Rol de la citometria de flujo
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ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO. LEUCEMIAS AGUDAS LABORATORIO CENTRAL DE REDES Y PROGRAMAS DE CORRIENTES Bioq. Emiliano Sotelo RodrÍguez. Herramientas para el diagnóstico de las Leucemias Agudas. Morfología Citoquímica Citometria de flujo Biología Molecular Citogenética.

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ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

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Rol de la citometria de flujo

ROL DE LA CITOMETRIA DE FLUJO

LEUCEMIAS AGUDAS

LABORATORIO CENTRAL DE REDES Y PROGRAMAS DE CORRIENTES

Bioq. Emiliano Sotelo RodrÍguez


Herramientas para el diagn stico de las leucemias agudas

Herramientas para el diagnóstico de las Leucemias Agudas

  • Morfología

  • Citoquímica

  • Citometria de flujo

  • Biología Molecular

  • Citogenética


Rol de la citometria de flujo

Introducción a la Citometría de Flujo

  • Tecnicaquepermitemedir y analizarcaracterísticasfísicas de laspartículas

  • Anticuerposmonoclonalesconjugados con fluorocromospermitendeterminarmarcadoresfenotípicos

  • Identificación de poblacionescelulares


Facsdiva bd

FACSDiva (BD)


Rol de la citometria de flujo

Citómetro de Flujo

SSC (granularidad)

Señales detectadas

por detectores

convertidas en

señal electrónica

FL1

Láser

FSC (tamaño)

FL2

Procesadas por un

software

FL3

FL4


Rol de la citometria de flujo

MORFOLOGIA Y CITOMETRIA


Tipos de muestra

Tipos de muestra

  • MEDULA OSEA (1 a 3ml EDTA O HEPARINA, a temp amb).

  • SANGRE PERIFERICA(EDTA O HEPARINA, A TEMP AMB).

  • BIOPSIAS DE GANGLIOS( 0,5 a 1 g en solucion fisiologica esteril, 4 C hasta llegar al laboratorio)


Tejidos y material de paaf

Tejidos y material de PAAF

  • LCR (Punción lumbar)

  • Testículo (PAAF-Biopsia)

  • Ganglio

  • Líquido pleural, peritoneal, pericardio

  • Orina


Rol de la citometria de flujo

Técnica estándar de marcación de Ags. de superficie

con anticuerpos monoclonales

Incubación 15´

T°amb

oscuridad

Lavados

Resuspender

Lisante

CD19

CD10

CD20

CD13

HLA Dr

CD34

Muestra

Anticuerpos Monoclonales

Adquisición


Rol de la citometria de flujo

Diseño del panel de anticuerpos

  • amplio, identificar células normales y patológicas.

  • porcentaje, línea, estadío, patrones fenotípicos, patrones aberrantes.

  • exclusión células muertas.


Rol de la citometria de flujo

Alteraciones fenotipicas en leucemias agudas

- Alteraciones del patrón de luz (FSC vs SSC, SSC vs CD45)

- Asincronismos (ej. CD34+, CD20+)

- Fenotipos aberrantes de línea (ej. CD19+CD15+)

- Sobreexpresión antigénica

- Ausencia de antígenos


Rol de la citometria de flujo

Inmunofenotipificación

Pautas para diagnosticar Leucemia Aguda

- Definir linaje celular de los blastos

- linfoide (B,T)

- mieloide

- mixto

- Establecer estadío de maduración


Sistema de puntuaci n del egil

Linaje T

Linaje mieloide

Puntos

Linaje B

cCD79a

cCD3

aMPO

2

cIgM

TCR

2

cCD22

TCR

2

CD19

CD2

CD13

1

CD20

CD5

CD33

1

CD10

CD8

CD117

1

Tdt

Tdt

CD14

0.5

CD7

CD15

0.5

CD1a

CD64

0.5

Sistema de puntuación del EGIL

Para asignar un linaje determinado a los blastos, el score debe ser >2

Una LA se define como bifenotípica si el puntaje resulta >2 para más de un linaje


Pautas para asignaci n de linaje who 08

Pautas para asignación de linaje WHO’08

  • Linaje B:CD19 int+ [al menos 1 (+)]: cCD79a, cCD22, CD10 intCD19 tenue+ [al menos 2 (+)]: cCD79a, cCD22, CD10 int

  • Linaje T: cCD3 o sCD3

  • Linaje Mieloide:MPO

    Dif. Monocítica : al menos 2 marcadores (+): CD11c, CD14, CD36,CD64, etc.


Rol de la citometria de flujo

LLA de precursor B:

cCD22+, cCD79a+, CD19+, HLA-DR+

Pro B: CD10 -

Común: CD10+, cad  -

Pre B: CD10+/-, cad  +, Ig Sup -

B madura: CD10+/-, Ig Sup+ (  ó )


Rol de la citometria de flujo

LLA de linaje T

cCD3+, CD7+, TCR+/-, HLA-DR-

Pro T: CD2 -, CD5 - , CD8 -

Pre T: CD2+,y/o CD5+ y/o CD8+

Intermedia: CD1a+,CD4+/CD8+,CD3 sup+/-

T madura: CD1a-, CD3+ sup , TCR /


Leucemias mieloides agudas

Leucemias Mieloides Agudas


Leucemias mieloides agudas1

Leucemias Mieloides Agudas


Leucemias mieloides agudas2

Leucemias Mieloides Agudas


Leucemias mieloides agudas3

Leucemias Mieloides Agudas


Leucemia mieloide aguda panel de marcaci n

Leucemia Mieloide Aguda Panel de Marcación

Marcadores mieloides: aMPO, CD13, CD33, CD117,

CD15

Predominantemente Monocíticos: CD14, CD64

Megacariocíticos: CD41, CD42a, CD61

Otros: HLA DR, Tdt, CD34


Caso clinico 1

CASO CLINICO 1

  • Paciente de 7 años.

  • Antecedentes: decaimiento, astenia de 2 meses de evolución, bicitopenia.

  • Adenopatias cervicales bilaterales, palidez mucocutanea

  • Laboratorio: Hto: 28%, Gblancos: 25000, Plaquetas: 57000,

  • PAMO: 97% blastos.


Rol de la citometria de flujo

FENOTIPO COMPATIBLE CON LLA-B PREB


Caso clinico 2

CASO CLINICO 2

  • Paciente de 25 años.

  • Consulta por disnea y dolor toraxico.

  • Rx: ensanchamiento mediastinal y derrame pleural.

  • TAC de torax, abdomen y pelvis: gran masa mediastinal

  • Laboratorio: GB:16000/mm3, LDH:1500.

  • PAMO: 90 % blastos atipicos


Rol de la citometria de flujo

FENOTIPO COMPATIBLE CON LLA-T cortical


Caso clinico 3

CASO CLINICO 3

  • Hombre de 55 años. Ingresa con cuadro anemico. No tiene antecedente de hemorragia, fiebre ni enferm infetologica. Es derivado a Hosp. de cabecera.

  • Examen fisico: palidez, sin organomegalia ni adenopatias.

  • SP: Hto 15%, Hb: 4.8. Plaq: 10000. Morfologia 56 % de blastos.

  • Se realiza PAMO : 90% blastos atipicos.


Rol de la citometria de flujo

FENOTIPO COMPATIBLE CON LMA CON MADURACION MONOCITICA


Rol de la citometria de flujo

GRACIAS POR SU ATENCION

Servicio de Citometrìa de flujo-OncoHematologìa.

Laboratorio Central de Redes y Programas de Corrientes.


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