lip z enzimaktivt s m r se
Download
Skip this Video
Download Presentation
Lipáz enzimaktivtás mérése

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 11

Lipáz enzimaktivtás mérése - PowerPoint PPT Presentation


  • 94 Views
  • Uploaded on

Lipáz enzimaktivtás mérése. Lipidek. Vegyületek heterogén csoportja Vízoldhatatlan Organizmusokban általában fehérjékkel (lipoproteinek), szénhidrátokkal (liposzaharidok) képzett vegyületei fordulnak elő A lipidek nagy része triglicerid formájában kerül a talajba

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' Lipáz enzimaktivtás mérése' - ellema


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
lipidek
Lipidek
  • Vegyületek heterogén csoportja
  • Vízoldhatatlan
  • Organizmusokban általában fehérjékkel (lipoproteinek), szénhidrátokkal (liposzaharidok) képzett vegyületei fordulnak elő
  • A lipidek nagy része triglicerid formájában kerül a talajba
  • A lebontás első lépését a lipáz (triglicerid-acilhidroláz) enzim végzi
  • A reakció során zsírsavak és glicerin szabadul fel
zs rsavak
Zsírsavak
  • Hosszú szénláncú karbonsavak
  • Lehetnek telített-, telítetlen-, keto-, hidroxi-, epoxi-, elágazó szénláncú, vagy gyűrűs, savak.
  • A leggyakoribbak a telítetlen zsírsavak cisz izomerjei
zs rsavak bont sa
Zsírsavak bontása
  • Aerob környezetben
    • β-oxidáció: 2 szénatomos darabok lehasadásával bomlanak, melynek végterméke CO2 és víz
    • Ritkább esetben α-, vagy σ-oxidáció megy végbe. Ez esetben az oxidáció nem teljes
  • Anaerob környezetben a zsírsavak feldúsulnak a környezetben
az elj r s alapelve
Az eljárás alapelve
  • A talajt 4-metil-umbelliferon-heptanoáttal (4- MUH) inkubáljuk 10 percen át 30°C-on.
  • A talaj lipáz aktivitására a felszabaduló, fluoreszcens 4-metil-umbelliferon (4-MU) mennyiségéből következtethetünk.
  • Szükséges anyagok és felszerelések:
    • Fluoriméter
    • Rázó vízfürdő
    • Centrifuga, centrifuga csövek (10 ml)
    • Erlenmeyer lombikok (25 ml)
sz ks ges vegy letek oldatok
Szükséges vegyületek, oldatok
  • Etilén-glikol-monometil-éter
  • 4-MUH (10mM)
    • Oldjunk fel 58 mg 4-MUH-t 10 ml etilén-glikol-monometil-éterben, majd töltsük fel ugyanezzel az oldószerrel 20 ml-re (tárolás -20°C-on). Az oldatot naponta készítsük el!
  • TRIS (2-amino-2-hidroximetil-propán-1,3-diol) puffer (0,1 M, pH 7,5)
    • 12,11 g TRIS-t oldjunk fel 700 ml desztillált vízben, 0,1M sósavval állítsuk a pH-t 7,5-re, majd töltsük fel 1000 ml-ig desztillált vízzel
  • 4-MU standard oldat
    • 176 mg MU-t feloldunk 70 ml etilén-glikol-monometil-éterben, , majd feltöltjük ugyanezzel az oldószerrel 100 ml-re. Az oldat 4 °C-on több napig eláll.
az elj r s
Az eljárás
  • Helyezzünk 0,1 g nedves talajmintát 25 ml-es Erlenmeyer lombikba, adjunk hozzá 4,5 ml TRIS puffert, zárjuk le és inkubáljuk 30°C-on rázó vízfürdőben 10 percig
  • Adjunk hozzá 0,5 ml 4-MUH szubsztrátot, rázzuk jól össze, zárjuk le és ismét inkubáljuk 30°C-on rázó vízfürdőben 10 percig
  • Ezután jeges vízbe helyezve a lombikot, hűtsük le a mintákat
  • Kontroll minta készítéséhez adjuk a szubsztrátodatota talaj szuszpenzióhoz amint a lombikot hűteni kezdjük
  • Ezután 2°C-on 4000 g-n centrifugáljuk a mintákat
  • Spektrofluorimetriával vizsgáljuk a felülúszóban a felszabadult 4-MU mennyiségét (gerjesztési hullámhossz: 340 nm, emissziós hullámhossz: 450 nm)
kalibr ci s g rbe
Kalibrációs görbe
  • Hígítsuk a desztillált vízzel a 4-MU standard oldatot (1:100)
  • Helyezzünk 0,1 g talajmintát Erlenmeyer lombikba és adjunk hozzá 4,5 ml TRIS puffert, illetve 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 és 0,5 ml 4-MU standard oldatot
  • Adjunk 0,5; 0,4; 0,3; 0,2; 0,1 és 0 ml desztillált vizet az oldatokhoz, hogy kiegészítsük 5 ml-re
  • Folytassuk „Az eljárás” dián leírtak szerint
  • A standardekkoncenjtrációja 0, 10, 20, 30, 40, 50 nM
  • A kalibrációs görbét minden talajmintához külön kell elkészíteni
sz m t s
Számítás
  • Korrigáljuk az eredményeket a kontroll minta alapján
  • Számítsuk az enzimiaktivtást a a következő képlet alapján:Ahol U az enzimaktivitás (nM×g-1×dwt-1×10 min-1), MU a mért 4-MU koncentráció nmol/l-ben, dwt a 1 g talajminta száraz tömege, 0,1 a felhasznált talajminta száraz tömege.
forr s
Forrás
  • Alef, K.; Nanniperi, P.: Methods in Applied Soli Microbiology and Biochemistry, 1995
ad