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bDNA 검사와 Lamivudine . 2006 년 9 월 20 일 손 범 세. B 형 간염 . 간암환자의 50~60% 가 B 형간염이 원인 B 형 간염 보유자 5~7% , 220 만명 당뇨나 고혈압처럼 평생 관리 검사 결과에 따라 보험적용. 개 요. Lamivudine 을 장기적으로 치료 시 YMDD 변 이형 발생 라미부딘 치료를 감소시킨다 . 따라 서 조기에 YMDD 변이형의 발생을 예상할 수 있을 경우 그 치료효과를 높일 수 있다. YMDD 변이형이란 ?.

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Presentation Transcript
Bdna lamivudine

bDNA 검사와 Lamivudine

2006년 9 월 20 일

손 범 세


B형 간염

  • 간암환자의 50~60%가 B형간염이 원인

  • B형 간염 보유자 5~7% , 220만명

  • 당뇨나 고혈압처럼 평생 관리

  • 검사 결과에 따라 보험적용

bDNA 정량검사법 소개


개 요

Lamivudine을 장기적으로 치료 시 YMDD 변

이형 발생 라미부딘 치료를 감소시킨다. 따라

서 조기에 YMDD변이형의 발생을 예상할 수

있을 경우 그 치료효과를 높일 수 있다

bDNA 정량검사법 소개


YMDD 변이형이란?

B형 간염 바이러스의 증식을 담당하는 DNA polymerase 라는 효소의 아미노산배열 중에 YMDD라고 약칭하는 부분이 있는데 이 곳의 M에 해당되는 methionone이라는 아미노산이 valine 이나 isoleucine 등으로 바뀌게 되면 3차원적인 구조에 변형이 오면서 라미부딘 약제가 달라붙기 어려워진다


검사 방법

  • HBV-PCR (정성 검사)

  • bDNA (정량검사)

  • Lamivudine 검사 (YMDD 변이형검사)

bDNA 정량검사법 소개


Hbv pcr

Virus, bacterium or cell

Target RNA or DNA

PCR

Add primers & enzymes

Copies (DNA)

One detection probe per amplified copy

HBV-PCR

bDNA 정량검사법 소개


bDNA 검사

  • bDNA법은 사람의 혈청(또는 혈장)에서 B형간염 바이러스 DNA를 정량하기 위해 sandwich nucleic acid hybridization법을 이용한다.

  • HBV의 genomic DNA가 바이러스에서 방출, denaturation된 후, 합성 올리고뉴클레오타이드probe들에 의해 순차적으로 결합한다.

  • Alkaline phospatase라벨 probe와dioxytane으로 이루어진 substrate가 결합하여, 화학발광(chemiluminescence)을 일으킨다.

  • 이 방출된 빛 (RLU)은 HBV DNA의 양과 비례 관계에 있으므로, 분석 결과는 스탠다드의 표준곡선을 기준으로 나타난다.

bDNA 정량검사법 소개



O

O

OCH3

OPO32-

주요 시약의 역할

  • Capture probe : HBV genomic DNA를 포획

  • Target probe : 포획된 DNA위에 붙어, 다음 가지(branch)가 붙을 수 있는 교량 역할

  • Dextran Sulphate : branch들이 순차적으로 붙을 수 있도록 도와주는 역할 (방해요소들의 비특이적 결합을 감소시킴)

  • Pre-Amplifier probe : 첫번째 증폭 가지. Target probe에 붙음

  • Amplifier probe : 두번째 증폭 가지. 하나의 Pre-Amp 가지에 14개씩 붙음

  • Alakaline Phosphatase : 라벨 프로브

  • Dioxytane : 기질( substrate)

bDNA 정량검사법 소개


주요 사항

  • Standards A,B,C,D,E & F

  • Controls : Negative, Low Positive, High Positive

  • 장비에 걸 수 있는 최대 검체 수 : 168검체

  • 총 Run 시간 : 20 시간 (15시간 night incubation)

  • 필요한 검체량(혈청 또는 혈장) : 50 uL

  • Report 단위 : IU/mL, copies/mL, 전산작업으로 Pg/mL 단위 추가됨

  • PCR과 달리, Enzyme 반응이 전혀 없고 사전 검체 준비 작업(DNA 추출) 없음

bDNA 정량검사법 소개


측정범위

  • 측정 범위 : 4. 7 log

    Lower Limit = 2,000copies/mL (약 0.007pg/mL)

    High Limit = 100,000,000copies/mL (약 360 pg/mL)

HBV concentration(log copies/mL)

1010

Dilution

(if needed)?

1009

1008

1007

HBV 3.0

Neat

1006

1005

1004

Concentration ?

1003

1002

10

VERSANT ®

HBV 3.0

VERSANT ®

HBV 1.0

Digene

bDNA 정량검사법 소개


통 계

  • 2006년 1월 ~ 7 월까지 검사

    : 월 평균 260건

    2. 1억 이상 건수 : 263 건

    3. HBeAg 양성율 : 87%

bDNA 정량검사법 소개


처방

  • Zeffix(Lamivudine): 40 %

  • Zeffix & Hepsera : 10% (YMDD변이형)

  • GOT,GPT 정상으로 처방 없음 :20% (신안)

  • 보조제(Ursa,Legalon 처방으로 대체):20%

  • 타 병원으로 이행 : 10%

bDNA 정량검사법 소개


Lamivudine
Lamivudine 효능

  • Hbe Ag 음성-e 항체 형성

  • HBV-DNA <2000 Copies

  • 간효소 수치 정상화

  • 간조직 소견 개선

bDNA 정량검사법 소개


Lamivudine1
Lamivudine 약제의 단점

  • 장시간 사용시 내성을 가진 바이러스가

    생길 수 있다는 점

  • 1년내: 20~30%

  • 2년내: 40%

  • 3년내: 50%이상

  • 교차 내성으로 인해 비슷한 제재의 치료제도 함께 내성이 생김

bDNA 정량검사법 소개


결론

  • 라미부딘 검사의(RFMP) 병행으로 조기에YMDD 변이형을 예상하여 치료 효과를 극대화 하여 환자의 부담을 줄여 줄수 있을 것이라 사료됩니다.

bDNA 정량검사법 소개