不同样品核酸提取、扩增、荧光定量
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不同样品核酸提取、扩增、荧光定量 PCR 完美解决方案. http://www.bioteke.com E-mail: [email protected] Fax : 010-62951781 Tel : 010-62951781 62983458 62979408. 北京百泰克生物技术有限公司(北京市海淀区上地信息路 15 号). 不同样品核酸提取、扩增、荧光定量 PCR 完美解决方案. --- 核酸提取攻略. 北京百泰克生物技术有限公司(北京市海淀区上地信息路 15 号). 内容概要. 不同样品 RNA 提取最适方法 RNA 纯度与质量考察

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不同样品核酸提取、扩增、荧光定量 PCR 完美解决方案

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Presentation Transcript


Pcr

不同样品核酸提取、扩增、荧光定量PCR完美解决方案

http://www.bioteke.com

E-mail: [email protected]

Fax:010-62951781

Tel:010-62951781 62983458 62979408

北京百泰克生物技术有限公司(北京市海淀区上地信息路15号)


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不同样品核酸提取、扩增、荧光定量PCR完美解决方案

---核酸提取攻略

北京百泰克生物技术有限公司(北京市海淀区上地信息路15号)


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内容概要

  • 不同样品RNA提取最适方法

  • RNA纯度与质量考察

  • RNA提取常见问题及解决方案

  • 常见样品DNA提取

  • 特殊样品DNA提取

  • DNA分离纯化中常见问题分析


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RNA提取流程

酒精沉淀

或介质吸附

样品

裂解液

液氮研磨

或其他方法处理

抽提

离心洗涤

干燥溶解

或洗脱

细胞裂解

上层溶液


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RNA提取常用方法---沉淀方法

  • 沉淀法:异丙醇或乙醇

  • 介质吸附法:


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RNA提取常用方法---裂解方式

异硫氰酸胍/苯酚法

  • 在变性剂异硫氰酸胍的作用下,细胞被裂解,同时核蛋白体上的蛋白变性,核酸释放;

  • 释放出来的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分别位于整个体系中的中间相和水相,从而得以分离;

  • 有机溶剂抽提,沉淀,得到纯净RNA。

胍盐 /β-巯基乙醇

  • 盐酸胍裂解样本 ,抑制 RNase 的活性 ;

  • β-巯基乙醇变性蛋白


Bioteke rna

BioTeke的RNA提取试剂具有明显的优势

  • 在经典试剂的基础上,不断升级。

  • 多款高品质的RNA提取试剂:

  • Tri pure (Trizol)

  • RNApure(Trizol法的升级产品)


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组织/细胞样品RNA提取

  • 材料:

  • 小鼠肝脏组织

  • 方法:

  • BioTekeRNApure高纯总RNA

  • 快速提取试剂盒

  • 0.1g样品组织

  • 结果:

1 2 3 4

图:小鼠肝脏组织RNA


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RNApure 高纯总RNA快速提取试剂

1 2 3

图片说明:

1 BioTeke RNAclean

2 BioTeke TRIpure (TRIzol法)

3 BioTeke RNApure 离心柱型

(注:本图实验材料为植物叶片)


Dna rna

同一样品基因组DNA和RNA分提

原理:

根据基因组DNA和RNA在硅基质膜上的结合条件不同,用两根离心吸附柱分别提取基因组DNA和RNA。


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特殊样品RNA提取---血液

图1全血样品溶解在TRI pure LS Reagent试剂后的状态

图2泳道1与2,在-80度保存一个月后的提取结果。M泳道:标准的Hela细胞RNA


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多糖多酚植物样品RNA的提取

  • 材料:

  • 松针、冬青、香蕉、木菠萝和杨树

  • 方法:

  • 通用植物总RNA提取试剂盒

  • (离心柱型)

  • 0.1g样品组织

  • 结果:

  • 得率:约35-40μg

  • 纯度:OD260/OD280=1.82-1.95

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

试剂盒适用范围:

水稻种子、小麦种子、玉米种子、高粱种子、拟南芥种子、大豆种子、苹果、葡萄、香蕉、棉花、龙眼、荔枝、各种草坪牧草植物、各种树木、各种花卉等绝大多数植物

图片说明:1、2 杨树;3、4 香蕉;5、6 松针;7、8 冬青;9 、10 木菠萝


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Micro RNA提取

  • 提取原理:

  • 传统方法:先提取总RNA然后跑胶回收或沉淀Micro RNA。

  • 新方法:通过裂解液裂解和酸酚分层后过柱两次,一次去除基因组DNA和大片段RNA,后一次吸附Micro RNA,然后漂洗收集。

1 2 3 4

  • 新方法特点:

  • 高效分离小RNA,同时分离总RNA

  • 可用于miRNA、siRNA和snRNA的分析

  • 适用各种来源的样品

  • 提取时间短,约30分钟完成实验

图片说明:1、2DNA和大RNA;3、4Micro RNA

(材料为小鼠肝脏组织)


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RNA纯度与质量考察

  • 生物大分子具有共轭双键,在260和280nm波长处有光吸收峰。

  • 纯度:紫外分光光度计测定所提总RNA在260nm和280nm波长处的光吸收,以A260/A280的比值来判断总RNA的纯度。

  • 质量:甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定。


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RNA提取常见问题及解决方案

  • RNA 的降解

  • OD260 /OD280 比值偏低

  • 电泳带型异常

  • 下游实验效果不佳


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RNA的降解

  • 新鲜细胞或组织:

  • 裂解液的质量

  • 外源RNase的污染

  • 裂解液的用量不足

  • 组织裂解不充分

  • 另外某些富含内源酶的样品 (如脾脏,胸腺等),很难避免 RNA 的降解。

  • 建议在液氮条件下将组织碾碎,并且匀浆时使用更多裂解液。


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RNA的降解

  • 冷冻样品:

  • 样品取材后应立即置于液氮中速冻,然后可以移至-70℃冰箱保存。样品要相对小一点;

  • 先用液氮研磨,再加裂解液匀浆;

  • 样品与裂解液充分接触前避免融化,研磨用具必须预冷,研磨过程中及时补充液氮。


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RNA的保护

  • 采集样品的保护:

  • 通常用液氮保存

  • 样品保护剂RNAfixer,样品浸泡其中可以在37℃保存一天,25℃一周,4℃一个月,-20℃一年左右。

  • 环境中RNase的清除:

  • DEPC处理各种实验器具

  • RNAsafe对溶液中RNase进行清除。

  • RNA酶喷雾清除剂,可对固体表面的RNase起到清除的作用,更大程度上避免RNase的污染。


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OD260 /OD280 比值偏低

蛋白质污染:

  • 不要吸入中间层及有机相,加入氯仿后首先混匀,并且离心分层的离心力和时间要足够。

  • 减少起始样品量,确保裂解完全、彻底

  • 解决办法:重新抽提一次,再沉淀,溶解。

    苯酚残留:

  • 不要吸入中间层及有机相,加入氯仿后首先混匀,并且离心分层的离心力和时间要足够。

  • 解决办法:重新抽提一次,再沉淀,溶解。


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OD260 /OD280 比值偏低

抽提试剂残留:

  • 确保洗涤时要彻底悬浮 RNA,并且彻底去掉 75% 乙醇。

  • 解决办法:再沉淀一次后,溶解。

  • 设备限制:

  • 测定OD260 及OD280 数值时,要使OD260 读数在 0.10 - 0.50 之间。此范围线性最好。

    用水稀释样品:

  • 测 OD 时,对照及样品稀释液请使用 10 mM Tris,pH 7.5。用水作为稀释液将导致比值的降低。


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电泳条带异常

非变性电泳:

  • 上样量超过 3μg,电压超过 6V/cm,电泳缓冲液陈旧,均可能导致 28S 和 18S 条带分不开。

  • 变性电泳条带变淡:

  • EB 与单链的结合能力要差一些,故同样的上样量,变性电泳比非变性电泳要淡一些;

  • 甲醛的质量不高 。


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  • 抽提试剂的残留

  • 75% 乙醇洗涤

  • 样品中杂质的残留

  • 多糖等杂质,再次沉淀

  • DNA 污染

  • 使用RNase-Free 的 DNase I 消化抽提RNA

下游实验效果不佳(RNA降解)


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不同样品基因组DNA提取

  • 常见样品基因组DNA提取

    • 细胞/组织/细菌/血液基因DNA提取

    • 植物材料DNA提取

  • 特殊样品基因组DNA提取

    • 大量血液样品DNA提取

    • 环境微生物DNA提取

    • 临床样本DNA提取

  • DNA分离纯化中的常见问题分析


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基因组DNA提取流程


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基因组DNA提取流程-细胞裂解

  • 化学方法

    • CTAB法:适用于植物材料等。是一种阳离子去污剂,溶解细胞膜,与核酸结合。在高盐下溶解释放DNA。

    • SDS法:适用于血液,细胞,动物组织,细菌,酵母等

  • 物理方法

    机械剪切,超声波破碎,研磨匀浆等。易造成DNA断裂。

  • 酶法

    蛋白酶K

    BioTeke基因组DNA提取系列试剂盒综合利用上述方法


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组织/细胞/细菌/血液基因组DNA提取

提取原理:

  • 特点:

  • 不需要使用有毒的氯仿、苯酚等试剂

  • 多次柱漂洗确保高纯度;长度可达30-50Kb


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植物材料基因组DNA提取

提取原理:

玉米叶片基因组DNA提取

(使用新型快速植物基因组DNA提取试剂盒)


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特殊样品基因组DNA提取

传统方法适用于所有材料基因组DNA的提取?

比如大量血液?

比如土壤/粪便中的微生物基因组DNA的提取?

比如病毒及其他微量样品DNA的提取?

NO!


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中量/大量血液基因组DNA提取

  • 传统方法

  • 消化后,用酚/氯仿抽提,

  • 时间长,损害操作人员健康

  • BioTeke创新

  • 不用蛋白酶消化

  • 不用酚/氯仿抽提

  • 结果:

  • 得率:约75-250μg /5mL血样

  • 纯度:OD260/OD280=1.87-1.95

5ml全血基因组DNA提取电泳结果


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土壤/粪便微生物基因组DNA提取

  • 其他品牌试剂盒存在缺点:

  • 采用玻璃珠或钢珠破碎,导致基因组断裂严重;

  • 必须购买破碎专用设备,增加使用成本;

  • 采用包括玻璃奶、离心吸附柱串联的纯化方式,导致DNA大量损失,得率很低,很难真实反映土壤微生物的多样性。

  • BioTeke的技术创新:

  • 采用酶法破碎,保证基因组的完整性;

  • 用异丙醇沉淀DNA,DNA无损失。


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临床样品基因组DNA提取

  • 病毒基因组DNA提取

  • 酵母基因组DNA提取

  • 口腔拭子DNA提取

  • 微量样品DNA提取

  • 石蜡组织DNA提取

  • 头发DNA提取


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一步法DNA提取扩增

原理:

综合微量样品基因组DNA提取和高效的PCR扩增试剂。从毛发、石蜡组织等微量组织中高效提取足够浓度的DNA,然后进行PCR扩增。操作简单、方便,可对大量样品同时进行操作。


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基因组DNA分离纯化中的注意事项

  • 保证基因组DNA的完整性和纯度

  • 提高DNA的洗脱效率

  • DNA的储存


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基因组DNA分离纯化中的注意事项

  • 保证基因组DNA的完整性和纯度

  • 提高DNA的洗脱效率

  • DNA的储存

  • 简化操作步骤,缩短操作时间

  • 减少物理因素对DNA的降解,震荡、搅拌等

  • 减少化学物质对DNA的降解,操作多在pH4-10

  • 防止基因组DNA的生物降解:DNase


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基因组DNA分离纯化中的注意事项

  • 保证基因组DNA的完整性和纯度

  • 提高DNA的洗脱效率

  • DNA的储存

  • 洗脱液65度预热10分钟

  • 洗脱体积不小于30μL

  • 洗脱2次或者3次


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基因组DNA分离纯化中的注意事项

  • 保证基因组DNA的完整性和纯度

  • 提高DNA的洗脱效率

  • DNA的储存

  • 可长期储存于pH=7.0的ddH2O或TE

  • 不易制成干品储存

  • 分装低温保存


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如何提高微量核酸提取或回收后的浓度

  • 核酸助沉剂的应用

  • 微量吸附柱的应用---15μl洗脱体系

    • 质粒提取

    • 胶回收或PCR产物回收

    • 微量细胞/组织DNA/RNA提取

    • 病毒DNA/RNA提取

    • 微量临床样本DNA/RNA提取


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不同样品核酸提取、扩增、荧光定量PCR完美解决方案

---Real-time qPCR攻略

北京百泰克生物技术有限公司(北京市海淀区上地信息路15号)


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主要内容

  • RT-PCR原理

  • Real-time qPCR原理及应用

  • Real-time qPCR成功关键

  • Real-time qPCR数据分析

  • Real-time qPCR常见问题及解决方案


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中心法则与RT、PCR

PCR

DNA

RT

RNA


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反转录相关因素

  • 逆转录反应可以以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物(GSP)起始。

  • 提取RNA的质量会影响到RT的产量及cDNA的完整性。

  • 整个过程要求无RNA酶操作。

  • 反转录酶、RNA酶抑制剂都会对产物的质量造成一定的影响。


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  • Super M-MLV反转录酶

  • 高效的逆转录活性,且无RNaseH活性

  • Thermo M-MLV反转录酶

  • 高效的逆转录活性,且无RNaseH活性

  • 适合合成长片段的cDNA,有很强的模板兼容性,对高GC含量(75%以上)和结构复杂的模板效果显著

  • 在42℃-60℃具有较好的热稳定性。


One step rt pcr

One step RT-PCR

模板:

使用BioTeke公司的RNApure 总RNA提取试剂盒提取的鸡肝脏组织RNA

目的片段:管家基因β-Actin

反应体系:

反应程序:


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RT-PCR相关产品

反转录酶及试剂盒系列产品讲座期间特价优惠!

Super M-MLV反转录酶,10000u/198元

Super RT Kit cDNA 第一链合成试剂盒50次,特价490元

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  • RT-PCR原理

  • Real-time qPCR原理及应用

  • Real-time qPCR成功关键

  • Real-time qPCR数据分析

  • Real-time qPCR常见问题及解决方案


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实时荧光定量PCR技术的应用

  • 基因表达差异分析

  • 拷贝数分析

  • SNP检测

  • miRNA定量

  • 转基因成分定量分析

  • 临床诊断、疾病及药物研发等


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Real-time qPCR原理

  • 如何对初始模板定量

  • 荧光信号如何产生?


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实时定量PCR

化学原理

两个重要图形

非探针

探针

扩增曲线

熔解曲线

Real-Time qPCR主要概念


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Real-Time qPCR曲线的意义

扩增曲线

熔解曲线

图片为:首都医科大学演示实验结果 材料:小鼠肝脏 基因:β-actin


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荧光染料和荧光探针

实时荧光定量 PCR 的化学原理包括探针类和非探针类两种。

  • 非探针类则是利用荧光染料(如SYBR Green I)或者特殊设计的引物(如LUX Primers)来指示扩增的增加。

  • 探针类(TaqMan探针和分子信标)是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加。

  • 后者由于增加了探针的识别步骤,特异性更高,但前者则简便易行。


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SYBR Green I 工作原理

  • SYBR Green I是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料,与双链DNA结合后,其荧光大大增强。这一性质使其用于扩增产物的检测非常理想。SYBR GreenI的最大吸收波长约为497nm ,发射波长最大约为520nm。

  • 在PCR反应体系中,加入过量 SYBR 荧光染料,SYBR荧光染料特异性地掺入DNA双链后,发射荧光信号,而不掺入链中的 SYBR 染料分子不会发射任何荧光信号,从而保证荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。


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LUX 引物工作原理

LUX (light upon extention) 引物是利用荧光标记的引物实现定量的一项新技术。目标特异的引物对中的一个引物 3’端用荧光报告基团标记。在没有单链模板的情况下,该引物自身配对,形成发夹结构,使荧光淬灭。在有目标片断的时候,引物与模板配对,发夹结构打开,产生特异的荧光信号。


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Q

Q

Q

F

F

TaqMan探针工作原理

Suppression of fluorescence

F

Primer

Reporter

Quencher

Degradation of TaqMan probe by DNA polymerase

Primer


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分子信标(molecular beacon)工作原理

分子信标:一种在靶DNA不存在时形成茎环结构的双标记寡核苷酸探针。在此发夹结构中,位于分子一端的荧光基团与分子另一端的淬灭基团紧紧靠近。

分子信标的茎环结构中,环一般为15-30个核苷酸长,并与目标序列互补;茎一般5-7个核苷酸长,并相互配对形成茎的结构。荧光基团连接在茎臂的一端,而淬灭剂则连接于另一端。分子信标必须非常仔细的设计,以致于在复性温度下,模板不存在时形成茎环结构,模板存在时则与模板配对。与模板配对后,分子信标的构象改变使得荧光基团与淬灭剂分开。当荧光基团被激发时,它发出自身波长的光子(图5)。


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荧光阈值(Threshold)

Ct

Ct值是扩增DNA的量达到阈值时候的循环次数。


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Ct值

Ct 值与起始模板的关系研究表明,每个模板的 Ct值与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系,起始拷贝数越多, Ct值越小。

利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线,其中横坐标代表起始拷贝数的对数,纵坐标代表 Ct 值(如图所示)。因此,只要获得未知样品的 Ct 值,即可从标准曲线上计算出该样品的起始拷贝数。


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Real-time qPCR流程


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一步法和两步法优缺点比较

根据自己需求,选择合适的方法!


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  • RT-PCR原理

  • Real-time qPCR原理及应用

  • Real-time qPCR成功关键

  • Real-time qPCR数据分析

  • Real-time qPCR常见问题及解决方案


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Real-time qPCR成功因素

  • 引物设计:

  • 3’末端尽量不是A;

  • 18-24bp;扩增产物80-150bp;

  • 设计在基因保守区内

  • Taqman探针:尽量靠在上游引物;长度30-45bp,Tm比引物高至少

  • 5℃;5’端不要是G,G会有淬灭作用,影响定量

  • RNA质量和定量

  • 比较好,2条主带可见(28s和18s);定量准确

  • 内标(housekeeping gene)正确选择

    • 18s rRNA, ß-actin, GAPDH等

    • 标准曲线的准确制作R2=0.99


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Real-time qPCR成功因素

  • 反应体系:

  • 模板浓度不要太高,反转录最多1µg总RNA,

  • PCR一般1µL反转录产物;

  • 引物浓度一般100nM-1mM;

  • 根据kit要摸索最佳反应条件

  • 小心操作:

  • 每管或每孔都要换新枪头!不要连续用同一个枪头加样,即使是混 合液!每个样品至少要做3个平行孔。每组实验最好有3个重复,做统计

  • 分析。

做real-time qRT-PCR前,做个普通的PCR,检测您的反应条件!


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  • RT-PCR原理

  • Real-time qPCR原理及应用

  • Real-time qPCR成功关键

  • Real-time qPCR数据分析

  • Real-time qPCR常见问题及解决方案


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Real-time qPCR数据分析

  • 基线(baseline)

    • 通常是3-15个循环的荧光信号

    • 同一次反应中针对不同的基因需单独设置基线

  • 阈值(threshold)

    • 自动设置是3-15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍

    • 手动设置:置于指数扩增期,刚好可以清楚地看到荧光信号明显增强。

    • 同一次反应中针对不同的基因可单独设置阈值,

    • 但对于同一个基因扩增一定要用同一个阈值。

  • Ct值 :与起始浓度的对数成线性关系

    • 分析定量时候一般取Ct:15-35.太大或者太小都会导致定量的不准确。


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  • 绝对定量:

  • 此方法是用一系列已知浓度的标准品制作标准曲线,在相同的条件下目的基因测得的荧光信号量同标准曲线进行比较,从而得到目的基因的量。该标准品可以是纯化的质粒DNA,体外转录的RNA,或者是体外合成的ssDNA。

  • 相对定量:

  • 通过与内参基因Ct值之间的相差来计算基因表达差异,一般是2-Ct 。或者是考虑扩增效率的Pfaffl法。

统计分析方法


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绝对定量


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相对定量

Marisa L. Wong and Juan F. Medrano: BioTechniques July 2005


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相对定量


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Real-time qRT-PCR优点

  • 实时检测(在对数扩增时期)而不是终点检测

  • 敏感性高

  • 需要样品少

  • 特异性高(Taqman)

  • 精确定量


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  • RT-PCR原理

  • Real-time qPCR原理及应用

  • Real-time qPCR成功关键

  • Real-time qPCR数据分析

  • Real-time qPCR常见问题及解决方案


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常见问题讨论

  • 特异性

  • 重复性

  • 灵敏度

  • 其他问题


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扩增的特异性

引物?

Tm

Tm,重新设计引物,优化条件


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重复性---判断实验优劣的重要指标

  • 判断指标:主要为标准差(SD)和变异系数(CV)

  • 影响重复性的因素:

  • PCR 反应扩增的效率:优化实验条件,使反应体系达到最佳扩增效率 。

  • 目的基因的初始浓度: 使用初始浓度具有较高数量级的样本或作平行孔。

  • 标准曲线的影响:不少于5个稀释度的标准品,涵盖待测样本中目的基因量可能出现的全部浓度范围;理想的标准品应与样本具有高同源性,质粒DNA 或是体外合成、转录的RNA。


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影响灵敏度的因素

  • 反应体系中形成的引物二聚体的影响

    • 可以用水解探针代替SYBR Green I,有文献报导使用水解探针的敏感性要比SYBR Green I高出10倍。

    • 可以使用热启动办法或使用特殊处理的Taq酶

    • 要尽可能地优化引物设计

    • 如果反应体系中出现PCR的抑制因素,应适当将目的基因的浓度稀释后再进行扩增。

    • 注意避免室温混合各种试剂,并且在一经混合后立即开始进行扩增。

  • 循环数

  • Mg2+的浓度


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Q1:无Ct值(信号)出现

可能性不大

  • 检测荧光信号的步骤有误: 一般SG法采用72℃延伸时采集,Taqman法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。

  • 引物或探针降解: 可通过PAGE电泳检测其完整性。

  • 模板量不足: 对未知浓度的样品应从系列稀释样本的最高浓度做起。

  • 模板降解: 避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。


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Q2:Ct值出现过晚(Ct>38)

  • 扩增效率低: 反应条件不够优化。设计更好的引物或探针;改用三步法进行反应;适当降低退火温度;增加镁离子浓度等。

  • PCR各种反应成分的降解或加样量的不足。

  • PCR产物太长: 一般采用80-150bp的产物长度。


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Q3:标准曲线的线性关系不佳

  • 加样存在误差:使得标准品不呈梯度。

  • 标准品出现降解: 应避免标准品反复冻融,或重新制备并稀释标准品。

  • 引物或探针不佳: 重新设计更好的引物和探针

  • 模板中存在抑制物,或模板浓度过高。


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Q4:阴性对照也出现明显的起飞

  • 反应mix或水被污染。

  • 引物二聚体的出现: 用SG法在35cycles以后阴性出现起飞属正常情况,可配合熔解曲线进行分析。

  • 反应过程中探针的降解:用PAGE电泳对探针进行检测。

  • ROX校正的问题:如果使用了,则可能是ROX的降解所造成。


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Q5:熔解曲线不止一个主峰

  • 引物设计不够优化:应避免引物二聚体和发夹结构的出现。

  • 引物浓度不佳:适当降低引物的浓度,并注意上下游引物的浓度配比。

  • 镁离子浓度过高:适当降低镁离子浓度,或选择更合适的mix试剂盒。

  • 模板有基因组的污染:RNA提取过程中避免基因组DNA的引入,或通过引物设计避免非特异扩增。


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Q6:扩增效率低

  • 反应试剂中部分成分特别是荧光染料降解。

  • 反应条件不够优化:可适当降低退火温度或改为三步扩增法。

  • 反应体系中有PCR反应抑制物:一般是加入模板时所引入,应先把模板适度稀释,再加入反应体系中,减少抑制物的影响。


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Q7:同样的试剂在不同仪器上产生不同的曲 线,如何比较?

判断标准:扩增效率,灵敏度,特异性


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BioTeke Real-time qPCR产品可用于各种仪器

ABI: PRISM 7000/7700/7900HT,7300/7500

Bio-Rad: DNA Engine Option/DNA Engine Option2/Chromo4 Real time System,iCycler IQ/MyiQ/iQ5

Stratagene:Mx3000P/Mx3005P

Roche: Light cycler

Bioer: Line-Gene

其他各种real- time qPCR扩增仪

ROX参考染料:在荧光检测中标准化非PCR相关的震荡;

在qPCR中提供一个稳定的基线


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BioTeke Real-time qPCR产品反应程序

两步扩增反应 Real-time qPCR:

三步扩增反应 Real-time qPCR:


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BioTeke Real-time qPCR产品反应程序

溶解程序:(dissociation program),扩增反应完成后的最后一步,检测扩增反应的特异性。不同仪器要求的程序稍微不同。

ABI7000的溶解程序:


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BioTeke产品应用实例---最权威的声音来源于实践

  • 目前应用最广泛的主流仪器:ABI系列及Bio-Rad系列。

  • 来自Bio-Rad系列的检验报告。

  • 来自ABI系列的检验报告。

  • 我们都做得很好,我们一直在不断创新,力求解决您的实验需求。


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不同公司荧光定量试剂比较


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百泰克让您的实验更完美

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Tel:010-62951781 62983458 62979408


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