slide1
Download
Skip this Video
Download Presentation
ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 64

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE - PowerPoint PPT Presentation


  • 494 Views
  • Uploaded on

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE. Plan. Ag-At reakcije (opšte osobine) Imunoaglutinacija Imunoprecipitacija Ag-At reakcije sa obeleženim reagensima Ag-At reakcije zavisne od komplementa. Ag-At reakcije su laboratorijske r eakcije između antigena i odgovarajućih specifičnih antitela.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE' - gary-watkins


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide2
Plan
  • Ag-At reakcije (opšte osobine)
  • Imunoaglutinacija
  • Imunoprecipitacija
  • Ag-At reakcije sa obeleženim reagensima
  • Ag-At reakcije zavisne od komplementa
slide3

Ag-At reakcije su laboratorijske reakcije između antigena i

odgovarajućih specifičnih antitela

Ispituje se prisustvo ili antigena (korišćenjem poznatog antitela) ili antitela (korišćenjem poznatog antigena) u uzorku (npr. serumu)

Tradicionalno se zovu i serološke reakcije

Mogu da budu:

Rezultat:

1.Kvalitativne

POZITIVAN

NEGATIVAN

2.Kvantitativne

Ag - KONCENTRACIJA (npr. 2 mg/ml)

At - TITAR (npr. 1/80)

TITAR je mera količine specifičnih antitela i predstavlja vrednost (recipročnu) najvećeg razblaženja seruma koji daje pozitivnu reakciju

slide5

IMUNOAGLUTINACIJA je reakcija između korpuskularnog (nerastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela

Antigen je najčešće na površini ćelije (npr. bakterije) ili je solubilan molekul vezan za inertnu nesolubilnu česticu (nosač)

Rezultat reakcije je aglutinat, vidljiva struktura nastala

zgomilavanjemtj.aglutinacijom čestica

Optimalno stvaranje aglutinata javlja se u zoni ostvarivanja

ekvivalentnog odnosa između antitela i antigena

slide6

EKVIVALENTAN

(OPTIMALAN)

ODNOS

VIŠAK ANTIGENA

VIŠAK ANTITELA

Ag-At KOMPLEKSI:

AGLUTINACIJA:

REZULTAT:

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN

(LAŽNO NEGATIVAN)

FENOMEN PROZONE

VELIKI

POSTOJI

POUZDAN

(POZITIVAN)

MALI

NE POSTOJI

NEPOUZDAN

(LAŽNO NEGATIVAN)

slide7

Detekcija At

Primena (Primer)

Krajnja identifikacija

bakterija

(enterobakterije)

Detekcija Ag

DIREKTNA

BAB test

(brucele)

IMUNOAGLUTINACIJA

Detekcija At

(Ag vezan za nosač)

Lateks RF test

(reumatoidni

faktor)

INDIREKTNA

(pasivna)

Detekcija Ag

(At vezano za nosač)

HBsAg test

(hepatitis B virus)

slide9

IMUNOPRECIPITACIJA je reakcija između solubilnog(rastvorljivog) antigena i odgovarajućih specifičnih antitela

Antigen je najčešće neki produkt mikroorganizma (npr. toksin) ili protein plazme i drugih telesnih tečnosti (imunoglobulini, komponente komlementa itd.)

Rezultat reakcije je precipitat(talog), tj. dolazi do izdvajanja

antigen-antitelo komkpleksa u vidu taloga

Do formiranja precipitata dolazi u zoni ostvarivanja ekvivalentnog

(optimalnog) odnosakoncentracija antitela i antigena

slide10

Metodi imunoprecipitacije mogu da se odigravaju u:

tečnoj sredini

slobodnom difuzijom (talog se formira posle nekoliko minuta)

polučvrstoj sredini (gelu)

slobodnom difuzijom (talog se formira posle više dana)

pomoću električne struje (talog se formira posle nekoliko sati)

slide11

PRIMER

RING test

(Kvalitativna)

Askolijeva reakcija

(antraks)

U TEČNOJ SREDINI

određivanje

koncentracije

proteina u serumu

(Ig, komponente C‛)

Nefelometrija

(Kvantitativna)

IMUNOPRECIPITACIJA

Dvostruka imunodifuzija

(Kvalitativna)

Elekova proba

(difterija)

U POLUČVRSTOJ SREDINI

(GELU)

određivanje

koncentracije

proteina u serumu

(Ig, komponente C‛)

RID test

(Kvantitativna)

slide13

Nefelometrija

(princip)

slide15

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test

(princip)

At u gelu

2

Ag u rupice:

3

1

RID

IgG

4

5

slide16

Jednostruka radijalna imunodifuzija – RID test

(princip)

D2 (mm2)

3

2

1

4

5

Ag – koncentracija (g/l)

slide17

ANTIGEN-ANTITELO

REAKCIJE SA OBELEŽENIM REAGENSIMA

slide18

ANTIGEN-ANTITELO REAKCIJE

SA OBELEŽENIM ANTITELIMA

M

M - marker

At

Fc

Fab

Fab

ENZYME-LINKEDIMMUNOSORBENTASSAY (ELISA) - marker ENZIM

IMUNOFLUORESCENCIJA (IF) - marker FLUORESCENTNA BOJA

RADIOIMMUNOASSAY (RIA) - marker RADIOAKTIVNI IZOTOP

slide19

Enzimski imuno-test

(ELISA)

Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (tipično u serumu)

Marker je enzim, a obeleženo je primarno At (specifično za antigen) ili

sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Bazira se na principu promene boje supstrata pod dejstvom enzima

Signal se detektuje kolorimetrijski (pomoću spektrofotometra)

Može da bude kvalitativna ili kvantitativna

Obavlja se u pločama za mikrotitraciju (pločama sa 96 rupica)

slide20

ELISA

(ploča sa pozitivnim uzorcima – primer 1)

slide21

ELISA

(ploča sa pozitivnim uzorcima – primer 2)

slide22

Ag

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

uzorak

(serum)

neobeležena

Ag-specifična

At

slide24

E

E

E

E

E

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

12

obeležena

Ag-specifična

At

6

Ispiranje

Inkubacija

slide25

E

E

ELISA (detekcija Ag u tečnom uzorku - SANDWICH ELISA)

12

dodavanje

supstrata

6

Kolorimetrijska detekcija

slide26

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispitivani serum

Antigen kojim je

obložena ploča

slide27

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

12

6

Ispiranje

Inkubacija

slide28

E

E

E

E

E

E

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

Obeležena

Ig-specifična At

slide29

E

E

E

E

E

E

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

12

6

Inkubacija

slide30

E

E

E

E

E

E

E

E

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispiranje

slide31

E

E

E

E

12

ELISA detekcija antitela

(detekcija At u serumu pacijenta)

6

Kolorimetrijska detekcija

slide33

Imunofluorescencija

(IF)

Koristi se za detekciju antigena u čvrstim uzorcima (npr. na ili u ćeliji/tkivu) ili antitela (tipično u serumu)

Marker je fluorescentna boja (fluorohrom), a obeleženo je

primarno At (specifično za antigen) ili sekundarno At (anti-Ig antitelo)

Bazira se na principu emitovanja boje pod dejstvom UV svetla

Signal se detektuje pomoću fluorescentnog mikroskopa

Može da bude samo kvalitativna i eventualno semi-kvantitativna

Obavlja se obično na mikroskopskim pločicama

slide34

Detekcija Ag u/na ćelijama i tkivima

DIREKTNA (DIF)

(obeleženo primarno At)

specifičnost

IMUNOFLUORESCENCIJA

Detekcija Ag u/na ćelijama i tkivima

INDIREKTNA (IIF)

(obeleženo sekundarno At)

osetljivost

Detekcija At u serumu

slide35

Imunofluorescencija

(primer 1)

Helicobacter pylori

Borrelia burgdorferi

slide36

Imunofluorescencija

(primer 2)

Neutrofili

slide37

Imunofluorescencija

(primer 3)

Glomerulonefritis

slide39

F

F

F

F

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

obeležena

Ag-specifična

At

fiksirani

uzorak

slide40

F

F

F

F

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

12

6

Ispiranje

Inkubacija

slide41

F

F

DIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

Ekscitacija

Fluorescencija

slide42

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

neobeležena

Ag-specifična

At

fiksirani

uzorak

slide43

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

6

Ispiranje

Inkubacija

slide44

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

Obeležena

Ig-specifična At

Inkubacija

slide45

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

12

6

Inkubacija

slide46

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

Ispiranje

slide47

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija Ag u čvrstom uzorku)

Ekscitacija

Fluorescencija

slide48

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispitivani serum

fiksirani

antigen

slide49

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

6

Ispiranje

Inkubacija

slide50

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

Obeležena

Ig-specifična At

Inkubacija

slide51

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

12

6

Inkubacija

slide52

F

F

F

F

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

Ispiranje

slide53

F

F

F

F

INDIREKTNA IMUNOFLUORESCENCIJA

(detekcija At u serumu pacijenta)

Ekscitacija

Fluorescencija

slide54

Radio-imunotest

(RIA)

Koristi se za detekciju antigena u tečnim uzorcima (npr. serumu) ili antitela (tipično u serumu)

Marker je radioaktivni izotop (npr. 125I), a obeležen je ili antigen ili

antitelo

Bazira se na principu radioaktivnosti

Signal se detektuje pomoću brojača (broj raspada)

Vrlo osetljiv kvantitativan test

Problem zbog rada sa radioaktivnošću i odlaganja otpada

slide56

Ag-At reakcija in vitro koje postaju detektabilne (merljive)usled aktivacije prisutnog komplementa

  • Koriste se za:
  • Funkcionalno ispitivanje komplementa
  • Test titracije komplementa

2. Detekciju antigena ili antitela

Reakcija vezivanja komplementa (RVK)

Mikrocitotoksični test (HLA tipizacija)

slide57

Test titracije komplementa

(Funkcionalno ispitivanje komplementa)

Postupak za određivanje ukupne hemolizne aktivnosti C’

Zasniva se na lizi senzibilisanih eritrocita (eritrocita obloženih

anti-eritrocitnim antitelima) u toku aktivacije klasičnog puta

Izražava se u:

CH50 jedinicama u ml (spektrofotometrijski na osnovu optičke

gustine oslobođenog hemoglobina)

CH100 jedinicama u ml (golim okom)

slide58

Reakcija vezivanja komplementa

(Test fiksacije komplementa)

Postupak za određivanje specifičnih antitela (npr. za respiratorne

viruse) u serumu pacijenata

Zasniva se na lizi senzibilisanih eritrocita (eritrocita obloženih

anti-eritrocitnim antitelima) usled aktivacije komplementa

nastalim Ag-At kompleksima

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072556781/student_view0/chapter31/animation_quiz_4.html

slide59

Reakcija

vezivanja

Komplementa

(princip)

Serum sa

antitelima

Serum bez

antitela

Serum

+

Antigen

vezan

Antigen

slobodan

Antigen

Liza eritrocita

negativan

Odsustvo lize

eritrocita

(eritrocitno

dugme)

pozitivan

+

Komplement

vezan

(aktiviran)

Komplement

slobodan

(neaktiviran)

Komplement

+

Komplement

aktiviran

Nema

komplementa

Senzibilisani Er

(indikator)

=

Nema lize Er

Taloženje Er

Liza Er

Rezultat

Negativan

Pozitivan

slide61

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE

(princip)

detekcija beta HCG u urinu trudne žene

koriste se tri vrste antitela:

1. anti-HCG antitelo - obeleženo koloidnim zlatom (slobodno)

2. anti-HCG antitelo – neobeleženo (fiksirano za membranu)

3. anti-imunoglobulinsko antitelo – neobeleženo (fiksirano za

membranu)

slide62

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE

(rezultati)

+

uzorak (urin)

pozitivan

uzorak (urin)

negativan

slide63

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE

(pozitivan rezultat)

uzorak

(urin)

pozitivan

uzorak

(urin)

neobeleženo

anti-HCG

At

anti-Ig

At

+

HCG

difuzija

difuzija

obeleženo

anti-HCG

At

slide64

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

Z

BRZI TEST ZA OTKRIVANJE TRUDNOĆE

(negativan rezultat)

negativan

uzorak

(urin)

uzorak

(urin)

neobeleženo

anti-HCG

At

anti-Ig

At

difuzija

difuzija

obeleženo

anti-HCG

At

http://bio-alive.com/animations/immunology.htm

ad