ? • Comment ?

6. La cytométrie : quoi ? 19682008 Partec: l’innovation en marchedepuis 40 ans Principes des appareils de Cytométrie en Flux Pascal Brunou, David Bastien Partec France

7. Domaines d’applications (2) • Agrosciences: • Recherche vétérinaire • Aquaculture • Biologie végétale • Sélection variétale • Applications Industrielles: • Agroalimentaire (jus de fruit, bière…) • Produits cosmetiques • Pharmaceutique • Industrie du papier

8. Analogie entre microscopie et cytométrie de fluorescence Echantillon fixe sur lame au microscope Echantillon liquide focalisé sous l’objectif et le trajet optique du cytomètre Cytométrie: = « mesure des cellules »

9. LASER PMT 1 PMT 2 Système fluidique - Focalisation hydrodynamique Cellule de mesure = cœur du système

10. Excitation par un laser des particules injectées Laser Source d’excitation lumineuse ultra-performante type laser pour une excitation et analyse des signaux d’émission en quelques microsecondes Forward Scatter (FSC) Side Scatter (SSC) + Fluorescence

11. Différentes approches pour le marquage des cellules Sondes intra-cytoplasmiques Anticorps Sondes ADN Marqueurs de surface - organites cellulaires

12. Configuration simple ou multi-couleurs Système Mono-paramétrique Système Multi-paramétrique source d’excitation simple / sources multiples

13. La cytométrie : quoi ? Représentation des résultats en 3 dimensions : * taille-structure (FSC) / activité fermentaire de la levure (Fluorescence) * Densité de population = couleur - taille-structure (FSC) - population - Activité levurienne (fluorescence) - population

14. 10X 100X 1000X

15. Caractéristiques de la méthode • Gamme de mesure : 100 à 500.000 levures/ml (sans dilution) • Limite de détection : 100 à 1000 levures/ml • Répétabilité : <10% de la mesure • Bonne corrélation entre l’activité fermentaire de la levure et l’intensité de la fluorescence mesurée

16. La cytométrie de flux, un outil qui : • Permet un comptage rapide et précis • Permet de connaître la viabilité et l’activité fermentaire • Apporte une solution efficace pour la maitrise des mises en bouteille stériles