标准曲线的制作与运用
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标准曲线的制作与运用. —— 以“考马斯亮蓝 G-250 法测定蛋白质含量”为例 许良政 2007.5. 标准曲线的制作与运用. 一、标准蛋白质溶液的配制 实验指导: P160 具体方法: 精确称取结晶牛血清蛋白 10mg ,加水溶解并定容至 100ml ,即为 100 μ g/ml 的 标准蛋白质溶液. 标准曲线的制作与运用. 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制. 或 5min. 或 620nm. 标准曲线的制作与运用. 二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制 注意: 1 、各管振荡程度尽量一致

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Presentation Transcript


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标准曲线的制作与运用

——以“考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量”为例

许良政

2007.5


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标准曲线的制作与运用

一、标准蛋白质溶液的配制

  • 实验指导:P160

  • 具体方法:

    精确称取结晶牛血清蛋白10mg,加水溶解并定容至100ml,即为100μg/ml的标准蛋白质溶液


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标准曲线的制作与运用

二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制

或5min

或620nm


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标准曲线的制作与运用

二、不同浓度梯度的标准蛋白质溶液的配制

  • 注意:

    1、各管振荡程度尽量一致

    2、振荡后放置3~4min

    3、在595或620nm处比色,记录吸光度(OD值)


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(一)打开Excel


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(二)进入Excel工作表状态


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(三)在Excel工作表输入数据和说明文字


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:1、用鼠标选中数据


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:2、选中图表类型


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:3、点“图表类型”对话框的“下一步”,出现如下对话框


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:4、点对话框的“系列”选项


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:5、嵌入系列(图表)名称


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:6、点“下一步”操作,出现:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:7、再点“下一步”操作,出现:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:8、点“完成”操作,散点图在工作表中出现:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:9、用鼠标左键选中作图点


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:10、选定作图点后,再点鼠标右键并选中“添加趋势线”:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:11、 单击“添加趋势线”


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(四)作图:12、确定


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(五)求直线方程:1、选中趋势线,点鼠标右键并选中“趋势线格式”:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(五)求直线方程: 2、点“趋势线格式”,在下图的“选项”中选“显示公式”和“R的平均值”:


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标准曲线的制作与运用

三、标准曲线的制作

(五)求直线方程: 3、确定

注:R2至少要达到0.999以上


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

将所测得“吸光度”代入“直线方程”的y项,利用Excel的计算功能即可方便求出X项的“蛋白质浓度”:

换算公式:X=(Y-0.0005)/0.0075


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求“蛋白质浓度”


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求“蛋白质浓度”


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求“蛋白质浓度”


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求“蛋白质浓度”


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求“蛋白质浓度”


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

四、标准曲线的运用

  • 如何用Excel求样本“蛋白质浓度”的平均值


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标准曲线的制作与运用

附:样本中“蛋白质含量”的换算


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标准曲线的制作与运用

附:样本中蛋白质的提取与测定


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The end!


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