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Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional

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Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional. Dra Fabiana Bastos División Inmunohematología D epartamento de Hemoterapia e Inmunohematología Hospital de Clínicas “José de San Martín” Universidad de Buenos Aires [email protected] ANTICUERPOSc.

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Presentation Transcript
anticuerpos irregulares cl nicamente significativos y su detecci n pre transfusional

Anticuerpos irregulares clínicamente significativos y su detección pre transfusional

DraFabiana Bastos

División Inmunohematología

Departamento de Hemoterapia e Inmunohematología

Hospital de Clínicas “José de San Martín”

Universidad de Buenos Aires

[email protected]

anticuerposc
ANTICUERPOSc
  • REGULARES o ESPERADOS

=

  • IRREGULARES o INESPERADOS
anticuerpos
ANTICUERPOS
  • IRREGULARES o INESPERADOS
    • Aloanticuerpos INMUNES: en respuesta al estímulo con glóbulos rojos
      • Transfusión
      • Embarazo
      • Trasplante
anticuerpos1
ANTICUERPOS
  • IRREGULARES o INESPERADOS
    • Aloanticuerpos ocurrencia NATURAL: en respuesta a estímulos ambientales
      • Polen
      • Hongos
      • Bacterias
detecci n de anticuerpos irregulares
Detección de anticuerpos irregulares
  • Juega un papel fundamental en la medicina Transfusional
  • Es un proceso clave en las pruebas de compatibilidad pre-transfusión
  • El objetivo de los métodos de detección es el hallazgo de los anticuerpos irregulares o inesperados
  • Presentes en 0.2 - 2 % de la población general
anticuepos clinicamente significaivos
ANTICUEPOS CLINICAMENTE SIGNIFICAIVOS
  • Capaces de iniciar la destrucción acelerada de los glóbulos rojos portadores del antígeno
  • ISBT >300 antígenos 30 sistemas de grupo sanguíneo
  • Especificidades asociadas con:
    • EHFN
    • RHPT
    • Acortamiento de la sobrevida de los GR transfundidos
    • AHAI
slide8

Destrucción de GR

alogénicos transfundidos

Reacción hemolítica postransfusional

Destrucción de GR

autólogos

Anemia Hemolítica

Autoinmune

Destrucción de GR

fetales

Enfermedad Hemolítica

Feto Neonatal

Daño tejidos

trasplantados

Rechazo del injerto

rhp intravascular
RHP Intravascular
  • Síntomas
    • Fiebre
    • Escalofríos
    • Shock
    • Hipotensión
    • Hemoglobinemia
    • Hemoglobinuria
    • IRA
    • CID
rhp intravascular1
RHP Intravascular
    • Hemólisis rápida 10 min
    • IgM, fija C
    • 10% desenlace fatal
  • Anticuerpos implicados:
    • ABO
    • PP1PK
    • Vel
    • Lewis
    • Kidd
rhp extravascular
RHP Extravascular
  • IgG (IgG1 o IgG3)
  • Inmediata: durante o dentro de pocas horas:
    • Ac serológicamente detectable
  • Hiperbilirrubinemia
  • Anticuerpo implicados:
    • Kidd
    • Rh
    • Duffy
rhp extravascular tard a
RHP Extravascular Tardía
  • Pacientes previamente inmunizados
  • Ac presente
  • Serológicamente indetectable
  • Transfusión inicia respuesta anamnésica
  • 5-7 días postransfusión (2-23 días)
  • Fiebre,  Hto/Hb, ictericia, hemoglobinuria
factores que determinan la importancia cl nica
Factores que determinan la importancia clínica
  • Especificidad del anticuerpo.
  • La concentración y la avidez de los anticuerpos.
  • Rango térmico
  • Clase y subclase de inmunoglobulina
  • Actividad del sistema mononuclearfagocítico.
  • Movilidad y densidad de sitios antigénicos en la membrana.
  • Volumen de glóbulos rojos administrados.
  • Presencia de sustancias solubles del grupo sanguíneo
factores que determinan la importancia cl nica1
Factores que determinan la importancia clínica
  • Algunas especificidades tienen un comportamiento variable
  • No siempre podemos distinguir entre un Ac clínicamente significativo y uno benigno
  • No contamos con información inequívoca del comportamiento de algunos especificidades poco comunes
  • A veces no podemos precisar la especificidad de un Ac determinado
anticuerpos poco comunes
Anticuerpos poco comunes
  • Conocer la etnia del paciente
  • Conocer la historia clínica del paciente
  • Conocer hallazgos serológicos previos
  • Conocer medios óptimos de reacción, temperatura, etc
especificidades relacionadas con la etnia
Especificidades relacionadas con la etnia
  • En un paciente de raza blanca, los Ac contra Agde alta frecuenciase dirigen con mayorfrecuencia contra: k, Kpb, Yta, Vel, Coa y Lub.
  • En individuos de raza negra los fenotiposS-s-U-Js(b-) y hrsson exclusivos, y los fenotiposFy(a-b-), Le(a-b-), Cr(a-) y Lu(b-) son máscomunes
especificidades relacionadas con la etnia1
Especificidades relacionadas con la etnia
  • El fenotipo In(b-) es exclusivo de la razaasiática, y los fenotiposGy(a-), Jr(a-) y Di(a+b-) son muchomásfrecuentes
  • En latinoamericanos: Di(a+b-), Ge:-2,3 y Ge:-2,-3.
  • En el este de Europa es máscomún el fenotipoGy(a-).
reactivos globulares
REACTIVOS GLOBULARES
  • Cada frasco contiene suspensión globular (0.8-6%) de un individuo
  • Deben estar tipificados al menos para los antígenos
  • D, C, E, c, e, P1, Lea, Leb, K, k, Fya, Fyb, Jka, Jkb, M, N, S, s
  • Cada lote se manufactura con donantes diferentes
  • Cada lote se mantiene por 45 días
tecnica
TECNICA
  • Colocar una gota de suspensión globular en un tubo
  • Colocar dos gotas de suero en estudio
  • Centrifugar y leer
  • Incubar a 37ºC 30 minutos
  • Centrifugar y leer
  • Lavar tres veces con solución fisiológica
  • Agregar dos gotas de suero de Coombs
  • Centrifugar y leer
  • En los negativos agregar Control Coombs
interpretacion
INTERPRETACION
  • ¿En que fase ocurrió la reacción?
  • ¿cuál es el resultado del control autólogo?
  • ¿Cuántas células reaccionan?
  • ¿Reaccionan con la misma fuerza y en la misma fase?
  • ¿Hay hemólisis o campo mixto?
  • ¿Están realmente aglutinados los GR o se debe a fenómeno de rouleaux?
interpretacion1
INTERPRETACION
  • ¿En que fase ocurrió la reacción?
    • IgG reacciona mejor en fase antiglobulínica. Pueden ser aglutinantes a 37ºC.
    • IgM reacciona mejor a baja temperatura y es capaz de aglutinar GR suspendidos en solución fisiológica a temperatura ambiente.
    • Hay IgM que pueden reaccionar en SAGH debido a la fijación de complemento.
interpretacion3
INTERPRETACION
  • ¿Cuál es el resultado del control autólogo?
    • Se realiza enfrentando el suero del paciente con sus propios GR de la misma forma que se enfrenta a células del panel celular.
    • Control autólogo negativo en presencia de una detección de anticuerpos irregulares positiva indica la presencia de un Aloanticuerpo.
    • Control autólogo positivo indica la presencia de autoanticuerpos, anticuerpos inducidos por drogas.
interpretacion4
INTERPRETACION
  • ¿Cuál es el resultado del control autólogo?
    • Si el paciente ha sido recientemente transfundido el control autólogo positivo puede deberse a la presencia de una aloanticuerpo unido a los GR transfundidos.
    • La evaluación de muestras con control autólogo positivo o PCD positiva resulta en un problema complejo de resolver que necesita de la experiencia del operador.
    • El control autólogo puede omitirse durante la DAI pero debe realizarse en la identificación.
interpretacion5
INTERPRETACION
  • ¿Cuántas células reaccionan? ¿Reaccionan con la misma fuerza y en la misma fase?
    • Presencia de un único anticuerpo dirigido contra un antígeno presente en ambas células del panel:
      • Todas las células reaccionan en la misma fase y con la misma intensidad
    • Presencia de múltiples anticuerpos.
      • Las células reaccionan con diferente intensidad o en diferentes medios
    • Presencia de autoanticuerpos.
      • Autocontrol positivo
interpretacion6
INTERPRETACION
  • ¿Hay hemólisis o campo mixto?
    • Anti-Lea, anti-Leb, anti-Vel y anti-PP1Pk producen hemólisis in vitro
    • Anti-Sda, Lua y Lub producen reacciones en campo mixto.
interpretacion7
INTERPRETACION
  • ¿Están realmente aglutinados los GR o se debe a fenómeno de rouleaux?
    • Se observa en todas las pruebas que contengan suero del paciente (autocontrol, inversa ABO)
    • Pacientes con relación albúmina-globulinas alterada (por ej. mieloma múltiple)
    • Pacientes que recibieron expansores plasmáticos (por ej. Dextran)
    • No interfiere con la fase aniglobulínica de las pruebas de detección e identificación de anticuerpos irregulares
slide35

EFECTO DOSIS

FyaFyb

Fya Fya

HETEROCIGOTA HOMOCIGOTA

El panel “ideal” tiene G.R. con expresión homocigota para

la mayor cantidad de Ags posibles.

(que expresen efecto de dosis).

Si el resultado fuera anti-Fya

slide36

I, i, Lea, Leb, P1

¿Qué antígenos del panel celular NO expresan

EFECTO DE DOSIS con sus respectivos anticuerpos?

limitaciones
LIMITACIONES
  • Relación suero-células
    • Exceso de anticuerpos
    • Exceso de antígenos
    • Puede aumentarse la relación a 4 gotas de suero para detectar anticuerpos débiles sin agregar potenciadores.
  • Temperatura
  • Tiempo de incubación
  • pH
limitaciones1
LIMITACIONES
  • Tiempo de incubación
    • Reacciones Ag-Ac están en equilibrio dinámico
    • El rango de tiempo es entre 30-60 minutos para sistemas preparados en solución salina
    • Los medios potenciadores pueden disminuir este tiempo a 10 minutos
limitaciones2
LIMITACIONES
  • pH
    • Mayoría de los anticuerpos reaccionan entre 6.8 y 7.2
    • Hay ejemplos de anti-M que reaccionan mejor a 6.5
metodo para interpretar resultados de identificacion
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • Control antólogo
  • Exclusión
  • Inclusión
  • Tipificación GR del paciente
  • Calculo de error
metodo para interpretar resultados de identificacion1
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • Exclusión
    • Excluir aquellas especificidades que no son responsables de la reactividad observada
    • Examinar las células con resultados negativos en todas las fases
    • Los antígenos presentes en las células que no reaccionaron no son el blanco del anticuerpo presente en el suero
    • EFECTO DE DOSIS
metodo para interpretar resultados de identificacion2
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • Evaluar los resultados
    • Inclusión: evaluar los resultados obtenidos y comparar con la clave para cada especificidad
  • Tipificar GR del paciente
    • Debe estar ausente el antígeno hacia el cual está dirigido el/los anticuerpos.
  • Calculo de error
metodo para interpretar resultados de identificacion4
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • Pensar en mas de una especificidad
    • La “clave”observada NO se ajusta a la de un sólo anticuerpo
    • Se observan reacciones de intensidad variable, que NO se explican por “efecto de dosis”.
    • Diferentes hematíes reaccionan en distintas fases
    • Al intentar confirmar la especificidad de un único Ac, se obtienen resultados inesperados.
metodo para interpretar los resultados
METODO para interpretar los resultados
  • CONTROL AUTOLOGO ?
    • NEGATIVO ALO ANTICUERPO
  • EXCLUSION
    • Qué Ag siguen implicados luego de la exclusión
  • TIPIFICACION GR PACIENTE
    • Ag ausente en membrana del GR
  • INCLUSION
    • La clave obtenida coincide con alguna prevista en el panel?
  • CONFIRMAR PROBABILIDAD DE ERROR
metodo para interpretar resultados de identificacion5
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • NO excluidos
    • c
    • E
    • Lea
  • NO excluidos por heterocigota
    • M
    • S
metodo para interpretar resultados de identificacion6
METODO PARA INTERPRETAR RESULTADOS DE IDENTIFICACION
  • Inclusión: la clave obtenida coincide con alguna especificidad del panel?
    • c
  • Tipificación GR del paciente
    • R1R1
tecnica en gel7
TECNICA EN GEL

Aglutinación

Gel

ad