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液相色谱新进展 －超高效液相色谱

液相色谱新进展 －超高效液相色谱. 一、定义：. Waters 公司的 UPLC: Ultra Performance Liquid Chromatography ( 超高效液相色谱） Agilent 公司的 RRLC: Rapid Resolution Liquid Chromatography （快速高分离度液相色谱）. 用细粒径填料（ sub-2μm) 、细内径柱子获得柱效高达 (100,000-300,000/m) 的液相色谱技术，简称超高效液相色谱. 二、基本原理. 为什么关注小颗粒色谱填料？.

kamil
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液相色谱新进展 －超高效液相色谱

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Presentation Transcript

  1. 液相色谱新进展－超高效液相色谱

  2. 一、定义： • Waters公司的UPLC: Ultra Performance Liquid Chromatography (超高效液相色谱） • Agilent公司的RRLC: Rapid Resolution Liquid Chromatography （快速高分离度液相色谱） 用细粒径填料（sub-2μm) 、细内径柱子获得柱效高达(100,000-300,000/m)的液相色谱技术，简称超高效液相色谱

  3. 二、基本原理 为什么关注小颗粒色谱填料？ 根据Van Deemter方程H=A+B/v+Cv 颗粒度越小，HETP越低，柱效越高，分离度越好 对于小颗粒，通过高流速获得高分离速度 对于小颗粒，提高流速时HETP不会提高－提高分离速度

  4. 三、优缺点： 优点： • 节约时间 • 节约溶剂 • 超高灵敏度 • 超高分离度 缺点： • 高压力 Agilent RRLC 约450bar Waters UPLC 约700bar

  5. 西洋参成分的分离比对 HPLC 4.6×250mm，5μm UPLC 2.1×50mm，1.7μm

  6. 1、提高分离速度 • 小颗粒填料的速度优势 • 分离度RS∝L/ dp，即保持L/ dp，同比缩短柱长,以提高分离速度 • 提高流速－小颗粒填料的保持柱效，不降低分离度 • 提高速度的辅助手段 • 温度

  7. 不同色谱柱和温度的分离速度比对

  8. 2、提高分离度和灵敏度 • 提高L/ dp（ dp变小）－提高柱效－提高分离度 • 对于4.6×150mm，5μm色谱柱， L/ dp＝30 • 对于4.6×150mm，1.8μm色谱柱， L/ dp＝83.3 -改善分离度，保持分离速度 • 对于4.6×100mm，1.8μm色谱柱， L/ dp＝55.6 -改善分离度，提高速度

  9. 分离度：颗粒对药物杂质分离的影响

  10. 改善分离度和灵敏度

  11. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 1、分离目标化合物： 根据中国药典（2005年版）确定分离人参皂苷Rg1、Re与Rb1，结构如下：

  12. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 2、药典色谱条件 样品：西洋参提取液 仪器：Agilent 1100高效液相色谱系统 流动相：以乙腈为流动相A，以0.1％磷酸为流动相B，按下表进行梯度洗脱 色谱柱：ZORBAX SB C18 4.6×150 mm，5μm 柱温：40 ºC 流速：1.0 mL/min 检测波长：203 nm 进样量：5μL

  13. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 3、色谱柱的选择： HPLC色谱柱规格: 4.6 x150 mm，5μm , (L/dp=30)。 根据L/dp值初步确定RRLC色谱柱规格：4.6 x 50mm，1.8μm， (L/dp≈28） 故可以获得相近的分离效率，但分离速度大大提高，并且可以改善灵敏度。

  14. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 4、方法转换的初步参数确定 在Method Translator相应栏目中输入原始HPLC条件，包括HPLC色谱柱规格、进样量、流速、梯度表等参数，并选择RRLC色谱柱的规格，即可获得根据洗脱柱体积相同原则折算而得的RRLC分离的初步参数。

  15. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 五、方法优化： 由于人参皂苷Rg1、Re未达到基线分离，可通过温度进一步优化分离

  16. 应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 6、RRLC色谱条件确定： RRLC色谱条件： Agilent 1200高分离度快速液相色谱(RRLC)，色谱柱： ZORBAX SB C18 4.6x50mm, 1.8um 流动相：A: 0.1% H3PO4， B: 乙腈， 梯度分离 柱温：25ºC 流速：2mL/min 检测波长：203nm 进样量：5μL

  17. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 7、西洋参分析：HPLC与RRLC分离色谱图比较

  18. 四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪）四、应用实例：西洋参的液相色谱分析(Agilent液相色谱仪） 8、结论 • 在RRLC系统上可以实现HPLC分离,此外还可以大幅度缩短分析时间，降低溶剂消耗，大大提高工作效率。 • 与HPLC相比，在保持相同进样量的前提下，使用小颗粒填料的RRLC可以显著改善分离灵敏度。 • 温度对RRLC分离影响较大，可通过调节温度改善分离度，或加快分离速度，节约时间

  19. 五、展望及结语 • 填料粒径进一步减小增大柱效，进一步提高灵敏度和通量。 • 提高温度（流动相的粘度和温度成正比，适当的提高温度可进一步降低压力，同时温度升高有利于传质、加快吸附脱附平衡均可以带来柱效的进一步提高。但要注意安全性。） • 总之，随着商品仪器的应用及逐渐推广，超高效液相色谱将成为复杂样品分析的一个强有力的工具。

  20. 谢谢! Thank you for your attention

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