Az jabb m rt s sz rmaztatott hematol giai param terek klinikai rt ke
Download
1 / 66

Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke - PowerPoint PPT Presentation


  • 156 Views
  • Uploaded on

Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke. Bekő Gabriella SE, Laboratóriumi Medicina Intézet. 2013.május 30. A hematológiai paraméterek intra-individuális biológiai variabilitása. www. Westgard.com. Az elvárt analitikai variabilitás. www. Westgard.com.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke' - diza


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
Az jabb m rt s sz rmaztatott hematol giai param terek klinikai rt ke

Az újabb mért és származtatott hematológiai paraméterek klinikai értéke

Bekő Gabriella

SE, Laboratóriumi Medicina Intézet

2013.május 30.


A hematológiai paraméterek klinikai értéke

paraméterek

intra-individuális

biológiai

variabilitása

www. Westgard.com


Az elvárt analitikai paraméterek klinikai értéke

variabilitás

www. Westgard.com


Optikai, fényszórás (vagy szórt lézer) elvű mérés Advia

Hidrodinamikailag fókuszált sejtáramlás, megvilágító lézer fény és detektor

Kis szög (2-4o) alatti fényszórás a sejt mérettel, a nagyobb szög alatti (10-15o) fényszórás

a sejt tartalommal (pl. hemoglobin koncentráció, vagy sejtmag sûrûség) arányos

A kis és a nagy szög alatt szórt fény intenzitásának komplex matematikai összefüggését

a Mie teória írja le


Optikai, fényszórás (vagy szórt lézer) elvű mérés 7 lézer detektorral

Beckman Coulter

DXH-800

- Volume (térfogat)

- Conductivity (vezetőképesség)

- Axial light loss (AL2)

- Low angle light scatter (LALS)

- Median angle light scatter (MALS)

- Lower median angle light scatter (LMALS)

- Upper median angle light scatter (UMALS)

fényáteresztő képesség (transparency)

sejt komplexitás

sejt granularitás, sejtmembrán felszíne


Fluoreszcens raml sos cytometria sysmex
Fluoreszcens áramlásos cytometria Sysmex lézer detektorral

MAPPS

(Multi Angle Polarized Scatter Separation)

A fényszóródás mérésetöbb szögből


CellDyn Saphire lézer detektorral

sejt méret

sejt komplexitás

sejt lebenyezettség

sejt granuláltság

MAPPS


Fluoreszcens fest s
Fluoreszcens festés lézer detektorral

A sejtek emelkedett nukleinsav (DNS vagy RNS) tartalmával arányos a fluoreszcens jel nagysága


Felhődiagram fluorescens festéssel Sysmex lézer detektorralXN-2000 automatán

Sysmex XE-2100


IG (Immature Granulocytes) lézer detektorral

Promyelocyta

Promyelocyta

IG

Myelocyta

Myelocyta

Metamyelocyta

Metamyelocyta


Felhődiagram peroxidáz festéssel (ADVIA 120) lézer detektorral

1 Zaj

2 Magvas vörösvérsejt3 Összetapadt thrombocyták

4 Lymfocyták és basophylek5 Large Unstained Cells (LUC)6 Monocyták

7 Neutropylek

8 Eosinophylek

Morfológiai flag-ek:

ATYP(Atípusos lymphocyták)

IG (Éretlen granulocyták)

MPO index(Myeloperoxidase hiány)

NRBC(Magvas vörösvérsejtek)

PLT-CLM(Összetapadt thrombocyták)


Ig immature granulocytes

Emelkedhet lézer detektorral:

Bakteriális infekció

Akut gyulladás

Tumor (csontvelő metastasis)

Szövet nekrózis

Akut transzplantátum rejekció

Sebészeti, ortopédiai trauma

Myeloproliferatív neoplasia

Steroid

Terhesség (harmadik trimeszter)

Nagyobb jelentőségű az emelkedés (IGs>2%):

idősek, újszülöttek, koraszülöttek akut infekció

myeloszupresszált betegek akut infekció

neutropeniával járó szepsis

IG (Immature Granulocytes)


Felnőtt referenciatartomány lézer detektorral(n=58)

Bernard Fernandes, Yukio Hamaguchi:Automated Enumeration of Immature Granulocytes Hematopathology 2007


Éretlen granulocyták (IG%) optimalizált cutoff értéke infekció esetén

Balamurugan Senthilnayagam at all.:Automated Measurement of Immature Granulocytes: Performance Characteristics and Utility in Routine Clinical Practice - Pathology Research International 2012


Infekcióban szenvedő betegek fehérvérsejt és IG értékei

szignifikánsan magasabbak pozitív hemokultúra esetén

v

Balamurugan Senthilnayagam at all.:Automated Measurement of Immature Granulocytes: Performance Characteristics and Utility in Routine Clinical Practice - Pathology Research International 2012


IG % alakulása különböző betegcsoportokban (Sysmex XN1000)

Ig%

N=45

N=80

N=48

NS

Egészséges kontrol

Akut coronaria szindróma

Szepszis gyanú


Az éretlen neutrofil granulocyták abszolút számának (#IG) alakulása különböző betegcsoportokban

N=45

N=80

N=48

NS

Egészséges kontrol

Szepszis gyanú

Akut coronaria szindróma


IG% (#IG) alakulása különböző betegcsoportokban

IG=24,4%

IG=4,7%

IG=2,8%

D. P.né 81 éves, vastagbél rezekciót követően egy hónappal subileusos tünetek jelentkeznek, beteg belázasodik

Immature Granulocytes


A blast flag klinikai rt ke 4 k l nb z hematol gia automat n m rve n 430
A (#IG) alakulása különböző betegcsoportokbanblast flag klinikai értéke 4 különböző hematológia automatán mérve (n = 430)

S.-H. KANG at al: Comparison of four hematology analyzers, CELL-DYNSapphire, ADVIA 120, Coulter LH 750, and SysmexXE-2100, in terms of clinical usefulness

INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY HEMATOLOGY 2008


Felhődiagram a bazofil csatornán (ADVIA) (#IG) alakulása különböző betegcsoportokban

1. Zaj

2. Blasztok sejtmagja

3. Monociták és limfociták sejtmagja

4. Bazofil sejtek

5. Bazofil gyanús sejtek

6. Szaturáció

7. Neutrofil és eosinofil sejtmagok

Morfológiai flag-ek:

BLASTS(Blasztok)

LS(Nem szegmentált granulocyták)


Blasztok és abnormál lymphocyták (#IG) alakulása különböző betegcsoportokban

elkülönítése a WPC csatornán

(SYSMEX XN-1000)


45 leukémiás beteg „blaszt” értékeinek összehasonlítása

Khí-négyzet próbával

BLASTM → blaszt pozitivitás mikroszkóppal

BLASTA → blaszt pozitivitás Advia2120

BLASTXN → blaszt pozitivitás Sysmex XN

BLASTZ → blaszt pozitivitás Celldyn Saphire

Kappa: 0,4-0,8 között→ jó megfelelőség

Kappa: 0,8 fölött → kiváló megfelelőség


Az „ összehasonlításaatyp flag „klinikai értéke 4 különböző hematológia automatán mérve (n = 430)

S.-H. KANG at al: Comparison of four hematology analyzers, CELL-DYNSapphire, ADVIA 120, Coulter LH 750, and SysmexXE-2100, in terms of clinical usefulness

INTERNATIONAL JOURNAL OF LABORATORY HEMATOLOGY 2008


45 leukémiás beteg „Atyp” értékeinek összehasonlítása

(Advia, Sysmex XN, CellDyn Saphire)

Khí-négyzet próbával

Kappa: 0,4-0,8 között→ jó megfelelőség

Kappa: 0,8 fölött → kiváló megfelelőség

ATYP A → ATIP Ly pozitivitás Advia2120

ATYP XN → ATIP Ly pozitivitás Sysmex XN

ATYP Z → ATIP Ly pozitivitás Celldyn Saphire




UniCel DxH 800 Coulter összehasonlítása

  • NRBC mérés:

  • Vérminta hígítás

  • Nem magvas vvtlizálás

  • Elkülönítve marad:

  • - fehérvérsejt

  • + magvas vvs

  • - thrombocyta

  • - sejttörmelék

  • Minta a flowcell-be kerül

  • Lézer analízis

  • - sejtméret

  • - sejt karakterisztika

  • - sejtmag differenciálás

  • AL2 fénynyalábbal

  • interferencia kiszűrése


Magvas vörösvérsejtek a összehasonlítása

Sysmex XN-1000 WNR csatornáján


NRBC mérés CellDyn-Sapphire automatán összehasonlítása

Az FL3 (speciális DNS festékanyag) 630 nm középhullámhosszú vörös fluoreszcencia -NRBC-k azonosítására alkalmas



A magvas v r sv rsejtek megjelen se a perif ri n
A magvas vörösvérsejtek megjelenése a periférián összehasonlítása

  • Újszülött korban:

    - újszülöttkori hemolitikus betegség

    - koraszülöttek és újszülöttek hypoxiás károsodása

  • Felnőttkorban:

    - thalassemia

    - myeloproliferatív neoplasia ( myelofibrosis)

    - szolid tumor csontvelői metasztázissal

    - extramedulláris hematopoiesis

    - hematopoietikus stressz ( szeptikémia, masszív hemorrhagia, súlyos hypoxia)

Clin Chem Lab Med 2012;50(2):357–360


Nrbc el fordul sa hematol giai betegs gekben
NRBC előfordulása hematológiai betegségekben összehasonlítása

Clin Chem Lab Med 2012;50(2):357–360


Aj nlott klinikai alkalmaz s
Ajánlott klinikai alkalmazás összehasonlítása

  • hematológiai betegségek diagnózisa

  • súlyos kardio-thorakális műtéten átesett, egyéb sebészet intenzív ellátást igénylő nem hematológiai betegségben prognosztikai faktor

    - csontvelő transzplantáció után ( >0,2x 109/L fölött magas mortalitási ráta)

    - thalasszémia szindromában transzfúziós terápia hatékonyságának monitorozása


Reticulocyta cytogram reticulocyta r s advia

High Angle (5-15 degrees) összehasonlítása

Oxazine 750 Absorbance

Reticulocyta cytogram - reticulocyta érés Advia


Reticulocyta mérés Beckman Coulter UniCel DxH 800 automatán

Metilénkék festést használva




Reticulocyta m r s celldyn saphire automat n
Reticulocyta mérés CellDyn- Saphire automatán automatán

  • A készülék a FL1 RNA és7o Light scatter-t használja

  • A ”retic-box” - ot egy hisztogramba transzformálja

  • Egy dinamikus küszöb felállításával választja el az RBC és a RETC populációt.

  • Második lépésben, újabb küszöb felállításával választja el az érett és az éretlen reticulocytákat (IRF)

WBC


P < 0,001 automatán

P < 0,001

P < 0,001

NS

Advia 2120, Beckman DXH 800. Sysmex XN-1000, CellDYN Saphire

Reticulocyta % összehasonlítása 110 hemodializált beteg esetén


Advia 2120, Beckman DXH 800, Sysmex XN-1000, automatán

CellDyn- Saphire Reticulocyta % összehasonlítása

NS

Advia

DxH800

Sapphire

Sysmex


Sz rmaztatott reticulocyta param terek
Származtatott reticulocyta paraméterek automatán

  • MCVr(vagy MRV)a reticulocyta populáció átlagos sejtmérete

  • CHrvagy RetHe a reticulocyta populációban egy sejt átlagos hemoglobin tartalma

  • CHCMr a reticulocyta populáció átlagos hemoglobin tartalma

  • M-RTC% a közepes abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban

  • M-RTC# a közepes abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya abszolút értékben

  • H-RTC% a nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban

  • H-RTC# a nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya abszolút értékben

  • IRF-M+Ha közepes és nagy abszorbanciájú éretlen reticulocyták aránya %-ban


CHr vagy Ret-He klinikai jelentősége automatán

A reticulocyta hemoglobin content (CHr vagy Ret-He) → jelzi a vörösvérsejtek termelődéséhez, a megelőző 3- 4 napban funkcionálisan rendelkezésre álló vaskészletet

Klinikai jelentősége:

Vashiányos anémia diagnózisa felnőttekben(Mast et al., Blood 2002;99:1489–1491) és gyermekekben(Brugnara et al., JAMA 1999;281:2225–2230; Ullrich et al., JAMA 2005;294:924–930; Bakr and Sarette, Eur J Pediatr 2006;165:442–445).

Intravénás és orális vasterápia hatékonyságát már 2-3 nap múlva jelzi (Brugnara et al., Blood 1994;83:3100–3101).

Korai indikátor az erithropoein terápia monitorozásakor(Fishbane et al., Kidney Int 1997;52:217–222; Fishbane et al., Kidney Int 2001;60:2406–2411; Mittman et al., Am J Kidney Dis 1997;30:912–922; Tsuchiya et al., Clin Nephrol 2003;59:115–123; Chuang et al., Nephrol Dial Transplant 2003;18:370–377).

Vashiányos anémia elkülönítése más anémiáktól Reticulocyte hemoglobin content is a recent addition to an expanding list of biomarkers that can be used to differentiate iron deficiency from other causes of anemia. Am. J. Hematol., 2008.


R= 0.93 automatán


R=0,42 automatán

RSf→Red blood cell size factor


Irf immature reticulocyte fraction haszn lata
IRF(Immature reticulocyte fraction) használata automatán

  • Anémiák differenciálása

  • Táplálkozással kapcsolatos anémiák terápiájának monitorozása

  • Csontvelő regeneráció korai monitorozás (csontvelő transzplantáció vagy kemoterápia után)

  • Aplasztikus anémia verifikálása

  • Csontvelő sejtek gyűjtésének időzítése


R=0.77 automatán


R=0.85 automatán


R= 0,42 automatán



Fragmentált vörösvérsejtek automatán Sysmex XE 2000 automatán

Klinikai alkalmazás:

Microangiopathiák diagnózisa és

Monitorozása

a, DIC

b, thrombotic thrombocytopenic purpura (TTP)

c, hemolytic-uremic syndrome (HUS)

Thrombotic microangiopathic anemia (TMA)

Csontvelőtranszplantáció utáni monitorozás

HELLP syndrome

Vvt-k fizikai ártalma kóros felszínen (műbillentyű, artériás graft)


Thrombocyta cytogram advia 120

2 automatán

5

3

1

4

Thrombocyta cytogram (Advia 120)

1 Thrombocyták

2 Nagy thrombocyák

3 Vörösvérsejtek

4 Vvs fragmentumok

5 Üres vvs-ek

Térfogat

Refraktív index

(Thr törésmutató)


Fragmentált vörösvérsejtek (schistocyták) mérésének összehasonlítása Advia 120 automatán és manuális módszerrel

Lesesve JF, Salignac S, Alla F, et al. Comparative evaluation of schistocyte counting by an automated methodand by microscopic determination. Am J Clin Pathol.2007;121:739-745.


On the basis of the published scientific studies and personal experience of the Group members and expert reviewers, the ICSH Schistocyte Working Group recognizes the utility of the automated FRC count as a screening method in the routine laboratory. All samples with a positive automated FRC count at diagnosis as well as macrocytic samples with a negative automated FRC count need to be confirmed by microscopy. One major advantage of the automated FRC count is the possibility of easily obtaining an accurate and precise follow-up of true-positive samples.

G. ZINI1, G. d’ONOFRIO2, C. BRIGGS3, W. ERBER4, J. M. JOU5, S. H. LEE6, S.McFADDEN7, J. L. VIVES-CORRONS5, N. YUTAKA8, J. F. LESESVE

ICSH recommendations for identification, diagnostic value, and quantitation of schistocytes

International Journal of Laboratory Hematology

Volume 34, Issue 2, pages 107–116, April 2012

ICSH =International council for standardization in haematology


Thrombocyt k flow cytometri s anal zise

High angle detector personal experience of the Group members and expert reviewers, the

(5o - 15o)

High angle detector

(5o - 15o)

670nm

Laser

Diode

670nm

Laser

Diode

Low angle detector

(2o-3o)

Low angle detector

(2o-3o)

Thrombocyták Flow-cytometriás analízise

Előny: specificitás↑ és szenzitivitás↑


Thrombocytopenia impedanci val m rve
Thrombocytopenia personal experience of the Group members and expert reviewers, the Impedanciával mérve


Thrombocytopenia optikai m r s a reticulocyta csatorn n
Thrombocytopenia personal experience of the Group members and expert reviewers, the Optikai mérés a reticulocyta csatornán


Ri s thrombocyt k jelenl te
Óriás thrombocyták jelenléte personal experience of the Group members and expert reviewers, the


Thrombocyta mérés personal experience of the Group members and expert reviewers, the Fluorocell fluoreszcens festéssel Sysmex XN2000 automatával

r=0.956

r=0.988

Reproducibility

At a level of 20x109/LPLTs, reproducibility for PLT-I, PLT-O and PLT-F on the XN2000 demonstrated coefficients of variation of 9.3%, 8.5% and 3.0% respectively.

Haematology & Immunology 2012

M. Schoorl


Thrombocyt kr l kapott inform ci k
Thrombocytákról kapott információk personal experience of the Group members and expert reviewers, the

  • PLTThrombocyta szám

  • (PLT Count x RBC Cal Factor x PLT Cal Factor)

  • MPV Átlagos thrombocyta térfogat

  • PDW Thrombocyta eloszlási görbe szélesség

  • Large LPLTnagy thrombocyta térfogat (nagyobb mint 20 fl)

  • IPF% (Immature platelet Fraction) reticulált thrombocyták


Mpv m

MPV signifikánsan nagyobb akut koronária betegségben personal experience of the Group members and expert reviewers, the

MPV M

J Clin Pathol. 2009

A: Acute coronary events C: Controls


Átlagos thrombocyta térfogat (MPV) alakulása különböző betegcsoportokban

P<0,001

MPV fl

P<0,01

P<0,01

N=40

N=110

N=80

N=46

Szepszis gyanú

ACS

Kontrol

Hemodializált


IPF különböző betegcsoportokban

IPF% (Immature Platelet Fraction) retikulált thrombocyták

Sysmex XN 2000

Sysmex XE-5000


Éretlen thrombocyta frakció (IPF)alakulása különböző betegcsoportokban

IPF %

P<0,001

P<0,001

P<0,001

N=46

N=40

N=110

N=80

Kontrol

Hemodializált

ACS

Szepszis gyanú


Retikulált thrombocyta betegcsoportokban

  • Fiatal, mRNS tartalmú thrombocyta

  • Élettartam: 1 nap

  • Referencia tartomány:

  • 1.1-6.1%

  • Érett thrombocytánál nagyobb

  • Denzitása is nagyobb, mint az

  • érettebb alakoké

  • Emelkedett vagy normál IPF: ITP

  • Alacsony IPF: CsV elégtelenség

J.Lab.Med. 2008


IPF értékek különböző klinikai állapotokban: betegcsoportokban

  • Kemoterápia utáni thrombopoesis megítélése

  • IPF% korábban emelkedik, mint a thrombocyta szám

  • 2. Thrombocyta transzfúzió után: IPF% 24 órán keresztül csökken

  • ok: hígulás, TPO gátlás

  • 3. Sepsisben az IPF% emelkedett thrombocyta szám emelkedés nélkül

  • ok: IL-6→ TPO-szerű aktivitás

  • perifériás thrombocyta destrukció

  • 4. Súlyos thrombocytopéniában emelkedett IPF% esetén, a thrombocytaszám emelkedés 24-48 óra múlva várható


Köszönöm a megtisztelő figyelmet! betegcsoportokban

fragmentocyta

IG%

IRF

#IG

CHr v.RetHe

NRBC

IPF

MPV


ad