Varmeresistente bakterier i sygehusmiljøet
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 25

Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol PowerPoint PPT Presentation


  • 67 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Varmeresistente bakterier i sygehusmiljøet. Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol Statens Serum Institut. Antibiotikaresistensens onde cirkel. The good ( ydre overflader, ex hud ) MRSA The bad ( indre overflader, ex tarm ) ESBL , VRE

Download Presentation

Karen A. Krogfelt, prof Martin S. Bojer, phd-stud Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Varmeresistente bakterier i sygehusmiljøet

Karen A. Krogfelt, prof

Martin S. Bojer, phd-stud

Afd Mikrobiologi og Infektionskontrol

Statens Serum Institut


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Antibiotikaresistensens onde cirkel

B. Kristensen: ,SSI


Multiresistente bakterier

B. Kristensen, SSI

The good (ydre overflader, ex hud)

MRSA

The bad (indre overflader, ex tarm)

ESBL, VRE

The ugly ( stor spredningspotentiale, høj mortalitet)

NDM-1 og andre carbapenemase-dannende bakterier

CD027

Multiresistente bakterier


Varmeresistens

Varmeresistens ….


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Historien…

Gentamicin-resistente enterobakterier,

Hvidovre Hospital.

Mindst 10 infektioner over 2-år på intensivafdelingen

af multiresistente K. pneumoniae-isolater,

kapsel serotype K28

Ribotypning viste at isolater er klonale


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Virulens undersøgelse af C132-98

  • Adhæsion til humane epithelceller

  • Evne til at kolonisere tarmen

  • Infektionsevne i urinvejsinfektions model

  • C132-98 er ikke mere virulent end

  • andre kliniske K. pneumoniae isolater

  • (Struve & Krogfelt, 2004)


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Har C132-98 forøget evne

til at persistere i hospitalsmiljøet ?

C132-98 overlever ved høje temperaturer

58°C

Special-apparatur, f.eks. endoskoper, varmebehandles ved temperaturer

under 60 °C.

Temperatur kritisk for at minimere ”bacterial load” (Zühlsdorf et al., 2003)


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Varmeresistens gen ?

C132-98 har mange plasmider Er varmeresistens plasmid-kodet?

C132-98 plasmid DNA skæres med Sau3A

Ligeres med plasmid vektor

Plasmid-klon bibliotek i E. coli

Forskellige plasmid kloner


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Selektion af varmeresistens

Præ-selektion pool Gentagen varmeselektion Post-selektion pool

384 clones

1 klon?

Restriktionsanalyse af individuelle kloner Restriktionsanalyse af individuelle kolonier

4x 58 °C i 5 min

Én varmeresistent klon selekteret


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Varmeresistent klon (8.187 kb fragment fra K. pneumoniae C132-98)

93 aa 189 aa 967 aa 228 aa 152 aa 304 aa 295 aa

sHSP

Clp ATPase

hypothetical proteins

Putative metalloprotease

sHSP

Sekventering af varmeresistent klon

Clp ATPase genet (clpK) medierer varmeresistens


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

kloning af clpK

53°C

clpK-genet alene medierer varmeresistens


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

K. pneumoniae C132-98 varmeresistens = clpK?

53°C


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

ClpK på konjugative plasmid

C132 C132Δclp DH5α tetracycline resistant transformants

ClpK på største plasmid (ca.150 kb) i C132-98


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Protein destined for degradation

Clp hexamer

Catalyzed denaturation

Degradation

Binding

ClpP double-heptameric proteolytic complex

Translocation

(Modificeret fra Karzai et al. (2000))

Funktion af Clp ATPpaser

Funktionel gruppe I

Clp ATPaser involveret i ClpP-afhængig proteolyse (ClpA, ClpC, ClpX)


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Pore

Insoluble aggregate

ClpB cross-section

Interaction of ClpB, DnaK & protein aggregate

Extraction & threading of polypeptide

Spontaneous or chaperone mediated refolding

DnaK chaperone system

Release of unfolded polypeptide

(Modificeret fra Doyle et al. (2007))

Funktion af Clp ATPpaser

Funktionel gruppe II

ClpP uafhængige, medierer protein-disaggregering (ClpB)


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

P tripeptide

ClpA

ClpX

ClpC

Gram-negatives

Both

Gram-positives

N-terminal

AAA-1

AAA-2

C-terminal

AAA-2

C-terminal

N-terminal

AAA-1

M-domain

AAA-2

C-terminal

N-terminal

AAA-1

M-domain

AAA-2

C-terminal

ClpK er en ny type Clp ATPase

Funktionel gruppe I (ClpP afhængig proteolyse)

Funktionel gruppe II (protein disaggregering)

Both

ClpB

ClpK

N-terminal

AAA-1

M-domain

AAA-2

C-terminal

Bojer et al., 2012


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

clpK hos K. pneumoniae

105 kliniske isolater screenet med clpK specifik DNA probe

31 isolater positive!

ClpK er vidt udbredt blandt kliniske isolater (30%)


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

clpK- K. pneumoniae er varmeresistente

53°C

Bojer et al., 2010


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

clpK og K. pneumoniae biofilm

Varmebehandling af biofilm 5 min v. 58 °C

Bojer et al., 2011


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

clpK på ESBL-plasmider

Dansk samling af ESBL-positive K. pneumoniae blodisolater fra 2008

(Lester et al., 2010)

24% positive

Findes i større sjællandsk klon ST16

Bojer et al., 2012


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

clpK på ESBL-plasmider

+ tet, neo, sulpha, trim!!

53°C

53°C


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

I ALT

  • Varmeresistens i persisterende stamme på sygehus

  • Varmeresistens er plasmid-kodet og medieret af ny type af ClpATPase :clpK

  • clpK er hyppigt forekommende hos kliniske K. pneumoniaeisolater

  • Tydelig sammenhæng mellem tilstedeværelse af clpK og varmeresistens

  • clpK medierer varmetolerance også for biofilm

  • clpK er påvist på konjugerbart multiresistens-plasmid i bl.a. udbredt sjællandsk ST16-klon


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

I ALT

  • Tydelig sammenhæng mellem clpK og varmeresistens

  • clpK medierer varmetolerance også for biofilm

  • clpK er på konjugerbart multiresistens-plasmid


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

Hvad så?

  • Giver ClpK anledning til andre stress-fænotyper?

  • Findes clpK i andre relevante species?

  • Fødevare-sikkerhed/tilberedning?

  • Vask ved lav temperatur?

  • ClpK selektion??


Karen a krogfelt prof martin s bojer phd stud afd mikrobiologi og infektionskontrol

TAK

Deltagende parter

384 clones

1 klon

Anette M. Hammerum , SSI

Hanne Ingmer, KU-Sund

Dennis S. Hansen, Hillerød Sygehus

Carsten Struve, SSI

58 °C i 5 min


  • Login