1 / 29

与 C  /H  关联的三共振实验

生物大分子波谱学原理 吴季辉. 与 C  /H  关联的三共振实验.

indra
Download Presentation

与 C  /H  关联的三共振实验

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 与C/H关联的三共振实验 已经讨论过的三共振实验涉及主链上的连接关系，而HCCH类型的实验提供了氨基酸侧链上的连接，将二者结合起来可以获得完整的证认信息。虽然二者的连接点在1H或13C，但由于这两种核的化学位移分布范围不大，不利于谱峰的解析，更好的是利用1HN及15N。因此产生出两类实验：一类利用COSY原理将信号传递至13C，再进一步传递至15N及1HN，这类实验有CBCA(CO)NH，CBCANH，HBHA(CBCACO)NH，HBHA(CBCA)NH；另一类实验利用TOCSY将信号传递至13C，再进一步传递至15N及1HN，这类实验有C(CO)NH-TOCSY，H(C)(CO)NH-TOCSY。由于这些实验涉及侧链，侧链碳骨架的形式对信号的传递效率有很大影响。另一方面所得信息也可提供侧链类型即残基类型的信息。

  2. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  3. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH F1(Ha/Hb) -> F2(Ca/Cb,t1) -> F2(Ca) -> F2(CO) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)

  4. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  5. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  6. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  7. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  8. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  9. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCA(CO)NH

  10. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH

  11. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH F1(Ha/Hb) -> F2(Ca/Cb,t1) -> F2(Ca) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)

  12. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH

  13. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH

  14. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH

  15. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 CBCANH

  16. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 HNCACB F1(H) -> F3(N) -> F2(Ca) -> F2(Ca/Cb,t1) -> F2(Ca) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)

  17. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 HNCACB

  18. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 HBHA(CBCACO)NHHBHA(CBCA)NH 这二个实验CBCA(CO)NH及CBCANH均可略加修改，让频率标记改在1H/1H而不是13C/13C，这样就形成HBHA(CACACO)NH及HBHA(CBCA)NH，尤其后者特别有用，因为如前所述，1H/1H峰的相位刚好相反，便于识别。不过CBCANH及HBHA(CBCA)NH特别是HBHA(CBCA)NH由于涉及15N同13C的信号传递，需要较长的传递时间，而大蛋白质的13C的弛豫时间比较短，因而信噪比较其他三共振实验要低很多。

  19. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 HBHA(CBCACO)NH F1(Ha/Hb,t1) -> F2(Ca/Cb) -> F2(Ca) -> F2(CO) -> F3(N,t2) -> F1(H,t3)

  20. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 HBHA(CBCACO)NH

  21. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认 三共振谱可以建立sequential连接，无需NOESY的信息，也不需要自旋体系的知识即可获得主链原子的证认； 再利用TOCSY-HSQC, HCCH-COSY, HCCH-TOCSY等实验，进一步可获得侧链原子的证认 而且利用获得的13C化学位移，还可判别氨基酸残基类型以及二级结构。

  22. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认

  23. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认

  24. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认

  25. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认 下图显示不同氨基酸残基中13C的化学位移分布，由13C和13C等的化学位移可以可靠地辨认出某些氨基酸残基，如Ala, Thr, Ser, Gly等。

  26. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 基于异核谱的谱峰证认 异核三共振三维及四维谱大大简化了谱峰证认的过程，也使得谱峰证认自动化或半自动化成为可能，当然在目前阶段，由程序辨认出的谱峰还需经过手工检查，排除可能的假峰。

  27. 生物大分子波谱学原理 吴季辉 测验题： 脉冲序列分析

More Related