slide1
Download
Skip this Video
Download Presentation
Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009)

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 15

Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009) - PowerPoint PPT Presentation


  • 108 Views
  • Uploaded on

Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent. Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009). Pendahuluan. Glycogen Storage. Glikogen  penyimpan karbohidrat Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial )

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009)' - jonny


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1
Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent

Dibawakan Oleh :

Mastura (20504017)

Merry (20504009)

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

pendahuluan
Pendahuluan
  • Glycogen Storage

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide3

Glikogen  penyimpan karbohidrat

      • Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial )
      • Glikogen  jika glukosa  ( fase stationer )
  • Saccharomyces cerevisiae Snf1 kinase homolog dengan mamalian AMP-activated protein kinase (AMPK)
  • Keduanya berperan dalam regulasi metabolisme glikogen

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide4
Snf1 kinase dan AMPK
      • Catalytic subunit : -subunit
      • Regulatory subunit : -subunit
      • Mediates heterotrimer formation : -subunit
  • Snf1 kinase
      • -subunit : Snf1
      • -subunit : Snf4
      • -subunit : Gal83, Sip1, Sip2
  • Gal83 -subunit  memediasi interaksi Snf1 dan Sip4

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

latar belakang
Latar Belakang
  • AMPK dan Snf1 kinase  penting untuk regulasi metabolisme glikogen
  • -subunit AMPK terdiri dari N-isoamylase domain  glikogen & enzim percabangan
  • Contoh :
  • Mutasi -subunit mempengaruhi glycogen storage  glycogen storage disease

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

tujuan
Tujuan
  • Untuk menentukan peran glycogen-binding domain pada -subunit in vivo
  • Untuk mengetahui pengaruhnya terhadap regulasi metabolisme glikogen
  • Menentukan mekanisme yang terjadi antara glycogen-binding domain dengan aktivitas Snf1 kinase/ AMPK

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

metodologi penelitian
Metodologi Penelitian
  • Strains and genetic methods
  • Plasmids
  • Ekspresi GBD Gal83 & Sip2 pada bakteri
  • S. cerevisiae strains
  • Medium yeast extract-peptone-dextrose
  • pRT12, pHW33, pHW39, pHW40  Gal83
  • pHW30, pHW35, pHW38  Sip2
  • Kultur ditumbuhkan (OD 600 nm)  ekspresi protein  pengambilan sel (sentrifugasi)  dilisis (PBS)  lisat (sentrifugasi dan kromatografi pada Ni-agarose

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide8

Uji Pengikatan Glikogen

  • Uji Kandungan Glikogen
  • Immunoblot analysis
  • Microscopy
  • Glycogen-binding domain Gal83 atau Sip2 murni diinkubasi  sentrifugasi  supernatan dihilangkan, pellet dicuci identifikasi fraksi dengan elektroforesis  immunoblotting
  • Inokulasi kultur mid-log sentrifugasi  resuspensi dlm sodium karbonat  ditempatkan dalam heating block  glukosa yang dilepaskan dihitung menggunakan oksidasi glukosa oksidase
  • Protein dipisahkan oleh SDS-Page  dideteksi oleh anti-GFP antibodi
  • Nikon Eclipse E800 fluorescence microscope

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide9

Sel ditumbuhkan dalam SC  inkubasi  filtrasi  kromatografi  uji aktivitas melalui fosforilasi SAMS peptide

  • Kinase assays
  • -Galactosidase assays
  • Preparation of RNA and Northern blot analysis
  • Transforman  SC glukosa  SC gliserol  Aktivitas -Galactosidase diuji
  • RNA diendapkan dengan etanol  elektroforesis  dilacak dengan 32P-labeled DNA

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

hasil penelitian
Hasil Penelitian
  • Mutasi Gal83 & Sip2 menghasilkan Gal83W184A,R214Q dan Sip2W186A,R216Q
  • Mutasi residu pada GBD meniadakan pengikatan glikogen

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide11
Double mutasi sip2gal83  akumulasi glikogen 
  • Mutasi Gal83 GBD  akumulasi glikogen 

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide12
Level protein
  • Distribusi nukleoplasmik
  • Aktivitas katalitik Snf1

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

slide13
Mutasi Gal83 meningkatkan ekspresi RNA yang mengkode Glycogen Synthase
  • Mutasi GBD mempengaruhi Snf1/Gal83 pada sel yang tidak mengandung glikogen

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

kesimpulan
Kesimpulan
  • Mutasi Gal83 GBD mempengaruhi secara positif fungsi Snf1/Gal83 kinase
  • GBD mengatur fungsi Snf1/Gal83 kinase dengan mekanisme yang tidak bergantung pada glikogen
  • Adanya kemungkinan bahwa domain mengikat molekul lain yang mirip glikogen yang dapat mengatur aktivitas katalitik

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

t erima k asih
Terima Kasih

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)

ad