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METODICHE DI CONCENTRAZIONE CELLULARE Luca Santoleri PowerPoint PPT Presentation


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METODICHE DI CONCENTRAZIONE CELLULARE Luca Santoleri . SIMT A.O. NIGUARDA CA’ GRANDA MILANO. Novara, 14/12/2010. DISCLAIMER. CONSULENTE SCIENTIFICO EON MEDICA RegenLab. Gel di piastrine. - PowerPoint PPT Presentation

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METODICHE DI CONCENTRAZIONE CELLULARE Luca Santoleri

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Presentation Transcript


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METODICHE DI CONCENTRAZIONE CELLULARE

Luca Santoleri

SIMT

A.O. NIGUARDA CA’ GRANDA

MILANO

Novara, 14/12/2010


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DISCLAIMER

CONSULENTE SCIENTIFICO

EON MEDICA

RegenLab


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Gel di piastrine

  • Il gel di piastrine è un prodotto per uso topico costituito da piastrine, di origine autologa o allogenica, che miscelate con opportune soluzioni vengono attivate immediatamente prima dell’uso, a formare un “gel” che viene applicato laddove è necessario favorire un processo riparativo.

  • Il razionale di impiego si basa sul fatto che le piastrine attivate liberano fattori paracrini, o esprimono molecole di membrana in grado di influenzare favorevolmente i processi riparativi.


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Gel di piastrine in Ortopedia

  • E’ possibile ottenere 2 prodotti diversi:

  • GEL PIASTRINICO: solo PRP (apporta solo GFs)

  • Viene applicato nella sede dell’innesto osseo al momento della sua applicazione per attivare l’osteogenesi e favorirne l’integrazione.

  • BIOAUTOGLUE: PRP + crioprecipitato (> consistenza)

  • Viene applicato nei casi in cui l’osso non sia in grado di ricevere l’impianto, e quindi debba essere preparato per un successivo intervento.

Strada P - Il Servizio Trasfusionale, 2000 (Linee Guida SIMTI)


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The use of autologous platelet gel to treat difficult-to-heal wounds: a pilot study (Mazzucco L et al, Transfusion, 2004)

  • 53 patients enrolled

  • 22 had dehiscent sternal wounds (10 treated and 12 controls)

  • 31 had skin necrotic ulcers (17 treated and 14 controls)


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Autologous platelet gel and fibrin sealant enhance the efficacy of total knee arthroplasty: improved range of motion, decreased length of stay and a reduced incidence of arthrofibrosis

Everts et al, Knee Surg Sports Traumatol Arthrosc 2007;15:888–894

In patients in the treatment group the Hb concentration in blood decreased significantly less when compared to the control group (P < 0.001).

The patients showed a superior postoperative range of motion when compared to those of the control group (P < 0.001).

The incidence of arthrofibrosisand subsequent forced manipulation was significantly less (P < 0.001) in patients managed with platelet gel and fibrin sealant.


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COSA DICE LA LEGGE ?

  • Decreto 3 marzo 2005

    “Caratteristiche e modalità per la donazione del sangue e di emocomponenti”

  • Raccomandazione n° R (95) 15 del Comitato dei Ministri agli Stati membri sulla Preparazione, Uso e Garanzia di Qualità degli Emocomponenti

NO STANDARD DI PRODOTTO NE’ DI PROCESSO

IL PARERE DELLA SIMTI

“La produzione di emocomponenti per uso non trasfusionale, o topico, non risulta ancora adeguatamente standardizzata in relazione ad evidenze tecnico-scientifiche”

Standard di Medicina Trasfusionale – Edizioni SIMTI 2007


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Cosa dice la letteratura ?


Concentrazione piastrinica ottimale nel prp l.jpg

Concentrazione piastrinica ottimale nel PRP

2.5 – 4.5 x 106/μL

(Linee Guida SIMTI, 2000)

1 x 106/μL

(Marx RE, J Oral Maxillofac Surg, 2004)

1.2 – 2.0x 106/μL

(Borzini P, Transf Medicine, 2006)

La conc. Pst e’ il vero parametro di qualita’ ?


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A linear increase of the growth factors PDGF-AB, TGF-, VEGF, and EGF with increased platelet number has been reported.

Kevy SV, 27th Annual Meeting of the Society for Biomaterials, St. Paul, Minn., April 26, 2001.

A direct proportionality was found between cell number and growth factor released only for PDGF, TGF-, and EGF. A correlation was not found for VEGF and IGF.

Kevy S V, 5th Annual Hilton Head Workshop on Engineering Tissue, Hilton Head, S.C., February 23, 2001.

Platelet count andGFs concentration (1)


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Platelet count andGFs concentration (2)

  • The growth factor content was not well correlated with the platelet count in whole blood nor with the prp (rp=0.35).

  • No influence of gender or age on platelet count or growth factor concentrations was discovered (except IGF-I).

Weibrich G, Journal of Cranio-Maxillofacial Surgery, 2002; 30: 97–102


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Platelet count andGFs concentration (3)

Eppley BL, Plast Reconstr Surg 2004; 114: 1502 - 1508


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Platelet count andGFs concentration (4)

Advantageous biological effects seem to occur when PRP with a plt concentration of≈ 1 x 106/µlis used.

At lower concentrations, the effect is suboptimal, whilehigher concentrations might have a paradoxically inhibitory effect.

Weibrich G, Bone 2004; 34: 665 - 671

The platelet growth factor content is quite variable among individuals and it is not necessarily proportional to the platelet count.

Borzini P, Mazzucco L,Transfusion 2005

Weibrich G, Int J Oral Maxillofac Impants 2005


Factors affecting the relationship between plt and gf s concentration 1 l.jpg

Factors affecting the relationship between Plt and GFs concentration (1)

Platelet activation

Wbc cell count

Plasma GFs contamination

Collection of GFs by fibrin clot

To evaluate early alfa-granule release during PRP preparation P - selectin can be measured

Eppley BL, Plast Reconstr Surg 2004; 114: 1502 - 1508


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No correlation between plt and GFs concentration in PRP, because:

manipulation-induced plt stress;

variable susceptibility of plts to stress;

microaggregates in PRP affecting an accurate platelet count;

GF-absorbing proteins (fibrin monomers, thrombospondin released from plts during centrifugation)

Mazzucco L, Vox Sang, 2009; 97 (2): 110-8

Factors affecting the relationship between Plt and GFs concentration (2)


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Relationships among plt concentration, GFs concentration and clinical effectiveness isnot clear.Manipulation of pltsand way of gelactivationwere not given enough emphasis as variablesrelevant to GFs release from PRP-gels.Mazzucco L, Vox Sang, 2009; 97 (2): 110-8


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FDA APPROVAL

  • Performance testing :

  • pH

  • Count of RBC, WBC and plts in the WB and in PRP;

  • Evaluation of Platelet Recovery and Platelet Concentration Factor

  • Specific tests for plts functionality:

  • P-selectin expression on platelets (on resting and ADP activated platelets)

  • Hypotonic stress response

  • Platelet aggregation (collagen)


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SISTEMI PRODUTTIVI

  • “HOME MADE”

     SISTEMI DELL’INDUSTRIA

    • APERTI

    • CHIUSI


Gel piastrinico home made l.jpg

GEL PIASTRINICO “HOME MADE”

  • PRPDA AFERESI O DA FRAZIONAMENTO DI SANGUE INTERO (in sacca o in provetta)

  • ATTIVATORE: TROMBINA prodotta dalla ricalcificazione di plasma anticoagulato o SALI DI CALCIO (gluconato o cloruro)

    VANTAGGI

  • Costi diretti < sistemi del commercio

    SVANTAGGI

  • Logistica (cabina a flusso laminare, spazi dedicati)

  • Tempi di lavorazione

  • Risorse umane

  • Difficoltà nello standardizzare i risultati


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SISTEMI DELL’INDUSTRIA (1)

  • Chiusi

    Vantaggi:

  • Rischio ridotto di contaminazione batterica

  • Semi - automatizzazione

  • Prodotto aliquotabile e congelabile

  • Standardizzazione del prodotto

    Svantaggi:

  • Costi diretti > “Home made”

  • Difficoltà nella produzione di piccoli volumi

  • Necessità di predeposito nelsetting autologo

    Campo di applicazione:

    banking nel setting allogenico


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Angel and the competition: S.W.O.T.

Cytomedix, Angel

  • fully automated / 3 sensors

    • user independent / reproducable

    • adjust processing volume

    • “one-push button”

    • automatic separation of

      PPP, PRP and RBC

  • easy set-up

  • 40 – 180 ml of processed blood / cycle

  • maximal 3 cycles / disposable

  • PRP volume is 10% of the processed

    blood volume with a platelet count of

    5 – 6 times baseline

  • Processing time is 28 min/180 blood

  • more flexible

Strictly Confidential; for internal use only


Sistemi dell industria 2 l.jpg

SISTEMI DELL’INDUSTRIA (2)

  • Aperti

    Vantaggi:

  • Prodotto “fresco”

  • Non necessità di predeposito

  • Possibilità di produrre anche piccoli volumi

  • Standardizzazione delle caratteristiche del prodotto

    Svantaggi:

  • Costi diretti > “Home made”

  • Aumentato rischio di contaminazione batterica, se logistica inadeguata

  • Difficoltà logistiche: sovrintendenza del SIMT

  • Prodotto non sempre aliquotabile e congelabile

    Criticità:

  • Variabilità, tra i diversi sistemi, nell’efficacia di produzione della trombina

    Campo di applicazione: setting autologo


Controlli di qualit l.jpg

Controlli di qualità

Human plt counts using the GPS II concentration system

Woodell-May JE, Journal of craniofacial surgery, Vol. 16, Number 5, September 2005


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TAKE HOME MESSAGES

  • Importanza del sistema produttivo

    • efficienza (piastrine, trombina)

    • no plt stress

  • Eseguire controlli di qualità

  • Eseguire test di sterilità

  • Adempiere alla normativa vigente