离子和药物对离体蟾蜍心脏活动的影响 Effects of Several D rugs and Extracellular Ions on Isolated Toad Heart 陆源

1. 离子和药物对离体蟾蜍心脏活动的影响 Effects of Several Drugs and Extracellular Ions on Isolated Toad Heart 陆源 （luyuan@zju.edu.cn) 浙江大学医学院

2. 实验目的(Objectives)： • 了解离体心脏灌流的方法 • 观察钾、钙离子浓度、肾上腺素、乙酰胆碱对离体蟾蜍心脏活动的影响，探讨钾、钙离子浓度、肾上腺素、乙酰胆碱对离体蟾蜍心脏作用的机制。

3. 离体心脏灌流法 Straub法 八木氏法   Langendorff法

4. Langendorff

5. 1. 材料 (Materials) 雄蟾 婚垫 雄蟾 雌蟾 1.1实验动物（laboratory animal) 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 雄性蟾蜍皮肤光滑，前肢趾上有黑色婚垫，会鸣叫。雌性蟾蜍皮肤粗糙，无婚垫，不会鸣叫。

6. 1. 材料 (Materials) 1.1 实验动物 中华蟾蜍（Zhuoshan Toad） 1.2 药品与试剂 肾上腺素（ adrenaline hydrochloride）,乙酰胆碱（ acetylcholine chloride ），普萘洛尔（propranolol hydrochloride ）,阿托品（atropine sulfate ），氯化钾，氯化钙，任氏液（Ringer’s solution）。

7. 1. 材料 (Materials) RM6240多道生理信号采集处理系统 张力换能器 1.1 实验动物 中华蟾蜍（Zhuoshan Toad） 1.2 药品与试剂肾上腺素（ adrenaline hydrochloride）,乙酰胆碱（ acetylcholine chloride ），普萘洛尔（propranolol hydrochloride ）,阿托品（atropine sulfate ），氯化钾，氯化钙，任氏液（Ringer’s solution）。 1.3 仪器和装置 RM6240多道生理信号采集处理系统(成都仪器厂），JZJ01张力换能器(成都仪器厂）。

8. 2. 方法(Methods) 2.1 仪器连接和参数 张力换能器接RM6240多道生理信号采集处理系统第1通道, RM6240多道生理信号采集处理系统采样频率：400Hz，时间常数：直流，滤波：30Hz，灵敏度：1g。

9. 2.2 离体蟾蜍心脏标本制备 蟾蜍毁脑脊髓，蟾蜍仰卧于蛙板，打开蟾蜍胸腔，暴露心脏，结扎下腔静脉，靠头端结扎右主动脉，在左、右主动脉下穿线，在右主动脉根部剪一斜口，将插管插入动脉圆锥， 在心室收缩时将插管插入心室，结扎固定，游离心脏。

10. 2.3 心脏与换能器连接 将蛙心插管固定在夹具上，蛙心夹连线通过滑轮连至张力换能器。蛙心夹在心室舒张期夹住心尖，调节微调使心脏舒张期至1g。

11. 2.4 向插管中加入1ml任氏液，心搏曲线稳定后记录正常的心搏曲线45s。 2.5 无钙任氏液1ml替换插管内的任氏液，心搏曲线稳定后记录45s。 2.6 用任氏液洗脱3次，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，向灌流液中加 0.045M CaCl2溶液25l，心搏曲线稳定后记录45s 。 2.7 用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，在任氏液中加 0.2M KCl溶液25l，心搏曲线稳定后记录45s 。 2.8 用任氏液洗脱数次，曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，在任氏液中加6×10-5 M 的 adrenaline（Adr）溶液10l，心搏曲线稳定后记录45s 。

12. 2.9 用任氏液洗脱数次，收缩曲线基本恢复后，加入1ml任氏液，待曲线稳定45s后，在任氏液中加5×10-4 M propranolol（Pro）溶液10l，心搏曲线稳定后记录45s ，再加入6×10-5 M 的 Adr溶液10l，心搏曲线稳定后记录45s 。 2.10 用新鲜任氏液换洗数次，加入1ml任氏液，待曲线稳定后记录45s ，在任氏液中加6×10-6 M 的 acetylcholine（ACh）溶液15l，心搏曲线稳定后记录45s 。 2.11 用新鲜任氏液换洗数次，加入1ml任氏液，待曲线稳定后记录45s ，加2×10 –4 M atropine（Atr）15 l，心搏曲线稳定后记录45s 。再在任氏液中加6×10-6 M 的 acetylcholine（ACh）溶液15l，心搏曲线稳定后记录45s 。

13. 2.11 数据测量 测量各项处理前后的心率（heart rate，HR)、心脏舒张末张力（end diastolic tension，EDT) 、心脏收缩末期张力(end systolic tension，EST)。 2.12 统计方法 结果以x  s 表示，统计采用Student t test方法。

14. EST EDT