医学遗传学实验
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医学遗传学实验. Department :医学遗传学教研室 Address: 科研楼 B705 Telephone: 88208257. 整体实验安排 实验一 人类外周血染色体标本制备 实验二 人类染色体G带标本制备及观察 实验三 遗传病基因突变分析 ( SSCP ) 实验四 进行性肌营养不良症( DMD )基因检测 实验五 人类染色体核型分析. 第一次 实验内容. 1. 人类外周血染色体标本制备 2. 聚合酶链反应( polymerase chain reaction , PCR ) 加样 (实验三 ).

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医学遗传学实验

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Presentation Transcript


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医学遗传学实验

Department:医学遗传学教研室Address: 科研楼B705

Telephone: 88208257


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整体实验安排

实验一 人类外周血染色体标本制备

实验二 人类染色体G带标本制备及观察

实验三 遗传病基因突变分析 (SSCP)

实验四进行性肌营养不良症(DMD)基因检测

实验五 人类染色体核型分析


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第一次 实验内容

1.人类外周血染色体标本制备

2. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)加样(实验三 )


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1.人类外周血染色体标本制备 (P3)

两人一组,做一份血 !!!

● 实验目的: 初步掌握人类

染色体标本培

养制备的基本方法


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● 实验原理:

正常情况下,外周血中的小淋巴细胞,几乎都处在G1期或G0期,外周血细胞中是没有分裂相的。


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1960年,Nowell和Moorhead证实,外周血中的小淋巴细胞可以在植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)和其它有丝分裂刺激剂的影响下,在形态上转变为淋巴母细胞,在培养中进行有丝分裂。

Moorhead P S, Nowell P C, Mellman W J, Battips DMA Hungerford D A. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood. Exp. Cell Res. 20:613-16, 1960


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秋水仙素处理

低渗和固定,就可以迅速而又简便地获得体外生长的细胞群体和有丝分裂相。


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●实验准备

实验材料:人外周血 (淋巴细胞)

实验器具:离心机、恒温培养箱、恒温水浴箱、 培养瓶、离心管、注射器和针头(61/2号)、吸管、量筒、火材、洒精灯、载玻片、染缸、试管架、玻璃铅笔、显微镜、擦镜纸、吸水纸等。

药品和试剂:


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● 实验步骤

采血

培养(37℃0.5℃,72h )

秋水仙素处理(终止培养前2-3h)

离心 (1000rpm, 10min)

低渗处理

预固定,离心

再固定,再离心

再固定,再离心

再固定,再离心

制片


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制片方法

(冷片)

每组制 3-4片


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  • PCR加样

实验三遗传病基因突变分析内容


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聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)是一种体外由引物介导的特定DNA序列的扩增方法.

双蒸水

10*Buffer

MgCl2

dNTPs(ATP/CTP/GTP/TTP)

Primer(引物 )R + F

DNA 模板

Taq-DNA聚合酶

石蜡油

PCR

组分


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变性:95℃,1min

退火:温度和引物有关

延伸 :时间和待扩

增产 物长度有关

72 ℃ for Taq


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循环参数设置

  • Step 1 94C 5分钟

  • Step 2 94C 30秒

  • 59C 30秒

  • 72C 30秒

  • Step 3 72C 5分钟

30 cycles


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两人一组,做一份PCR,样品加入0.2ml 的薄壁离心管中

双蒸水 18.5 l

10*Buffer 2.5 l

MgCl2 2 l

dNTPs 0.5 l

Primer R + F 0.7 l

DNA 模板 0.5 l (正常人or 病人)

Taq-DNA聚合酶 0.3 l

石蜡油 1滴


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