405
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LASERS. FUENTES. 543. 405. 633. 405. 488. UV. UNIDAD DE BARRIDO. No tocar!! (Se desalinean los lásers ). X. X. Llave Vertical (dos posiciones, una para cada set de lásers). Abajo : 405/488/543 Arriba : 633/488/543. Llave de Espejo Dicroico. Canal 2. Canal 1. >570. < 570.

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405

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Presentation Transcript


405

LASERS

FUENTES

543

405

633

405

488

UV


405

UNIDAD DE BARRIDO

No tocar!! (Se desalinean los lásers).

X

X

Llave Vertical

(dos posiciones, una para cada set de lásers)

Abajo : 405/488/543

Arriba : 633/488/543


405

Llave de Espejo Dicroico

Canal 2

Canal 1

>570

< 570

Llave de filtros -

adentro: se interpone el filtro

afuera: no se filtra

>510

430 - 460

Llave

de filtros

560-600

>660

Laser 488

Laser 633

Llave

vertical

Laser

Laser

Laser 405 (UV)

Objetivo

Plano del preparado

Arriba

Abajo


405

En suma:

Llave Vertical

Dos posiciones, una para seleccionar con qué set de lásers se va excitar la muestra:

Abajo : 405 – 488 – 543

Arriba : 633 – 488 – 543

Llave de Espejo Dicroico

Tres posiciones, para seleccionar con cuál canal se va a detectar la emisión:

- Adentro: Canal 1

- Afuera: Canal 2

- Intermedia: Ambos (< 570 va a Canal 1 y >570 va a Canal 2).

Llaves de filtros

Para filtrar la luz emitida según el espectro del fluoróforo.

Dos posiciones: adentro: se interpone el filtro

afuera: no se filtra

Los filtros instalados son:

Canal 1: 430-460 (por ej DAPI)Canal 2:560-600 (por ej. TRICT)

>510 (por ej. FICT)>660 (por ej. Cy5)

NOTAR QUE: Si está acostumbrado a chequear con el software la configuración, tenga en cuenta que para FICT y afines le va a seguir indicando los filtros 510 y 530, aunque ahora sólo usaremos el 510


405

Hay 10 combinaciones posiblesLas 7 combinaciones básicas y3 másLas 7 básicas se pueden combinar en simultaneo con luz transmitida


405

Llave de Espejo Dicroico: Afuera

Opción 1:

Quiero ver una marcación

Con texas red o similar (rojo)

Láser 543 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutter abierto (software)

Registro en canal 2(Llave Espejo Dicroico Afuera)

Filtro Rojo activo

560-600

Canal 2

>570

Filtro Rojo

(560-600)

Llave

vertical

objetivo

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Adentro

Opción 2:

Quiero ver una marcación

Con FITC o similar (verde/amarillo)

Laser 488 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutter abierto (software)

Registro en canal 1(Llave Espejo Dicroico Adentro)

Filtro Verde Activo

Canal 1

< 570

Laser 488

objetivo

>510

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Adentro

Canal 1

< 570

Opción 3:

Quiero ver azul (i.e. DAPI)

Laser UV prendido

Llave vertical abajo

Shutter abierto (software)

Registro en canal 1(Llave Espejo Dicroico Adentro)

Filtros azul

activo

Llave

vertical

Laser uv

objetivo

430 - 460

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Afuera

Opción 4:

Quiero ver Rojo lejano

Laser 633 prendido

Llave vertical para arriba

Shutters abierto (software)

Registro en canal 2(Llave Espejo Dicroico Afuera)

Filtro rojo lejano activo

Canal 2

>570

Filtro Rojo

(> 660)

Laser 633

Llave

vertical

Laser 610

633

objetivo

>660

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia

>660

>510

Canal 2

Canal 1

Opción 5:

Quiero ver doble marcado

FITC y Rojo lejano

Laser 633 prendido

Laser 488 prendido

Llave vertical para arriba

Shutters abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros rojo lejano y

verde activos

< 570

>570

Llave

vertical

Laser 488

Laser 633

objetivo

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia

Opción 6

(menos especifica que la anterior):

Quiero ver doble marcado

Con texas red o similar (rojo)

Y con FITC o similar (verde amarillo)

Laser 488 prendido

Laser 543 prendido

Llave vertical irrelevante

Shutters abiertos (software)

Registro en canal 1y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros Rojo y Verde activos

Canal 2

Canal 1

< 570

>570

560-600

>510

Laser 488

objetivo

Plano del preparado


405

Llave de Espejo Dicroico: Intermedia

Opción 7 :

Quiero ver texas red y

fluorescente azul (i.e. DAPI)

Decir los problemas

Laser UV (405) prendido

Laser 543 prendido

Llave vertical para abajo

Shutters abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2(Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros azul y rojo activos

Canal 2

Canal 1

< 570

>570

Laser 546

Llave

vertical

Laser UV

objetivo

560-600

Plano del preparado

430 - 460


Tres opciones mas dos de triple marcado y una de cu druple marcado

Tres opciones masDos de triple marcado y una de cuádruple marcado


405

Opción 8 (para triple marcado):

Quiero ver FITC, Rojo lejano y AZUL

Láser 633, 488 y UV (405) prendidos

Primera pasada

Shutters 633 y 488 abiertos (software)

Filtros rojo y verde activos

Llave vertical para arriba

Registro en canal 1 y 2 (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Segunda pasada

Llave vertical para abajo

Shutters UV (405) abierto (software)

Registro en canal 1 (Llave Espejo Dicroico Adentro)

Filtro Azul activo

Canal 2

Canal 1

< 570

>570

>660

Laser 488

Laser 633

Llave

vertical

Llave

vertical

Laser 610

>510

Laser UV

objetivo

objetivo

Plano del preparado

430 - 460


405

2 fluorocromos y luz transmitida


405

Canal 2

Canal 1

Opción 9 (poco probable porque TxR y Rojo lejano cerca):

Quiero ver texas red, rojo lejano y azul (i.e. DAPI)

Laser UV (405), 543 y 633 prendidos

Primera pasada

Llave vertical para abajo

Shutters UV, 543 abiertos (software)

Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros azul y rojo activos

Segunda pasada

Llave vertical para arriba

Shutter 633 abierto

Registro en canal 2:

(Llave Espejo Dicroico Afuera)

Filtro rojo activo

>570

< 570

560-600

Laser 546

Laser 633

Llave

vertical

Llave

vertical

430 - 460

Laser 610

Laser uv

Laser UV

objetivo

objetivo

>660

Plano del preparado


405

Canal 2

Canal 1

Opción 10: Ud es exigente y quiere ver todo

Todos los Lasers prendidos

Primera pasada

Shutters 546 y UV abiertos

Llave vertical para abajo

Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros Rojo y UV activos

Segunda pasada

Shutters 633 y 488 abiertos

Llave vertical para arriba

Registro en canal 1 y 2: (Llave Espejo Dicroico Intermedia)

Filtros rojo lejano y verde activos

o si Ud prefiere al revés

puede ser también

Llave

vertical

>570

< 570

Laser 488

Laser 546

Llave

vertical

Laser 610

Laser uv

Laser 633

Laser UV

objetivo

objetivo

Plano del preparado


405

Sequential scan con canales virtuales

3 o 4 fluorocromos y luz transmitida

NOTAR que el programa no acepta ingresar más de dos fluorocromos, el tercero se especifíca después (cuando se agrega el canal virtual)


405

6


405

Si tiene cualquier duda o piensa que necesita algún cambio de configuración CONSULTE a la COMISIÓN.

No haga cambios sin avisar al resto!! Así evitaremos pérdida de tiempo y hasta de preparados de todos.


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Por cualquier consulta a la hora de usar el microscopio me peden encontrar de lunes a jueves de 13 a 17hs y los viernes de 9 a 13 hs en el interno 123 del IIBCE. Mi mail es [email protected]

Marcela Díaz

Investigadora contratada Grado 1 del servicio de microscopia confocal

IIBCE


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