现代生物技术内容的复习

1. 现代生物技术内容的复习 合肥九中 王艳艳

2. 植物细胞工程理论基础？―――细胞全能性： • 概念? • 原因（物质基础）? • 各种细胞全能性大小比较? • 是不是所有的细胞具有? • 理论上，什么样的细胞具有，而实际上?

3. 细胞的全能性 • 植物细胞表现出全能性的必要条件是什么？（离体状态，一定的营养物质？激素？和其他一些外界条件？ ） • 生物体内已经分化的细胞为何不能表达出全能性？ • 植物组织培养的成功证明了?

4. 离体的植物器官、组织或细胞（外植体） ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽 ↓ 植物体 植物体的什么部位适合做外植体?是不是一定要用体细胞？ 离体的植物器官、组织或细胞能不能直接拿来做植物组织培养？ 在植物组织培养过程中，为什么要进行一系列的消毒，灭菌，并且要求无菌操作？ 植物组织培养的基本过程

5. 离体的植物器官、组织或细胞（外植体） ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽 ↓ 植物体 需要什么条件才能发生脱分化？ 脱分化的概念? 愈伤组织的特点? 离体的器官、组织或细胞如果不进行脱分化处理，能否培养成完整植物体？ 植物组织培养的基本过程

6. 离体的植物器官、组织或细胞（外植体） ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽 ↓ 植物体 再分化的概念? 决定植物细胞脱分化、再分化的关键因素是什么？ 植物组织培养的基本过程

7. 离体的植物器官、组织或细胞（外植体） ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽 ↓ 植物体 培育无病毒植物 （怎样获得无病毒植株？） 单倍体育种 （花药离体培养阶段） 大规模的植物细胞培养－－生产药物、食品添加剂、香料、色素和杀虫剂等 植物组织培养有哪些应用？

8. 离体的植物器官、组织或细胞（外植体） ↓脱分化 愈伤组织 ↓再分化 根、芽 ↓ 植物体 制造人工种子；（？什么是人工种子？人工种子应由哪几部分构成？有哪些优点？） 快速繁殖（哪些植物需要？） 植物组织培养有哪些应用？

9. 什么是原生质体？ 为何要制备原生质体？如何制备？ 如果将去除细胞壁的植物细胞放在等渗溶液中，细胞呈现什么形状？理由是什么？ 人工诱导原生质体融合的方法？ 植物体细胞杂交基本过程

10. 原生质体融合后就形成杂种细胞？ 植物体细胞杂交和植物组织培养有何区别和联系？ 植物体细胞杂交基本过程

11. 多细胞动物和人体的细胞都生活在？内环境可以为细胞提供?多细胞动物和人体的细胞都生活在？内环境可以为细胞提供? 体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 动物细胞培养所用的培养液的成分是？ 动物细胞培养 基本过程

12. 取材？ 为什么动物细胞要分散成单个细胞培养？ 如何分散？ 动物细胞培养基本过程

13. 进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？ 胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ 动物细胞培养基本过程

14. 为什么要定期用胰蛋白酶把培养细胞从瓶壁上脱离？为什么要定期用胰蛋白酶把培养细胞从瓶壁上脱离？ 原代培养与传代培养的概念？ 细胞株和细胞系的概念？ 动物细胞培养基本过程

15. 动物细胞培养的应用 从动物细胞培养的目的看其应用： • 用于检测有毒物质――――检测原理？优点？ • 大规模地生产蛋白质生物制品，如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等； • 为皮肤大面积烧伤的病人提供移植用的皮肤――优点？

16. 人工诱导动物细胞融合的方法有？ 动物细胞融合与精子和卵细胞的融合有什么不同？ 诱导融合后的细胞是不是就是杂种细胞？ 融合后的细胞会表现出什么样的表型特征？ 动物细胞融合

17. 运用了动物细胞工程的什么技术手段？ 制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？ 关键环节？ 单克隆抗体的制备

18. 单克隆抗体 • 单克隆抗体的概念及特点？（化学性质单一、特异性强、灵敏度高，产量也大大高于血清抗体） • 单克隆抗体的应用？

19. 体细胞核移植技术 例：1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达（Lucinda）的奶牛，年产奶量为30.8 t，创造了世界奶牛产奶量最高新纪录。目前世界各国高产奶牛场奶牛，年平均产奶量一般为十几吨，而我国奶牛产奶量年平均水平仅为3～4 t。 • （1）能利用体细胞核移植技术克隆高产奶牛卢辛达吗？ • （2）如果将克隆高产奶牛卢辛达的任务交给你，你将如何对它进行克隆？

20. 体细胞核移植技术 • 在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ • 用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ • 你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？

21. 用到哪些现代生物技术？ 为什么用去核卵细胞或卵母细胞？ 克隆动物的成功证明了？ 克隆动物的意义？ 哺乳动物的克隆

22. 植物组织培养 动物细胞培养 主要原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基的物理质 固体 液体 培养基的成分 少量水、矿质元素、蔗糖 维生素、植物激素、有机添加剂如甘氨酸和琼脂等 较多水、无机盐、葡萄糖、 维生素、氨基酸及动物血清 培养结果 一般是培育成植株也可只培育成胚状体用于制人工种子 培育成细胞株或细胞系 培养目的（用途） 快速繁殖、培养无病毒植株制成人工种子、大规模培育转基因植物，生产生物制品 获得细胞或细胞产品，如生产单抗，用于皮肤移植，检测有毒物质等 都需要适宜的温度、酸碱度和无菌条件 也有植物细胞培养

23. 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术（基本相同） 原理 细胞膜的流动性 培养基的物理性质 固体 液体 方法 去掉细胞壁后诱导原生质体融合 使体细胞分散后直接诱导细胞融合 诱导融合的手段 物理法：离心、振动、电刺激 化学法：常用的如诱导剂聚乙二醇（PEG） ( 同( 同前)还可用灭活的病毒诱导 融合过程 包括膜融合、质融合和核融合，其中膜融合是细胞融合的关键，核融合是在杂种细胞的第一次有丝分裂时进行的，植物体细胞融合完成的标志是杂种细胞产生出新的细胞壁 筛选 都需要 目的 再通过植物组织培养过程获得杂种植株 再通过动物细胞培养过程制备单抗

24. 1．菌种的选育： 为何要选育? 如何从自然界分离菌种？ 如何选育？ 谷氨酸发酵中选择什么样的菌种来进行谷氨酸的发酵生产？为什么？如何获得这样的菌种？ 发酵工程的内容

25. 2.培养基的配制 需注意什么问题？（培养基配制的三个基本原则；尽量降低成本） 谷氨酸发酵生产的培养基的原料和分类？ 该培养基从化学成分和物理性质上属于何种类型的培养基？（天然、液体培养基） 这种培养基在工业生产上有何好处？ 发酵工程的内容

26. 3．灭菌： 灭菌的目的？ 杂菌指什么？ 什么东西需灭菌？ 灭菌方法？ 发酵工程的内容

27. 4.扩大培养和接种： 为何要进行扩大培养?怎样进行？和发酵过程所需的条件是否一致？ 接种时应注意什么？ 发酵工程的内容

28. 5．发酵过程： 为什么说发酵过程是发酵的中心环节？ 需检测哪些项目？ 需控制哪些发酵条件？控制的原因？这些条件为何会变化？怎样控制？ 实际生产中为何常用连续培养的方法? 发酵工程的内容

29. 谷氨酸发酵过程的条件控制？ 谷氨酸发酵过程的前期处理? 发酵、发酵工程及发酵过程概念的差异？ 发酵工程的内容

30. 6．分离提纯： 分离提纯的方法？ 如何制成味精？（从发酵工程的两大类产品联系其应用） 发酵工程的内容

31. 发酵工程的应用 • 1.在医药方面：（1）发酵工程能生产人们所需的药品。例如：通过青霉发酵能生产青霉素。（2）通过发酵工程能生产基因药品。例如：将合成的人的胰岛素基因转移到大肠杆菌细胞内构建成“工程菌”，再通过培养“工程菌”即可获得人的胰岛素。

32. 2在食品工业方面：（1）发酵工程能为人们提供丰富优质的传统发酵产品。如：生产呻酒，果酒等。（2）发酵工程能生产各种食品添加剂：酸味剂：柠檬酸、乳酸等。鲜味剂：谷氨酸等。色素：β-胡萝卜素等。甜味剂：高果糖浆等。2在食品工业方面：（1）发酵工程能为人们提供丰富优质的传统发酵产品。如：生产呻酒，果酒等。（2）发酵工程能生产各种食品添加剂：酸味剂：柠檬酸、乳酸等。鲜味剂：谷氨酸等。色素：β-胡萝卜素等。甜味剂：高果糖浆等。

33. 3．发酵工程能为解决人类粮食短缺问题开辟新途径。例如：通过发酵可获得大量的微生物菌体——单细胞蛋白。20世纪80年代中期全世界的单细胞蛋白年产量已达2.0x107t，广泛用于食品加工和饲料中。3．发酵工程能为解决人类粮食短缺问题开辟新途径。例如：通过发酵可获得大量的微生物菌体——单细胞蛋白。20世纪80年代中期全世界的单细胞蛋白年产量已达2.0x107t，广泛用于食品加工和饲料中。 生产一些营养物质如维生素、氨基酸等

34. 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术/遗传工程 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物 基因工程的概念

35. 1．提取目的基因： 什么是目的基因？ 获取目的基因的方法有哪些？ 图中所示的方法为？ 基因工程的基本步骤：

36. 2．目的基因与运载体结合： 运载体的作用? 运载体必须具备的条件是什么？ 运载体的种类？ 最常用的运载体是什么？ 基因工程的基本步骤：

37. 为何要使用同一种限制酶来分别切割目的基因和质粒？（作用特点？这体现了酶的？专一性）为何要使用同一种限制酶来分别切割目的基因和质粒？（作用特点？这体现了酶的？专一性） 也决定了限制酶具有？（多样性）结果？ 为什么要使用DNA连接酶？ 基因工程的基本步骤：

38. 要想将某个特定基因与质粒相连，需要用几种DNA限制性内切酶和几种DNA连接酶处理？ 为什么细菌中限制酶不剪切细菌本身的DNA？ 基因工程的基本步骤：

39. 3．将目的基因导入受体细胞： 将目的基因导入受体细胞的途径？ 将含目的基因的重组质粒导入细菌受体细胞的过程中常用到哪种化学试剂？其作用是什么？ 常用的受体细胞有哪些？ 基因工程的基本步骤：

40. 4．目的基因的检测和表达： 在目的基因的检测过程中，检测的对象是什么？ 为何要进行检测？举例说明如何检测? 转基因生物形成的标志？ 基因工程的基本步骤：

41. 生物工程各分支领域之间的关系 • 人们通常将基因工程和细胞工程看做生物工程的上游处理技术，将发酵工程和酶工程看做生物工程的下游处理技术 。 • 基因工程和细胞工程可以为发酵工程和酶工程提供菌种 。 • 无论从微生物得到酶或用遗传工程菌获得产品，都必须依赖发酵工程技术 。

42. 生物工程各分支领域之间的关系 • 酶工程可以为基因工程、细胞工程和发酵工程提供所需的工具酶。 • 酶工程中酶的生产一般要通过发酵工程来进行。 • 细胞工程最主要和基础的技术是动植物细胞的培养技术，而基因工程中受体细胞的培养和筛选，胚胎工程中动物细胞的培养都需要细胞培养的技术。

43. 现代生物技术内容与生命的物质基础和结构基础现代生物技术内容与生命的物质基础和结构基础 组成细胞的元素和化合物―― • 植物组织培养、动物细胞培养、基因工程和发酵工程中微生物的培养都需要提供一定的营养物质：培养基比较(植物组织培养的,动物细胞培养的,发酵工程的，基因工程的)且都需要灭菌（或消毒）和无菌操作

44. 细胞的显微结构与亚显微结构―― • 细胞工程中就要在细胞整体水平或细胞器水平上按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质或获得细胞产品：植物体细胞杂交要去除细胞壁，要诱导融合的原生质体再生出细胞壁；细胞融合证明细胞膜具有流动性；细胞器移植；核移植等 • 基因工程中的质粒； • 发酵工程中更是离不开微生物细胞

45. 细胞的增殖—— • 基因工程，发酵工程中微生物的培养要涉及微生物的分裂 • 植物组织培养和动物细胞培养都要发生真核细胞的有丝分裂；

46. 细胞的分化与细胞的全能性―― 植物组织培养，植物体细胞杂交，胚胎分割，克隆动物，试管婴儿 细胞的癌变―― 单克隆抗体的制备，“生物导弹”，动物细胞培养中的细胞系 细胞的衰老――动物细胞培养中的取材，细胞代数问题，细胞株、细胞系等

47. 现代生物技术与生物的新陈代谢 1．酶与现代生物技术： • （1）生物工程本身需要酶：如基因工程中需限制酶、DNA连接酶等；细胞工程中需纤维素酶、果胶酶，胰蛋白酶等；发酵工程酶工程更是离不开酶 • （2）生物工程生产酶：基因工程为一些特定酶的生产提供菌种，通过发酵工程可以获得特定的酶

48. （3）酶的专一性与多样性在生物工程中有体现――如限制酶的作用特点及种类，DNA连接酶的特定作用，去除植物细胞壁的酶解法，动物细胞工程中胰蛋白酶的运用，微生物代谢旺盛和其体内酶的种类繁多密切相关（3）酶的专一性与多样性在生物工程中有体现――如限制酶的作用特点及种类，DNA连接酶的特定作用，去除植物细胞壁的酶解法，动物细胞工程中胰蛋白酶的运用，微生物代谢旺盛和其体内酶的种类繁多密切相关 • （4）酶的催化作用需要适宜的条件――植物组织培养、动物细胞培养、基因工程和发酵工程的微生物培养中都需要提供合适的温度和酸碱度

49. 2．细胞的代谢产物： • 细胞的代谢废物―― 有害代谢废物的积累是细胞培养、发酵工程中需要注意的问题 • 微生物（包括转基因菌种）、植物细胞、动物细胞的一些特定的代谢产物――是现代生物技术的产品

50. 3．新陈代谢的类型： • （1）植物组织培养的培养基中有蔗糖，且培养的一段时间内要求无光――异养； • （2）动物细胞培养――说明其代谢类型？ • （3）发酵工程中培养的微生物多为异养需氧型，也有异养厌氧型，要根据所培养的微生物的不同代谢类型提供培养条件