1 / 23

Séquençage des protéines

Séquençage des protéines. plan. Introduction Définition intérêt Détermination de la séquence en acides aminés Préparation de la protéine pour le séquençage : Séquençage des chaines polypeptidiques: Reconstitution de la séquence complète. Introduction :. Rôles des protéines.

emery
Download Presentation

Séquençage des protéines

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Séquençage des protéines

  2. plan • Introduction • Définition • intérêt • Détermination de la séquence en acides aminés • Préparation de la protéine pour le séquençage: • Séquençage des chaines polypeptidiques: • Reconstitution de la séquence complète

  3. Introduction: Rôles des protéines structure La chaine polypeptidique Acides aminés séquençage

  4. Définition:

  5. Intérêt du séquençage:

  6. Détermination de la séquence en acides aminés :

  7. Préparation de la protéine pour le séquençage: • Déterminer le nombre de chaines polypeptidiques: analyse des groupements terminaux

  8. Identification des résidus Nterminaux: • Méthode de Sanger(FDNB)

  9. Méthode des dansylaminoacides:

  10. Méthode d’Edman:

  11. Méthodes enzymatiques: exopeptidase ; aminopeptidase : hydrolysent séquentiellement les acides aminés depuis l’extrémité N-terminale d’un polypeptide

  12. Identification des résidus C terminaux: • Hydrazinolyse: un polypeptide est traité par l’hydrazine anhydre à90°C pendant 20 à 100 heures toutes les liaisons peptidiques sont rompues et tous les résidus sont transformés en hydrazides sauf le résidus C-terminale que l’on retrouve sous forme d’acide aminé libre facile à isoler et à identifier par chromatographie

  13. Méthode enzymatiques : carboxypeptidase

  14. Coupures des ponts disulfures: Réduction par le 2-mercaptoethanol:

  15. Séparation purification des chaines polypeptidiques Milieu acide ou basique, C saline élevée, T° élevée Urée Ion Guanidinium SDS chromatographie

  16. Détermination de la composition en acides aminés:

  17. séquençage des chaines polypeptidiques: • Réaction d’hydrolyse spécifique: • Séparation purification des fragments: • Détermination de la séquence en AA des fragments:

  18. Bromure de cyanogène: après Met • Réaction d’hydrolyse spécifique: N-Bromosuccinimide HOBr:après Tyr Try HydroxylamineNH2OH: hydrolyse les liaisons Asn-Gly

  19. Séparation purification des fragments: HPLC Phase inverse Dénaturant : Urée , SDS Support de CHromato

  20. Détermination de la séquence en AA des fragments:

  21. Reconstitution de la séquence complète: Mise en ordre des fragments

  22. LABORATOIRE DE BIOCHIMIE CHU CNE • Dr. BENDJAZIA • MA. ALLOUI. AS FEV 2012

More Related