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bDNA 검사와 Lamivudine

bDNA 검사와 Lamivudine . 2006 년 9 월 20 일 손 범 세. B 형 간염 . 간암환자의 50~60% 가 B 형간염이 원인 B 형 간염 보유자 5~7% , 220 만명 당뇨나 고혈압처럼 평생 관리 검사 결과에 따라 보험적용. 개 요. Lamivudine 을 장기적으로 치료 시 YMDD 변 이형 발생 라미부딘 치료를 감소시킨다 . 따라 서 조기에 YMDD 변이형의 발생을 예상할 수 있을 경우 그 치료효과를 높일 수 있다. YMDD 변이형이란 ?.

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bDNA 검사와 Lamivudine

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Presentation Transcript

  1. bDNA 검사와 Lamivudine 2006년 9 월 20 일 손 범 세

  2. B형 간염 • 간암환자의 50~60%가 B형간염이 원인 • B형 간염 보유자 5~7% , 220만명 • 당뇨나 고혈압처럼 평생 관리 • 검사 결과에 따라 보험적용 bDNA 정량검사법 소개

  3. 개 요 Lamivudine을 장기적으로 치료 시 YMDD 변 이형 발생 라미부딘 치료를 감소시킨다. 따라 서 조기에 YMDD변이형의 발생을 예상할 수 있을 경우 그 치료효과를 높일 수 있다 bDNA 정량검사법 소개

  4. YMDD 변이형이란? B형 간염 바이러스의 증식을 담당하는 DNA polymerase 라는 효소의 아미노산배열 중에 YMDD라고 약칭하는 부분이 있는데 이 곳의 M에 해당되는 methionone이라는 아미노산이 valine 이나 isoleucine 등으로 바뀌게 되면 3차원적인 구조에 변형이 오면서 라미부딘 약제가 달라붙기 어려워진다

  5. 검사 방법 • HBV-PCR (정성 검사) • bDNA (정량검사) • Lamivudine 검사 (YMDD 변이형검사) bDNA 정량검사법 소개

  6. Virus, bacterium or cell Target RNA or DNA PCR Add primers & enzymes Copies (DNA) One detection probe per amplified copy HBV-PCR bDNA 정량검사법 소개

  7. bDNA 검사 • bDNA법은 사람의 혈청(또는 혈장)에서 B형간염 바이러스 DNA를 정량하기 위해 sandwich nucleic acid hybridization법을 이용한다. • HBV의 genomic DNA가 바이러스에서 방출, denaturation된 후, 합성 올리고뉴클레오타이드probe들에 의해 순차적으로 결합한다. • Alkaline phospatase라벨 probe와dioxytane으로 이루어진 substrate가 결합하여, 화학발광(chemiluminescence)을 일으킨다. • 이 방출된 빛 (RLU)은 HBV DNA의 양과 비례 관계에 있으므로, 분석 결과는 스탠다드의 표준곡선을 기준으로 나타난다. bDNA 정량검사법 소개

  8. bDNA 3.0 Assay Technology

  9. O O OCH3 OPO32- 주요 시약의 역할 • Capture probe : HBV genomic DNA를 포획 • Target probe : 포획된 DNA위에 붙어, 다음 가지(branch)가 붙을 수 있는 교량 역할 • Dextran Sulphate : branch들이 순차적으로 붙을 수 있도록 도와주는 역할 (방해요소들의 비특이적 결합을 감소시킴) • Pre-Amplifier probe : 첫번째 증폭 가지. Target probe에 붙음 • Amplifier probe : 두번째 증폭 가지. 하나의 Pre-Amp 가지에 14개씩 붙음 • Alakaline Phosphatase : 라벨 프로브 • Dioxytane : 기질( substrate) bDNA 정량검사법 소개

  10. 주요 사항 • Standards A,B,C,D,E & F • Controls : Negative, Low Positive, High Positive • 장비에 걸 수 있는 최대 검체 수 : 168검체 • 총 Run 시간 : 20 시간 (15시간 night incubation) • 필요한 검체량(혈청 또는 혈장) : 50 uL • Report 단위 : IU/mL, copies/mL, 전산작업으로 Pg/mL 단위 추가됨 • PCR과 달리, Enzyme 반응이 전혀 없고 사전 검체 준비 작업(DNA 추출) 없음 bDNA 정량검사법 소개

  11. 측정범위 • 측정 범위 : 4. 7 log Lower Limit = 2,000copies/mL (약 0.007pg/mL) High Limit = 100,000,000copies/mL (약 360 pg/mL) HBV concentration(log copies/mL) 1010 Dilution (if needed)? 1009 1008 1007 HBV 3.0 Neat 1006 1005 1004 Concentration ? 1003 1002 10 VERSANT ® HBV 3.0 VERSANT ® HBV 1.0 Digene bDNA 정량검사법 소개

  12. 통 계 • 2006년 1월 ~ 7 월까지 검사 : 월 평균 260건 2. 1억 이상 건수 : 263 건 3. HBeAg 양성율 : 87% bDNA 정량검사법 소개

  13. 처방 • Zeffix(Lamivudine): 40 % • Zeffix & Hepsera : 10% (YMDD변이형) • GOT,GPT 정상으로 처방 없음 :20% (신안) • 보조제(Ursa,Legalon 처방으로 대체):20% • 타 병원으로 이행 : 10% bDNA 정량검사법 소개

  14. Lamivudine 효능 • Hbe Ag 음성-e 항체 형성 • HBV-DNA <2000 Copies • 간효소 수치 정상화 • 간조직 소견 개선 bDNA 정량검사법 소개

  15. Lamivudine 약제의 단점 • 장시간 사용시 내성을 가진 바이러스가 생길 수 있다는 점 • 1년내: 20~30% • 2년내: 40% • 3년내: 50%이상 • 교차 내성으로 인해 비슷한 제재의 치료제도 함께 내성이 생김 bDNA 정량검사법 소개

  16. 결론 • 라미부딘 검사의(RFMP) 병행으로 조기에YMDD 변이형을 예상하여 치료 효과를 극대화 하여 환자의 부담을 줄여 줄수 있을 것이라 사료됩니다. bDNA 정량검사법 소개

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