Arabidopsis thaliana tip120 inszerci s mut ns jellemz se
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 15

Arabidopsis thaliana tip120 inszerciós mutáns jellemzése PowerPoint PPT Presentation


  • 42 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Arabidopsis thaliana tip120 inszerciós mutáns jellemzése. Az eukarióta gének csoportjai. I. - 5.8S, 18S, 28S rRNS III. - 5S rRNS, tRNS II. - fehérjék. POLII. TIP120. TFIIF. TATA. A transzkripciós iniciációs komplex kialakulása. TFIIE. TFIIH. TFIIB. TFIIA. TBP.

Download Presentation

Arabidopsis thaliana tip120 inszerciós mutáns jellemzése

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Arabidopsis thaliana tip120 inszerci s mut ns jellemz se

Arabidopsis thaliana tip120 inszerciós mutáns jellemzése


Az eukari ta g nek csoportjai

Az eukarióta gének csoportjai

  • I.-5.8S, 18S, 28S rRNS

  • III.-5S rRNS, tRNS

  • II.-fehérjék


A transzkripci s inici ci s komplex kialakul sa

POLII

TIP120

TFIIF

TATA

A transzkripciós iniciációs komplex kialakulása

TFIIE

TFIIH

TFIIB

TFIIA

TBP


A tip120 feh rje n h ny jellemz je

A TIP120 fehérje néhány jellemzője

  • 1230 AS, szimpla polipeptid

  • Affinitást mutat a TBP-vel és az RNS Pol II Rpb5 alegységével

  • Az iniciációs komplex összeszerelődését serkenti

  • A funkció betöltésében fontos a molekula N-terminális 1/3-a

  • A TIP120 fehérjét kódoló gént kimutatták patkányban, Coenorhabditisban, Drosophilában, emberben, Arabidopsisban


Inszerci s mutagenezis

T-DNS

LB

RB

Növényi gén

promóter

5' UTR

exon/intron

3' UTR

Funkcióvesztéses mutáció

Inszerciós mutagenezis

T-DNS inszerció


A h911 vonalban azonos tott mut ns

A H911 vonalban azonosított mutáns

Columbia:

normál fenotípus

H911/4:

apró fenotípus


A h911 mut ns vir gja

A H911 mutáns virágja

H911/4:

Majdnem teljesen steril

Columbia:

Normál fenotípus


T dns inszerci poz ci ja a h911 vonalban

T-DNS inszerció pozíciója a H911 vonalban

R

L

2. Krom., BAC T8K22

T-DNS inszerció: 13. exon (3301bp)

Gén: At2g02560

Protein: feltételezett TBP kölcsönható fehérje (120 kD)

(TBP Interacting Protein, TIP120)


Az arabidopsis tip120 g n

Az Arabidopsistip120 gén

Lokalizáció: 2. kromoszóma, AT2G02560 jelű lókusz

Exon-intron szerkezet: 28 exon


Arabidopsis thaliana tip120 inszerci s mut ns jellemz se

T-DNS

LB primer

5’

H911A

H911B

3’

Alvonal: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

Fenotípus: n n n n n n n n a a

Genotípus: +/+ +/+ +/- +/- +/- +/- +/- +/+ -/- -/-

1500bp

1000bp

750bp

800bp, H911A+H911B

1500bp

1000bp

750bp

600bp, LB1+H911B

PCR analízis eredménye

A H911 vonal szegregációs analízise

PCR primerekvad típus heterozigóta homozigóta

H911A+B+ +-

H911B+LB- ++


A tip120 g n expresszi j nak vizsg lata

A tip120 gén expressziójának vizsgálata

1. Northern analízis: vad típusú Arabidopsis, illetve apró fenotípusú mutáns totál RNS felhasználásával: nincs detektálható jel.

2. Realtime RT-PCR analízis:

tip120 CT értéke: 20.97

actin kontrol CT értéke:15.61

tip120 gén expressziós szintje 32x alacsonyabb

az actin gén expressziós szintjénél.


A tip120 feh rj t k dol teljes hossz s g cdns kl noz sa

A TIP120 fehérjét kódoló teljes hosszúságú cDNS klónozása

TIP1

TIP2

ATG

STOP

PCR-amplifikálás (ELONGASE enzim, Invitrogen)

BamHI- klónozás pBLUESCRIPT vektorba

cDNS- klón: 3990 bp

A cDNS szekvenálásának stratégiája

TIP5

TIP6

TIP2

TIP3

TIP1

H911A

TIP4

BamHI

pBS SK+


A tip120 cdns kl n v zlatos t rk pe

A tip120 cDNS-klón vázlatos térképe

3’

5’

EcoRI

BamHI

BamHI

SacI

T17

EST

T17

ATG

STOP

A tip120 cDNS további klónozása:

pAS2 kéthibrid vektor

pPCVB1 expressziós vektor


Sszefoglal s

Összefoglalás

  • - a H911 mutáns előállítása T-DNS inszerciós mutagenezissel

  • - az apró fenotípust a tip120 génben bekövetkezett homozigóta inszerció

  • okozza

  • - a tip120 expressziója alacsony szintű

  • a tip120 cDNS klónozása pBS, pPCVB1 növényi expressziós vektorba

  • élesztő-kéthibrid rendszer kidolgozása folyamatban van


K sz netnyilv n t s

Köszönetnyilvánítás

-Dr. Szabados László

-Dr. Kovács Izabella

-Dr. Martha Alvarado

-Dr. Ökrész László

-Zsigmond Laura

-Ábrahám Edit

-Bíró Anikó

-Dr. Maróy Péter

-Dr. Boros Imre


  • Login