G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 8

G énmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák PowerPoint PPT Presentation


  • 63 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

G énmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák. A P elem technikák: génmanipuláció tetszés szerint. Irányított génmanipuláció.

Download Presentation

G énmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

Génmanipuláció ecetmuslicában: P elem technikák

A P elem technikák: génmanipuláció tetszés szerint


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

Irányított génmanipuláció

Az irányított génmanipuláció célja egy endogén gén módosítása vagy cseréje egy bevitt szekvenciára. A bevitt szekvencia meghatározott helyeken hordoz olyan célzott mutációkat, amelyek elrontják, vagy megváltoztatják az érintett gén funkcióját.

Irányított géncsere általánosan használt az élesztő és egér genetikában. Lineáris DNS-t juttatnak be a sejtekbe, amit a sejtek rekombinációs gépezete integrál a kromoszómákba általában a bevitt szekvencia és az ennek megfelelő endogén gén közötti homológ rekombinációval.

A módszer kritikus lépése a lineáris DNS hatékony bejuttatása a sejtekbe. Élesztőkben hatékony transzformálással, egérben pedig embrionális őssejtek elektroporálásával érik ezt el.

Drosophilában egyik módszer sem működik, ezért Rong és Golic egy új eljárást dolgozott ki, aminek lényege, hogy a rekombinációt indukáló lineáris DNS-t a sejtekben hozzák létre in vivo.


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

Az irányított génmanipuláció kidolgozói Drosophilában

Kent Golic

Yikang Rong


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

FRT

I-CreI

I-SceI

FRT

white

donor

transzformálás

Flp

+

A génmanipulációs donor konstrukció felépítése

  • Hordozza a célgénnek megfelelő módosított (mutáns) szekvenciát

  • Tartalmazza a CreI és SceI meganukleázok felismerő szekvenciáit

  • Tartalmaz két tandem Flp helyspecifikus rekombináz felismerő helyet

  • Hordozza a mini-white marker gént


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

Az irányított génmanipuláció mechanizmusa - 1

FRT

I-CreI

I-SceI

FRT

white

donor

  • 1. A donor konstrukció bejuttatása aDrosophila genomba

  • 2. Az Flp rekombináz extra-kromoszómális kör alakú DNS molekulát hoz létre

transzformálás

Flp

+


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

Az irányított génmanipuláció mechanizmusa - 2

  • 3. A SceI endonukleáz egy kettősszálú törést hoz létre a kör alakú donor molekulában

  • 4. Rekombináció játszódik le a lineáris donor szekvencia és a vele homológ célgén között, ami egy duplikációt eredményez

  • 5. CreI endonukleáz hasítás egy második homológ rekombinációs eseményt indukál a duplikálódott szekvenciák között

  • 6. A duplikáció megszűnik, és a célgén mutáns allélja tanulmányozható

X

célgén

I-CreI

CreI indukció


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

A single stranded annealing (SSA) folyamata

SSA akkor indukálódik, amikor kettősszálú törés jön létre két tandem duplikálódó DNS szekvencia között

1. Az ismétlődő szekvenciákra is kiterjedő egyszálú DNS szekvencia képződik

2. A komplementer szekvenciák kapcsolódnak egymáshoz

3. A nem párosodó végek emésztése és az egyszálú hézagok feltöltése után megszűnik a duplikáció, és eliminálódik a duplikációk közötti szekvencia


G nmanipul ci ecetmuslic ban p elem technik k

A homológ rekombináció típusai

ends-in

ends-out


  • Login