به نام خدا جنین زایی سوماتیکی مستقیم فلفل

1. به نام خداجنین زایی سوماتیکی مستقیم فلفل • تهیه کننده : مرجان نظری • استاد راهنما: 1

2. مقدمه • جنس فلفل Capsicum از جنس های مهم صیفی جات مصرفی در دنیا میباشد • این گیاه بابذر تکثیر میشود ولی کشت بافت هم دربرنامه های اصلاحی بسیار استفاده میگردد • فلفل جز سرسخت ترین گیاهان ازجهت تولید ساختارمریستم شاخه و جوانه دسته بندی میشود. 2

3. جنین زایی سوماتیکی از روشهای مهم برای مطالعه بیان ژنی وترانسفورماسیون به حساب میاید • این کشت پیش نیازمهمی برای انواع روشهای بیوتکنولوژیک وتوسعه ژنتیکی است. • این مقاله برای توسعه پروتوکل باززایی فلفل از طریق جنین زایی سوماتیکی منظور شده است. 3

4. مواد و روش ها • بذرارقام کالیفورنیا “وندر” و” بالدی “برای این مطالعه استفاده شدند. • برای القای جنین زایی،از هیپوکوتیل گیاهچه استفاده شد. • بذوربه مدت 4 دقیقه در مرکوریک کلراید 1 %ضدعفونی شدند. • همینطور 4 بار با آب مقطر اتوکلاو شده برای ضدعفونی نهایی ،شستشو داده شدند. • بذور ما در بستر MS حاوی 30گرم برلیترساکارز،با Ph 5/8 کاشته شدند. 4

5. هیپوکوتیل از گیاهچه 14 الی 15 روزه ، در MS حاوی 200 میلی گرم گلوتامین و 3%ساکارز ، 8الی 10 ml بریده شد. • محیط کشت ما در دمای 25 C زیرنور فلورسنت 2000 لوکس،و دوره ی نوری 16 -8 بود. • هورمون های 2-4-Dو TDZ با غلظت های 0.0،0/2،0/5،1 و 2 میلی گرم در بستر استفاده شد • آزمایش های مادر 1 بلوک تصادفی و 2 تیمار و 5 تکرار انجام شد. 5

6. جنین های سوماتیکی به طور مجزا از بافت هیپوکتیل خارج شد • سپس در بستر MSحاوی 30 گرم برلیترساکارز کشت داده شدند. • نمونه ها در دو بستر MSو WMP با غلظت های 30،60،80،100 میلی گرم برلیترساکارز قرار داده شد. 6

7. بعداز آزمایش گیاهچه ها را به گلدانهای پلاستیکی جهت سازگاری منتقل کردند. • گلدانها حاوی مقادیر برابر پیت ماس و ورمیکولیت بود 7

8. نتایج و بحث • طبق نتایج تشکیل معنی دارجنین ها فقط در غلظت های 1و2 میلی گرم صورت گرفت. • تشکیل جنین سوماتیکی ،فقط هنگام کاربرد 2-4-D وTDZ مشاهده شد • حضور 2-4-D برای تشکیل جنین بسیار موثر تشخیص داده شد. • رقم بالدی،بیشترین جنین وگیاهچه را نسبت به کالیفرنیا (2/04) دارابود. 8

9. .طبق نتایج جدول،غلظت اکسین نسبت به نوع زنوتیپ مهم تر بود. • اثر متقابل ژنوتیپ و هورمون،هر دو رقم هنگامی که با 2-4-D بیشتری تیمارشدند جنین های سوماتیکی بیشتری تولید شد.(2/60 و 2/32) • غلظت موثربرای تولید بیشترین جنین سوماتیکی ( 6/90) ،2-4-D درغلظت 2 میلی گرم برلیتربود. • غلظتهای بالای TDZ تعداد جنین ها را (2/60)کاهش میدهد. 9

10. 10

11. ژنوتیپ جنین های سوماتیکی در بستر WMP بیشترین تعداد (9/30) جنین زایی را داریم • تعدادجنین سوماتیکی در محیط کشت WMP (9/20)نسبت به MS(7/22) بیشتر بود. • غلظت ساکارز یک فاکتور مهم برای پٌرراوری جنین های سوماتیکی است • ساکارزکمتر از 80 گرم برلیتربه عنوان کمبودموادغذایی، باعث کاهش جنین زایی شده است 11

12. غلظت بالای 80 گرم برلیتر هم به خاطر فضاراسمزیباعث کاهش جنین زایی میگردد. • بالاترین جنین زایی مربوط به 80 گرم برلیتر ساکارز میباشد)15/40) • پایین ترین جنین زایی هم مربوط به 100 گرم برلیتر ساکارز و 5/50 بود • طبق جدول تفاوت معنی داری درتشکیل جنین های سوماتیکی ارقام بالدی و کالیفرنیا مشاهده نشد. 12

13. 13

14. نتیجه گیری • در پایان این تحقیق یک پروتوکل جامع برای جنین زایی سوماتیکی فلفل بدست آمد. • این پروتوکل ساده،تجدید پذیر ،مستقل از نوع ژنوتیپ و متکی به تیمارهورمونی میباشد. • این روش حتی برای موتانجنسیس و ترانسفورماسیون ژنتیکی هم کاربردی است. 14

15. چکیده • یک پروتوکل جامع درباره جنین زایی سوماتیکی فلفل بدست آمد. • محیط کشت MS و WMP به اضافه ی غلظت های مختلف 2-4-D و TDZ استفاده شدند • محیط WMPبا تولید 9/20 درمقایسه با MS 7/22 بیشترین جنین زایی سوماتیکی را دارا بود • MS با 30 گرم برلیتر ساکارزدر تولید جنین موثر تر بود. 15

16. پیشنهاد • پیشنهاد میشود برای تکثیر فلفل،از این روش با توجه به پروتوکل بدست آمده عمل کرد. • در اصلاح فلفل حتما از روش فوق و امتحان شده استفاده کرد • برای اصلاح مقاصد ازدیاد تولید و مقاومت در برابر بیماریها مدنظرقرار بگیرد. 16

17. منابع 17

18. با سپاس و تشکر ویژه از شما 18