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药理学实验. 药学实验教学中心 伍小波. 实验一 药理实验基础知识 实验二 不同给药途径对药物效应的影响 实验三 药物的协同作用和拮抗作用 实验四 硝酸士的宁 LD 50 的测定 实验五 利尿药对家兔尿量的影响. 实验一 药理实验基础知识. 一、目的 1. 掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力； 2. 更好地掌握药理学基本理论知识； 3. 培养科学思维. 二、 基本要求 1. 实验前： 预习实验内容并复习相关理论知识； 2. 实验时 ⑴ 实验器材要妥善保管； ⑵ 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； ⑶ 注意节约实验药品；
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药理学实验 药学实验教学中心 伍小波
实验一 药理实验基础知识 实验二不同给药途径对药物效应的影响 实验三 药物的协同作用和拮抗作用 实验四 硝酸士的宁LD50的测定 实验五 利尿药对家兔尿量的影响
实验一 药理实验基础知识 一、目的 1.掌握基本操作，锻炼动手、动脑能力； 2.更好地掌握药理学基本理论知识； 3.培养科学思维
二、基本要求 1.实验前：预习实验内容并复习相关理论知识； 2.实验时 ⑴ 实验器材要妥善保管； ⑵ 实验操作按步骤进行，仔细观察实验中出现的现象，实事求是地做好记录； ⑶ 注意节约实验药品； ⑷ 维持良好的课堂纪律。 3.实验后 ⑴ 各组同学将实验动物处死，实验台擦干净，将实验方盘送回准备室； ⑵ 值日生搞好实验室卫生，将死亡动物送至指定场所； ⑶ 书写实验报告。
三、实验报告的书写 1.题目 2.目的 3.原理 4.材料：实验动物，器材，药品 5.方法：用自己的语言简单扼要描述出来； 6.结果：要求真实、清楚； 7.讨论：将实验结果进行比较、分析；实验中有哪些不足之处；结果异常或失败的原因； 8.结论：将实验结果进行归纳总结，应带有提示性质。
四、实验设计基本原则 1.随机原则 使每一实验对象都有同等的机会抽到实验组或对照组中，除处理因素外其他因素尽可能均衡一致，从而抵消非实验因素的影响。 2.对照原则 ⑴ 组间对照：阴性对照，阳性对照，同因素不同水平对照； ⑵ 自身前后对照 3.重复原则
五、实验动物 1.动物的选择 ⑴ 小白鼠：适用于需大量动物的实验，如某些药物的筛选，半数致死量的测定。也较适用于避孕药实验、抗炎镇痛药实验、中枢神经系统药实验、抗肿瘤药及抗衰老药实验等。 ⑵ 大白鼠：比较适用于抗炎药物实验，血压测定、利胆、利尿药实验，也可用于进行亚急性和慢性毒性实验。
⑶ 豚鼠：因其对组胺敏感，并易于致敏，故常被选用于抗过敏药、平喘药和抗组胺药的实验。也常用于离体心脏、心房、肠管实验。又因它对结核敏感，常用于抗结核病药的实验。 ⑷ 家兔：常用于观察研究脑电生理作用，药物对小肠的作用。由于家兔体温变化敏感，也常用于体温实验，用于热原检查。 ⑸ 狗：狗是记录血压，呼吸最常用的大动物。还可利用狗做成胃瘘、肠瘘，以观察药物对胃肠蠕动和分泌的影响。在进行慢性毒性实验时，也常采用狗。
2.实验动物的编号 狗、兔等较大的动物可用特制的铝质号码牌固定在颈部或耳上。大鼠、小鼠如为白色可用黄色苦味酸在不同的体表标志上标记。
3.麻醉药的选择 ⑴局部麻醉：常采用2％普鲁卡因做皮下浸润注射，可用于局部手术。 ⑵全身麻醉： ①吸入麻醉：可将乙醚蘸在棉球上放入玻璃罩内，利用乙醚挥发的性质，经肺泡吸收，作用较快，适用于小鼠、大鼠短时间麻醉。 ②注射麻醉：常用戌巴比妥钠和乌拉坦。
4.动物捉拿及固定方法 ⑴ 小白鼠 右手抓住其尾部放在鼠笼盖铁纱网上，用左手拇指及食指沿其背部向前抓起颈背部皮肤，并以左手的小指、无名指固定其尾部，便可将小鼠固定在手上。 ⑵ 大白鼠 用右手提起尾部，放在粗糙面上，左手的拇指和食指捉其头部，其余三指夹住背腹部即可固定。
⑶ 豚鼠 豚鼠性情温和不咬人，用手握住躯干即可。 ⑷ 家兔 可用一手抓住家兔颈背部皮肤，将兔提起，另一手托其臀部，使兔呈坐位姿势。在进行仰位手术操作时，可用绳带将其四肢仰位捆绑在兔手术台上。头部用兔头固定夹固定。
5. 动物的给药方法 ⑴ 小白鼠 ① 灌胃法(i.g.)：以左手固定小鼠后，使其腹部朝上，颈部伸直。右手持配有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，再从舌面沿上腭进入食道。小鼠灌胃容量一般为0.1-0.3m1／10g。 ② 腹腔注射(i.p.)：以左手固定小鼠，方法同灌胃，右手持注射器，取30度角将针头从下腹部向头端刺入腹腔。进针部位不宜过高，刺入不宜太深，以免伤及内脏。小鼠腹腔注射量一般为0.1-0.3ml／l0g。
③ 皮下注射(s.c.)：用左手固定小鼠后，右手持注射器于拇指和食指捏起的皮肤处进针即可。 ④ 静脉注射(i.v.)：将小鼠置于特制的固定筒内或倒置的大漏斗下，让其尾部露出。用酒精或二甲苯涂擦尾部，或将鼠尾在50'C热水中浸泡半分钟使血管扩张。左手拉尾端，右手持注射器将针头刺入尾静脉，推入药液。
⑵ 家兔 ① 灌胃：需两人合作进行。一人取坐位用两腿夹持兔身，左手握家兔双耳，右手抓住两前肢。另一人将木制开口器横插家兔口内，压住舌头并固定之。取8号导尿管从开口器中部小孔插入食道。插管时如误入气管会出现动物的挣扎和呼吸困难。也可将导尿管的外端浸入水中，如有气泡吹出，表示插在气管内，此时应拔管重插。当判明导尿管在食道以内后，用注射器接通导尿管将药液推入。
② 皮下、腹腔注射：给药方法基本上同小鼠，唯针头可稍大，给药量可稍多。皮下与肌内为0.5-1.0/mg，腹腔为1.0-5.0ml/mg。 ③ 静脉注射：将家兔置固定箱内，拨去耳壳外缘的毛，选择一条比较明显的耳缘静脉，用酒精棉球涂擦皮肤，使血管显露。用左手拇指和中指捏住兔的耳尖部，食指垫在兔耳注射处的下面，右手持注射器，将针头从近耳尖处刺入，当确认针头在血管中后，将药液推入。
6.动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。6.动物的处死：大、小鼠通常用颈椎脱臼法处死。
实验二不同给药途径对药物效应的影响 一、实验目的 观察不同给药途径对药物效应的影响。 二、实验材料lml注射器、针头、小鼠灌胃针头、烧杯、普通天平、3.5％硫酸镁溶液
三、观察指标 动物活动增加情况、呼吸急促、反射亢进、震颤、惊厥及死亡时间、炭末推进率等。 四、实验方法 取禁食12h的昆明种小鼠3只，称重，分别标为对照组、灌胃组和腹腔注射组按以下给药： A：对照组：灌胃给生理盐水0.2ml/10g； B：灌胃组：灌胃给3.5％硫酸镁溶液0.2ml/10g； C：腹腔注射组：腹腔注射给3.5％硫酸镁溶液 0.2ml/10g。
鼠号 体重(g)药物及剂量 给药途径 动物反应 炭末推进率（%） A B C 五、实验结果 实验结果填入下表中 不同途径对药物效应的影响
六、思考讨论题 1、灌胃和腹腔注射给硫酸镁的效应有哪些不同？为什么？ 2、本次实验结果对临床用药有何提示？
实验三 药物的协同作用和拮抗作用 ［目的］ 观察激动剂与拮抗剂之间的相互作用 ［材料］ 兔子１只，0.05%硫酸阿托品注射液,0.1%盐酸肾上腺素注液,0.2%硝酸毛果芸香碱注射液
［方法］ １、取兔放于兔固定箱内固定，避免阳光直射眼睛，用毛剪剪去兔两眼睫毛，然后用瞳孔量尺测量瞳孔大小，连续三次，取平均值。 ２、在兔左眼滴入０.2%毛果芸香碱3滴，滴药时用姆指和食指将下眼睑提起,使成囊状,再用中指压住鼻泪管开口处,防止药液流入鼻泪管而不起作用，再用右手滴入药液。15分钟后再测量瞳孔大小，连续三次，取平均值，并进行比较。
3、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。3、滴入毛果芸香碱20分钟后，分别在两眼滴入0.1%肾上腺素3滴，15分钟后测量两瞳孔大小，连续3次，取平均值并进行比较。 4、滴入肾上腺素15分钟后，分别于两眼滴入0.05%硫酸阿托品注射液3滴，15分钟后观察两眼瞳孔变化，并测量其大小，连续3次，并取平均值。
项 目 正 常 毛果芸香碱 肾上腺素 阿托品 瞳孔 大小 左 眼 右 眼 ［记录］ ［讨论题］ 从实验结果中如何说明药物的协同作用和拮 抗作用？
实验四 硝酸士的宁LD50的测定 一、毒理学实验方法 1.急性毒性实验：一次性大剂量给予药物后观察药物的作用； 2.慢性毒性实验：长期连续多次给予中、小剂量的药物，观察动物一些器官的慢性受损程度； 3.特殊毒性实验：致癌，致畸，致突变，过敏反应等。
二、LD50的测定 1.优点：方法简单易行，所用动物小白鼠价廉易得； 2.方法 ⑴简化机率单位法：要求每组动物数相同，每组剂量呈等比关系，数据不能出现倒置； ⑵bliss法：计算准确 ⑶改进寇氏法、目测法等。
三、具体实验(以硝酸士的宁为例) ［目的］通过实验学习测定LD５０的方法、步骤和计算过程，了解急性毒性实验的常规方法。 ［材料］ 1.动物：昆明种小白鼠(体重18-22g，雌雄各半) 2.器材：注射器、鼠笼、天平 3.药品：0.008％硝酸士的宁溶液，苦味酸溶液。 硝酸士的宁是较强的致惊剂，它为脊髓抑制性神经递质甘氨酸受体的拮抗剂。它的作用快，中毒30min内即可导致动物惊厥，窒息死亡。
[实验方法] 1、预实验：取小白鼠8-10只，以2只为一组，分为4-5组，选择一系列剂量，分别按组腹腔注射士的宁溶液，观察出现的症状并记录死亡数，找出引起10％和90％死亡率剂量的所在范围。 在预备实验所获得的10％和90％致死量的范围内，选用几个剂量，0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g，0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g (剂量按等比级数排列，剂量间的比例一般用1:0.7-1:0.85)，使一半组数反应率在10-50％，另一半组数反应率在50-90％之间，各组的动物数应相等，一般每组可用10-20只，动物的体重和性别要均匀分配。
2、正式实验 每组取12只小鼠，称重，标记，随机分为6个计量组，每组2只，分别i.p.0.008％硝酸士的宁0.10ml/l0g、0.12ml/l0g、0.14ml/10g，0.17ml/10g、0.20ml/10g、0.24ml/10g； 3、给药后观察并记录中毒症状，30分钟后记录各组的死亡小鼠数。
受试物剂量 对数剂量 动物数 死亡率 概率单位 LD50 （mg/kg） (X) (只) (%) (Y) 及置信限(95%) [实验结果] 全班结果汇总，计算硝酸士的宁的LD50、LD50的可信限和可信限率。 （１）结果处理 实验资料按下表列出： ［讨论题］ 什么叫ＬＤ５０？测定ＬＤ５０的意义和根据是什么？
实验五 利尿药对家兔尿量的影响 一、利尿药 1.定义：是作用于肾脏，增加电解质和水的排出，使尿量增多的药物。 2.分类：根据利尿药的作用部位，可分为高效、中效和低效利尿药 3.呋塞米为高效利尿药 ⑴ 利尿作用特点 ⑵ 作用机制 ⑶ 临床应用 ⑷ 不良反应
二、利尿药的实验方法 1.动物选择 可用大白鼠、小白鼠、家兔、猫和狗，其中以大白鼠较为常用。 2.实验方法 ⑴ 代谢笼实验法：适用于大、小白鼠； ⑵ 直接自输尿管或膀胱收集尿液：适用于较大动物（家兔、猫、狗）。
三、具体实验 [目的] 1. 了解急性利尿的实验方法； 2. 观察速尿对麻醉兔的利尿作用。 [材料] 1. 动物：家兔 2. 器材：兔手术台、量筒、注射器、手术 器械 3. 药品：25％乌拉坦，1％速尿
[方法] 1.麻醉：取家兔一只，称重，耳缘i.v. 25％乌拉坦4ml/kg； 注意：注射速度要缓慢，随时观察角膜反射，反射消失即停止注射。 2.水负荷：麻醉后i.g.给自来水40ml/kg； 注意：避免灌至气管，将灌胃管外端浸入水中，若有气泡立即拔出。 3.手术：背位固定后剪去下腹部毛，于耻骨联合上方切开皮肤约4~5cm，并沿腹白线剪开肌肉，暴露膀胱，在少血管区做荷包缝合后行膀胱插管； 注意：膀胱插管需注满生理盐水
4.记录正常尿量(ml／2分钟)，连续记录10min； 5.耳缘i.v.1％速尿4mg/0.4ml/kg，记录给药后2、4、6、8、10、12、14、16、18、20min尿量毫升数(ml／2分钟)。 [结果] 结果汇总，计算不同时间尿量的均值，以尿量毫升数(ml／2分钟)为纵坐标，给药后不同时间为横坐标作直方图。
