实验六
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实验六 酶促反应中的竞争性抑制 PowerPoint PPT Presentation


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实验六 酶促反应中的竞争性抑制. 《 食品生物化学实验 》 课程. 一、实验目的. 1 、掌握琥珀酸脱氢酶的提取方法 2 、学习离心机和高速组织捣碎机的使用 3 、观察竞争性抑制剂和底物浓度对酶促反应速率的影响. 二、实验原理

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实验六 酶促反应中的竞争性抑制

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Presentation Transcript


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实验六酶促反应中的竞争性抑制

《食品生物化学实验》课程


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一、实验目的

1、掌握琥珀酸脱氢酶的提取方法

2、学习离心机和高速组织捣碎机的使用

3、观察竞争性抑制剂和底物浓度对酶促反应速率的影响

二、实验原理

琥珀酸脱氢酶是催化琥珀酸脱氢变为延胡索酸,脱下的氢转移到受氢体FAD。如果在有甲烯蓝存在的情况下,还原态的FADH2会迅速地把氢原子传递给甲烯蓝,从而引起非常明显的颜色变化反应,接受氢原子的甲烯蓝变为无色。酶的活性越高,甲烯蓝脱色的时间就越短。因此甲烯蓝脱色的快慢,可用来表示酶活性的高低。当结构上与琥珀酸极为相似的丙二酸存在时,琥珀酸脱氢酶活性受到抑制。

由于还原的甲烯蓝容易被空气中的氧氧化而重现蓝色,所以本实验用石蜡油封闭反应液,制造无氧的环境。


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三、实验步骤

1、琥珀酸脱氢酶的提取

取新鲜猪心一个(100g),切碎,加100ml的1/15 mol•L-1 Na2HPO4,放入组织捣碎机中捣烂成浆。然后在高速离心机上用12000 rpm离心15min,0-4℃,取上清液即为琥珀酸脱氢酶提取液。(各组共用)

2、竞争性抑制观察

取四支指形管,按下表依次加入各种液体(CK指形管中的酶液要事先煮沸10min),在指形管中加入酶液后,迅速加入甲烯蓝溶液并摇匀,立即加入石蜡油封闭液体(加入石蜡油封闭液体后千万不可震动),以隔绝空气。于室温下静止观察变色情况。


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注:加入石蜡油封闭后开始计算时间,观察1、2、3号哪个退色最快,这个时间长一些,需要耐心等待、观察。2号最慢;1和3快。

四、实验结果

各指形管反应变色时间


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五、讨论分析

1、对比1号管与2号管之间、2号管与3号管之间变色时间的差异,并做出合理的解释(底物、抑制剂、浓度等)。

(1)1号管与2号管比较时间长短,解释原因。

(2)2号管与3号管比较时间长短,解释原因。

2、封石蜡后为什么不能震荡?

六、改进实验建议


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仪器和试剂

主要仪器:烧杯,滴管,指形管,离心机,组织捣碎机,恒温水浴锅。

  • 1/15 mol•L-1 Na2HPO4(pH 7.4)

  • 1%琥珀酸,5%琥珀酸,1%丙二酸(琥珀酸、丙二酸用NaOH调正至pH7.4)

  • 0.02%甲烯蓝,石蜡油


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