1 / 25

Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium

Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium. Elválasztástechnika. kv1n1lv1. Ionpár fordított fázisú folyadékkromatográfia. [Molekula ION] -. N +. Ion-párképző só. Mérendő komponens ionos formája. [Molekula ION] -. N +. C18 szilárd fázis.

kass
Download Presentation

Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Elválasztástechnikai Kutató és Oktató Laboratórium Elválasztástechnika kv1n1lv1

  2. Ionpár fordított fázisú folyadékkromatográfia [Molekula ION]- N+ Ion-párképző só Mérendő komponens ionos formája [Molekula ION]- N+ C18 szilárd fázis Ionpárképző reagens(Quaterneralkil ammónium só)

  3. Ionpár fordított fázisú folyadékkromatográfia O O- [Molekula ION]+ S Ionpárképző só Mérendő komponens ionos formája O O [Molekula ION]+ S O- C18 szilárd fázis O Ionpárképző reagens(Alkilszulfonsav só) Esetleg: CF3COO-; BF4-; ClO4-, PF6-

  4. Ioncserés folyadékkromatográfia Ioncsere: ha az állófázis állandó töltéssel rendelkezik; Ioncserélő kapacitás: megkötött ellentétes ion mennyiség egységnyi tömegű tölteten (mmol/g vagy mekv./g); „Ioncserélő gyanták” • Ionkizárásos kromatográfia • Ionkromatográfia

  5. Ionkromatográfia

  6. Hidrofób kölcsönhatású kromatográfia

  7. HILIC Állófázis: mint a normál fázisú kromatográfiában Eluens: mint a fordított fázisú kromatográfiában 3-40% vízzel (A víz az erős oldószer !!!) Alkalmazásai: RP-hez túl poláros, nehezen visszatartható komponensek elválasztására

  8. Komponensek tulajdonságát észlelik A folyadékkromatográfiás detektorok • UV- látható abszorbancia detektor (UV- VIS) • Fluoreszcenciás detektor (FLD) • Elektrokémiai detektor (ECD) • Radiokémiai detektor (RD) • Tömeg detektorok (MSD) Előnyök: specifikusság, érzékenység, szelektivitás Hátrányok: minden vegyület más (pl. más UVmax)

  9. Mozgófázis tulajdonságát észlelik A folyadékkromatográfiás detektorok • Törésmutató detektor (RID) • Vezetőképesség detektor (CD) • Fényszórásos detektor (LSD) Előnyök : nagyon sok komponensre – majdnem univerzális Hátrányok: zaj, érzékenység

  10. UV-VIS detektor • Alapelv: Lambert-Beer törvény

  11. VWD – Variable Wavelenght detector A diffrakciós rács monokromatikus fényt állít elő A monokromatikus fényt megosztjuk a referencia és minta fotodióda között lencse tükör Diffrakciós rács tükör deutérium lámpa tükör Fénynyalábosztó Átfolyó cella tükör Minta fotodióda Az intenzitásbeli különbséget a cellában történő abszorbancia okozza

  12. Diódasoros detektor – DAD, Diodarray detector VisLamp AchromaticLens Diode Array DetectorFlow Cell UVLamp HomiumFilter Grating OpticalSlit

  13. Ismétlés vége

  14. UV/VIS detektorhoz képest: Fluoreszcenciás detektor – FLD • Érzékenyebb • Szelektívebb (Csak fluoreszkáló komponensek detektálására alkalmas)

  15. Az antracén gerjesztési és emissziós spektruma metanolban Fluoreszcenciás detektor – FLD Vibrációs alszintek p* gerjesztés gerjesztés Intenzitás h1 emisszió h2 p emisszió excitation 225 275 325 375 425 475 Wavelength / nm

  16. Fluoreszcenciás detektor – FLD

  17. Fluoreszcenciát befolyásoló tényezők • Fluoreszcenciát csökkentő tényezők: • Oldott oxigén vagy más szennyező

  18. Fluoreszcens detektálást befolyásoló egyéb tényezők • A mérendő komponens koncentrációja; • Gerjesztési forrás intenzitása; • Besugárzott minta térfogata (cella térfogat); • A z emittált fényt elnyelő oldószer, vagy oldott anyagok (koelució, szennyezések); • A szórt fény megnöveli a zajt (nagy molekulák, más fényvisszaverő felület)

  19. PAH-ok mérése HPLC-FLD-vel Gerjesztési / emissziós hullámhossz lex/lem 225/314 246/368 237/440 230/330 277/376 255/420 230/400 250/495

  20. Elektrokémiai (amperometriás) detektor-ECD • Olyan vegyületek detektálására alkalmazzuk, amelyek un. „elektroaktív” csoportot tartalmaznak. Ezek a csoportok könnyen: • Oxidálódhatók • Redukálhatók • Szerkezet megvizsgálásával és egy ciklikus voltammogram felvételével tervezhetővé válik.

  21. Elektrokémiai (amperometriás) detektor-ECD Előnyök: Igen szelektív, igen érzékeny Hátrányok: Fémek jelenléte jelentősen zavarja (Fe, Ni, etc.). Gradiens nem alkalmazható Kis hőmérséklet- és áramlás- ingadozások is zavarják = NEM ROBOSZTUS 21

  22. Elektrokémiai (amperometriás) detektor - ECD

  23. Radiokémiai detektor - RD Fő alkalmazási terület: metabolizmus kutatásban A mérendő komponens rádióaktivitása által kiváltott fény emissziót méri (Heterogén – homogén szcintilláció) Mérhető pl: 35S, 14C, 3H, 131I

  24. Fényszórásos detektor – EvaporativeLightScatteringDetector, ELSD • Porlasztás: Nitrogén gáz segítségével az oszlopot elhagyó eluenst elporlasztjuk. • Mozgó fázis elpárologtatása: Egy fűtött csőben áramoltatjuk át, ahol az oldószer elpárolog. • 3. Detektálás: A száraz minta részecskéket lézer fénnyel világítjuk meg egy átfolyó cellában. A részecskék által szórt fényt detektáljuk. A detektált fény arányos a részecskék számával (koncentrációjával).

  25. Refraktív index (törésmutató) detektor – RID • Univerzális detektor, de csak akkor alkalmazható, ha az elválasztott komponensek törésmutatója eltér az eluens törésmutatójától; • Gradiens elúcióval nem kompatibilis (0,1% eluens összetétel változás már a törésmutató változását idézheti elő); • Hőmérséklet változás (0,001C –ra termosztáljuk); • Pumpa pulzálás kontroll !!!! • Off-line eluens keverés

More Related