Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Gl...
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 15

Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009) PowerPoint PPT Presentation


  • 88 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent. Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009). Pendahuluan. Glycogen Storage. Glikogen  penyimpan karbohidrat Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial )

Download Presentation

Dibawakan Oleh : Mastura (20504017) Merry (20504009)

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

Mutasi Pada Gal83 Glycogen-Binding Domain Mengaktifkan Snf1/Gal83 Kinase Pathway Dengan Mekanisme Glycogen-Independent

Dibawakan Oleh :

Mastura (20504017)

Merry (20504009)

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


Pendahuluan

Pendahuluan

  • Glycogen Storage

27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

  • Glikogen  penyimpan karbohidrat

    • Glikogen  jika glukosa  ( fase eksponensial )

    • Glikogen  jika glukosa  ( fase stationer )

  • Saccharomyces cerevisiae Snf1 kinase homolog dengan mamalian AMP-activated protein kinase (AMPK)

  • Keduanya berperan dalam regulasi metabolisme glikogen

  • 27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Snf1 kinase dan AMPK

      • Catalytic subunit : -subunit

      • Regulatory subunit : -subunit

      • Mediates heterotrimer formation : -subunit

    • Snf1 kinase

      • -subunit : Snf1

      • -subunit : Snf4

      • -subunit : Gal83, Sip1, Sip2

    • Gal83 -subunit  memediasi interaksi Snf1 dan Sip4

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Latar belakang

    Latar Belakang

    • AMPK dan Snf1 kinase  penting untuk regulasi metabolisme glikogen

    • -subunit AMPK terdiri dari N-isoamylase domain  glikogen & enzim percabangan

    • Contoh :

    • Mutasi -subunit mempengaruhi glycogen storage  glycogen storage disease

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Tujuan

    Tujuan

    • Untuk menentukan peran glycogen-binding domain pada -subunit in vivo

    • Untuk mengetahui pengaruhnya terhadap regulasi metabolisme glikogen

    • Menentukan mekanisme yang terjadi antara glycogen-binding domain dengan aktivitas Snf1 kinase/ AMPK

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Metodologi penelitian

    Metodologi Penelitian

    • Strains and genetic methods

    • Plasmids

    • Ekspresi GBD Gal83 & Sip2 pada bakteri

    • S. cerevisiae strains

    • Medium yeast extract-peptone-dextrose

    • pRT12, pHW33, pHW39, pHW40  Gal83

    • pHW30, pHW35, pHW38  Sip2

    • Kultur ditumbuhkan (OD 600 nm)  ekspresi protein  pengambilan sel (sentrifugasi)  dilisis (PBS)  lisat (sentrifugasi dan kromatografi pada Ni-agarose

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Uji Pengikatan Glikogen

    • Uji Kandungan Glikogen

    • Immunoblot analysis

    • Microscopy

    • Glycogen-binding domain Gal83 atau Sip2 murni diinkubasi  sentrifugasi  supernatan dihilangkan, pellet dicuci identifikasi fraksi dengan elektroforesis  immunoblotting

    • Inokulasi kultur mid-log sentrifugasi  resuspensi dlm sodium karbonat  ditempatkan dalam heating block  glukosa yang dilepaskan dihitung menggunakan oksidasi glukosa oksidase

    • Protein dipisahkan oleh SDS-Page  dideteksi oleh anti-GFP antibodi

    • Nikon Eclipse E800 fluorescence microscope

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Sel ditumbuhkan dalam SC  inkubasi  filtrasi  kromatografi  uji aktivitas melalui fosforilasi SAMS peptide

    • Kinase assays

    • -Galactosidase assays

    • Preparation of RNA and Northern blot analysis

    • Transforman  SC glukosa  SC gliserol  Aktivitas -Galactosidase diuji

    • RNA diendapkan dengan etanol  elektroforesis  dilacak dengan 32P-labeled DNA

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Hasil penelitian

    Hasil Penelitian

    • Mutasi Gal83 & Sip2 menghasilkan Gal83W184A,R214Q dan Sip2W186A,R216Q

    • Mutasi residu pada GBD meniadakan pengikatan glikogen

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Double mutasi sip2gal83  akumulasi glikogen 

    • Mutasi Gal83 GBD  akumulasi glikogen 

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Level protein

    • Distribusi nukleoplasmik

    • Aktivitas katalitik Snf1

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Dibawakan oleh mastura 20504017 merry 20504009

    • Mutasi Gal83 meningkatkan ekspresi RNA yang mengkode Glycogen Synthase

    • Mutasi GBD mempengaruhi Snf1/Gal83 pada sel yang tidak mengandung glikogen

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    Kesimpulan

    Kesimpulan

    • Mutasi Gal83 GBD mempengaruhi secara positif fungsi Snf1/Gal83 kinase

    • GBD mengatur fungsi Snf1/Gal83 kinase dengan mekanisme yang tidak bergantung pada glikogen

    • Adanya kemungkinan bahwa domain mengikat molekul lain yang mirip glikogen yang dapat mengatur aktivitas katalitik

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


    T erima k asih

    Terima Kasih

    27 April 2005/ Metabolisme Glikogen/ Kel I/ Mastura (20504017)-Merry (20504009)


  • Login