1 / 22

פרק 6

פרק 6. כרומטוגרפיה. עמוד 1. פרק 6. סדר העניינים. חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגי כרומטוגרפיה ... חלק שני: תאור כמותי , גימלון. עמוד 2. פרק 6. חלק ראשון: מבוא מטרות. תאור תהליך כרומטוגרפיה בעמוד תופעת העיכוב תאור כללי של סוגי כרומטוגרפיה וחומרי מילוי ניתוח כרומטוגרמות. עמוד 3.

kapono
Download Presentation

פרק 6

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. פרק 6 כרומטוגרפיה עמוד1 פרק 6

  2. סדר העניינים... • חלק ראשון: מבוא - תאור התהליך, סוגיכרומטוגרפיה ... • חלק שני: תאור כמותי, גימלון עמוד2 פרק 6

  3. חלק ראשון: מבואמטרות • תאור תהליךכרומטוגרפיהבעמוד • תופעת העיכוב • תאור כללי של סוגיכרומטוגרפיה וחומרי מילוי • ניתוחכרומטוגרמות עמוד3 פרק 6

  4. מריץ (אלואנט) תהליךכרומטוגרפיהבעמודColumn Chromatography פאזה נייחת Stationary Phase עמוד4 פרק 6

  5. עיכוב עמוד5 פרק 6

  6. המפתח לתכנוןכרומטוגרפיהיעילה הבדלי גודל אינטראקציותהידרופוביות עם הפאזהביולוגיות - ספציפיות הנייחתכימיות - לא ספציפיות אלקטרוסטטיות ואן-דר-ואלס שוני בתכונות הפיזיקליות, הכימיות ו/או הביולוגיות בין מרכיבי תערובת החומרים במרק תכונות הפאזה הנייחת מה גורם להבדלים בעיכוב בין חומרים שונים? עמוד6 פרק 6

  7. תאור בעזרת פילוגגאוסיאני s - קריאת הגלאי t - זמן הרצה V - נפח שנאסף smax, tmax, Vmax - נפח, זמן, קריאת גלאי בנקודת המקסימום tmax - סטיית תקן (6.1) ניתוחכרומטוגרמות עמוד7 פרק 6

  8. סה”כ מומס בעמוד: (6.2) השבה Re השבה של מומס כמות מומס שיצאה עד זמן t: עמוד8 פרק 6

  9. רוחב השיא (6.4) דרגת טיהור Pu כושר הפרדה ודרגת טיהור (6.3) כושר הפרדה - רזולוציה Rs שיאים מופרדים Rs>1.6 עמוד9 פרק 6

  10. ויטמינים, חלבונים, אנטיביוטיקה אינטראקציותהידרופוביות כרומטוגרפיה הידרופובית Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC ויטמינים,פפטידים חלבונים, אנטיביוטיקה אינטראקציותהידרופוביות פאזה הפוכה Reveres Phase Chromatography, RPC סוגי תהליכיכרומטוגרפיה שינויים בעיכוב נובעים מהבדלי... סוגכרומטוגרפיה ישומים חלבונים, סילוק יונים גודל המולקולה ג’ל פילטרציה Gel Filtration Gel Permeation Chromatography,GPC Size Exclusion Chromatography, SEC עמוד10 פרק 6

  11. חלבונים, חומצות אורגניות אינטראקציות חשמליות חילוף יונים Ion Exchange Chromatography, IEC פפטידים, חלבונים אינטראקציות ספציפיות (ביולוגיות) כרומטוגרפיתזיקה Affinity Chromatography חלבונים אינטראקציות שונות Perfusion Chromatography סוגי תהליכיכרומטוגרפיה(המשך) שינויים בעיכוב נובעים מהבדלי... סוגכרומטוגרפיה ישומים חלבונים, DNA, RNA אינטראקציות לא-ספציפיות ספיחה Adsorption Chromatography עמוד11 פרק 6

  12. חלקיק נקבובי Perfusion Chromatography חומרי מילויPacking Materials ג’ל (GPC) עמוד12 פרק 6

  13. עיכוב: הבדלי גודל • נפוץ לקביעת משקל מולקולרי • שימוש בדוגמאות כיול • מתאם שכיח: Bio-Gel (Polyacrylamid) Sephadex (Dextran) Agarose Styragel (Polystyren) ג’ל - פילטרציה ג’ל פילטרציה Gel Filtration Gel Permeation Chromatography,GPC Size Exclusion Chromatography, SEC פרק 6 עמוד13

  14. אינטראקציות חזקות • alkanes קשורים למצע נייח (8-18פחמנים) • אלואנטאורגני כרומטוגרפיתפאזה הפוכה Reveres Phase Chromatography, RPC כרומטוגרפיה הידרופוביתפאזה הפוכה עיכוב: אינטראקציותהידרופוביות ביו-פולימריםוביוכימיקלים הידרופוביים • אינטראקציות חלשות • קבוצות butyl או phenyl קשורות למצע נייח • אלואנטמימי, ריכוז מלח גבוה כרומטוגרפיה הידרופובית Hydrophobic Interaction Chromatography, HIC פרק 6 עמוד14

  15. - - - - - - - + + + + + + חילוף יוניםIon-Exchange Chromatography עיכוב: אינטראקציות חשמליות חלבונים, חומצותאמינו, חומצות אורגניות חילוף (הפיך) של יונים נגדיים ביונים בעלי סימן זהה מהפאזה הניידת יונים נגדיים Counter ions מחליף קטיונים יונים קשורים Fixed ions פרק 6 עמוד15

  16. צעד נוסף לשיפור ההפרדה... • שינויי בהרכב הממס (Gradient methods) מחלף יונים - הגדלה הדרגתית של ריכוז מלח כרומטוגרפיות הידרופוביות - שינוי ריכוזי הממיסיםבאלואנט • הזרקת תוספים (Displacement chromatography) dextran sulfate carboxymethyl strach imminodiacetic acid (IDA) פרק 5 עמוד16

  17. מריץ (אלואנט) כרומטוגרפיתזרימה רדיאליתRadial flow chromatography פרק 5 עמוד17

  18. זרימה רדיאלית • יתרונות • הקטנת מפל לחץ • זרימה אחידה בעמוד • רגישות נמוכה • לזיהומים מוצקים הגדלת הספיקה בנפח עמוד נתון (יעילות כלכלית גבוהה יותר) פרק 5 עמוד18

  19. גימלון כרומטוגרפיתזרימה רדיאלית אין שינוי בקוטר העמוד ( “הדרך” שעובר הנוזל הזורם במצע הנקבובי) הגדלת אורך העמוד גימלון לינארי! הגדלת נפח העמוד, נפח הדוגמא, הספיקה ונפחהאלואנטבאותו פקטור - בלי שינוי בזמן ההפרדה פרק 5 עמוד19

  20. זמן שהייה מיקום איסוף התוצר כרומטוגרפיהרציפה Annular Chromatography אין מגבלה על סוג המילוי פרק 5 עמוד20

  21. עמודיכרומטוגרפיה תעשייתיים זרימה רדיאלית פרק 5 עמוד21

  22. סיכום חלק ראשון • תאור תהליכיכרומטוגרפיהבעמוד • עקרון הפעולה • עיכוב • חומרי מילוי שונים • תאור כמותי שלכרומטוגרמות: פילוגגאוסיאני • כלים לחישוב כושר הפרדה, השבה ודרגת טיהור פרק 6 עמוד22

More Related