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关于氨基酸的 定量分析. 03 化学 3 班 杨曦 03081095. 氨基酸的分析方法. 化学分析法 —— 甲醛滴定法 甲醛滴定法用于氨基氮的 测定 , 可以测出样品中总氨基酸 的含量 , 其原理是在中性或弱碱 性水溶液中 , 氨基酸的 α— 氨基与醛类反应生成 Schiff 碱 :α— 氨基酸与甲醛反应生成亚 甲基亚氨基衍生物. 亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定 , 从而得到样品中总氨基酸的含量。 但是,甲醛法准确度差 , 终点较难掌握。

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关于氨基酸的 定量分析

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关于氨基酸的定量分析

03化学3班

杨曦

03081095


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氨基酸的分析方法

化学分析法——甲醛滴定法

甲醛滴定法用于氨基氮的

测定, 可以测出样品中总氨基酸

的含量,其原理是在中性或弱碱

性水溶液中,氨基酸的α—氨基与醛类反应生成Schiff碱:α—氨基酸与甲醛反应生成亚

甲基亚氨基衍生物


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亚甲基甲氨基衍生物用碱滴定,从而得到样品中总氨基酸的含量。

但是,甲醛法准确度差,终点较难掌握。

我们还学过凯氏定氮法,测定样品中总氮的含量。虽然准确度高,但操作步骤复杂,试剂耗量多,测定周期长。


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分光光度法——茚三酮法(nin - hydrin) :

茚三酮是一种能使氨基酸生成在可见光区有吸收的衍生试剂。该方法的基本原理是经阳离子交换柱分离出的氨基酸与茚三酮混合,经加热反应后,一级胺与之生成蓝紫色化合物,二级胺与之生成黄色化合物。两种衍生物使用双通道紫外检测器同步检测,检测波长分别为570nm 和436nm。

茚三酮


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亮黄色化合物

紫色化合物


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茚三酮衍生显色反应的灵敏度可达2 ×10 - 10~5 ×10 - 10mol/ L ,衍生物稳定性较好。衍生剂能同时与一级和二级氨基酸反应并同步检测

但是,衍生反应条件要求较高,需附设加温衍生装置,仪器造价高并专一性强。分析时间长,分析成本高,工作效率低。


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氨基酸总的含量可以用甲醛滴定法

—NH2与甲醛结合,其碱性消失。这样就可以用碱来滴定—COOH 基,并用间接的方法测定氨基酸的含量。

不同种类的氨基酸需要用不同的方法来测定,例如:

用三硝基苯磺酸法测定赖氨酸……

羊毛水解液中氨基酸含量的测定


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L - 胱氨酸含量的测定

水解液—中和—沉淀过滤—粗品—酸溶—除Fe等杂质—脱色—中和—沉淀过滤—干燥—精制品。

  溴能将胱氨酸氧化成

α- 氨基-β- 磺基- 丙酸,

过量的溴又将碘化钾中碘

离子氧化成游离碘,用碘量

法测定碘的量,从而可进行

L - 胱氨酸的间接测定。

HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH


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  • 氢氧化钠溶液:10 g/ L ,盐酸,碘化钾溶液:450 g/ L ,

  • 用时配制,溴液: C(Br2) = 0.1 mol/ L ,称取溴酸钾3 g ,

  • 溴化钾15 g ,加水溶解成1 000 mL ,置于棕色瓶中保存,

  • 淀粉溶液:5 g/ L ,

  • 新鲜配制,硫代硫酸钠标准滴定溶液: C(Na2S2O3) = 0.1 mol/ L 。


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KBrO3 + 5KBr + 6HCl ——3Br2 + 6KCl + 3H2O

S —CH2 —CHNH2 —COOH

5Br2 + ︱ + 6H2O

S— CH2— CHNH2 —COOH

——2HO2S —CH2 —CHNH2 —COOH+ 10HBr

Br2 + 2KI—— I2 + 2KBr

I2 + 2Na2S2O3—— 2NaI +Na2S4O6


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  • 称取干燥后的试样0.13 g (精确至0.000 2 g) ,加氢氧化钠溶液10 mL 移入100 mL 容量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀。

  • 吸取该溶液25.0 mL于碘量瓶中,加溴液50.00 mL ,加盐酸10 mL ,立即加盖,摇匀,于暗处放置10 min

  • 再在冰浴中冷却3 min 以上,加碘化钾5mL ,立即用硫代硫酸钠标准滴定溶液滴定至淡黄色,加入淀粉溶液2 mL ,继续滴定至蓝色消失为终点,同时做空白试验。


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V1 ———空白实验消耗硫代硫酸钠标准滴

定溶液的体积/ mL ;

V2 ———试样滴定消耗硫代硫酸钠标准滴定溶液

的体积/ mL ;

C ———硫代硫酸钠标准滴定溶液的浓度/ mol/ L ;

m ———试样的质量/ g ;

0. 024 03 ———与1. 00 mL 硫代硫酸钠标准滴定溶

液[ C(Na2S2O3) = 1. 00 mol/ L 相当的,以g 表示的L -

胱氨酸的质量


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