Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis
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U niversidad de C arabobo Facultad de Ciencias de la Salud Escuela de Medicina“Dr . Witremundo T orrealba" Departamento de Fisiología y Bioquímica. Tema 3 Técnicas en Bioquímica Electroforesis. Br. Pérez José Br. Pérez Eleanny Br. Pérez Ana. Marzo, 2012.

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Tema 3 Técnicas en Bioquímica Electroforesis

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Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Universidad de CaraboboFacultad de Ciencias de la SaludEscuela de Medicina“Dr. WitremundoTorrealba" Departamento de Fisiología y Bioquímica

Tema 3

Técnicas en Bioquímica

Electroforesis

Br. Pérez José

Br. Pérez Eleanny

Br. Pérez Ana

Marzo, 2012


Objetivos espec ficos

Objetivos Específicos

  • Analizar los fundamentos teóricos de la electroforesis y su utilidad.


Contenido

Contenido

  • Movimiento iónico en un campo eléctrico.

  • Proceso electroforético.

  • Cámara electroforética.

  • Materiales de soporte.

  • Utilidad de cada una de ella:

    • Electroforesis en geles de acrilamida.

    • Electroforesis en geles de acrilamida SDS.

    • Electroforesis bidimensional.

    • Electroforesis en geles de agarosa.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Electroforesis

Es una técnica para la

separación demoléculas

según la movilidad de

estas en un campo

eléctrico


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Desventajas

Afecta la estructura de las proteínas por lo tanto, también afecta a la función de la misma.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Ventajas

  • Separación, visualización y cuantificación del numero de proteínas de una solución.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • Movimiento iónico en un campo

  • electromagnético.

Las moléculas de soluto con carga neta positiva se desplazan hacia el cátodo y las moléculas con carga neta negativa se desplazan hacia el ánodo.

http://www.micruxfluidic.com/es/tecnologia.html


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • Movimiento iónico en un campo electromagnético.

  • La movilidad μ expresada en cm2 por Volt-s de una molécula en un campo eléctrico, viene dada por la velocidad de emigración V expresada en cm/s, respecto de la fuerza del campo E, expresada en voltios/cm.

  • La movilidad depende de la carga de la partícula que, a su vez, depende del pH del medio en el que se encuentre. Por esta razón es necesario indicar el electrolito o el pH utilizado para determinar la movilidad.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Proceso electroforético

En la electroforesis libre una disolución tamponada de la mezcla de proteínas se coloca en una célula de observación en forma de U mayúscula, depositando una capa de tampón (buffer) puro sobre la disolución de proteínas.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • Unidades Horizontales:

  • Unidades Horizontales:

Cámaras electroforéticas.


Tipos de electroforesis

Tipos de electroforesis


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • Electroforesis de frente móvil

Es aquella en la cual las partículas se mueven de forma libre en el medio en que se encuentran dispersas.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • ELECTROFORESIS DE ZONA

La muestra esta obligada a desplazarse sobre un soporte solido tal como el papel o ciertos geles.


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • ¿Qué se necesita para realizar

  • una electroforesis de zona?


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • FACTORES QUE EFECTAN LA ELECTROFORESIS


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

CARGA NETA

TAMAÑO Y FORMA

POTENCIAL DEL CAMPO ELÈCTRICO


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

  • MECANISMOS DE SOPORTE


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

NO RESTRICTIVOS


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

ELECTROFORESIS CON PAPEL

ELECTROFORESIS CON AGAROSA


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

RESTRICTIVOS


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

ELECTROFORESIS DE POLIACRILAMIDA


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Electroforesis en geles de acrilamida

Proteínas presentes en el extracto celular

  • Son químicamente inertes.

  • Son transparentes

  • Son estables en un amplio intervalo de valores de pH, temperatura y fuerza iónica

  • Son resistentes a los agentes desnaturalizantes.

  • Pueden prepararse con tamaños de poro muy variados.

Enzima RNA polimerasa de la bacteria E coli

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición


Tema 3 t cnicas en bioqu mica electroforesis

Electroforesis en geles de acrilamida SDS

  • Compuesto de gran carga negativa.

  • Utilizado para estimar la pureza y la masa molecular.

  • Se une a las proteínas en una cantidad proporcional a la masa molecular.

  • Confiere a todas las proteínas un cociente Carga/Masa similar.

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición


Sds page

SDS - PAGE

  • Separa a las proteínas casi exclusivamente en función de su masa molecular

Lehninger Principios de Bioquímica 4ta Edición


Electroforesis bidimensional

Electroforesis bidimensional

Es la combinación secuencial del enfoque isoeléctrico y la electroforesis en gel con SDS.

SDS - PAGE

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Electroforesis en geles de agarosa

Electroforesis en geles de Agarosa

Los geles se comportan como un tamiz molecular y permiten separar moléculas cargadas en función de su tamaño y forma.


Resumen

Resumen

  • Los procedimientos de fraccionamiento se usan para purificar las proteínas sobre la base de sus solubilidades, cargas, tamaños y especificidades de unión.

  • La electroforesis separa las moléculas según su tamaño y su carga.

  • La SDS-PAGE las separa principalmente por su tamaño.

  • La electroforesis en gel con SDS y el Enfoque Isoeléctrico se pueden utilizar por separado o combinados para obtener una mayor resolución.

  • La electroforesis bidimensional (2D) puede separar cientos de proteínas.


Bibliograf a

Bibliografía

  • http://www.uco.es/organiza/departamentos/bioquimica-biol-GELES%20AGAROSA.pdf

  • http://idibam.blogspot.com/2008/09/electroforesis-en-gel-de-agarosa.html

  • Lehninger. Principios de bioquímica Cuarta Edición.

  • Harold A .Harper .Manual de química Fisiológica Sexta Edición.

  • Biochemistry (3rd Edition) by Christopher K. MathewsKensal E. van Holde Kevin G. Ahern


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Las grandes obras no son hechas con la fuerza, sino con la perseverancia.


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