Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis - PowerPoint PPT Presentation

Tema 3.
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Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis. contenido. • Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2) • Propiedades f ísicas: - absorción luz UV - desnaturalización - reasociación

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Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis

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Presentation Transcript


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

Tema 3.

Propiedades de los ácidos nucleicos

Métodos de análisis


Contenido

contenido

• Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2)

• Propiedades físicas: - absorción luz UV

- desnaturalización

- reasociación

- viscosidad

• Caracterización: - efecto hipercrómico

- curvas Cot

- secuenciación (tema 29)

• Aislamiento y caracterización: - centrifugación

- electroforesis

• Detección: - marcaje radiactivo

- hibridación: tipos, FISH, chip, Southern

- amplificación (PCR - tema 29)


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

UV

Absorción de luz ultravioleta (UV)


Desnaturalizaci n y reasociaci n

desnaturalización y reasociación


Viscosidad

viscosidad

  • Viscosidad del DNA en solución

  • disminuye al

  • fragmentarse:

  • agitación mecánica, sonicación (ultrasonido)

  • desnaturalizarse:

  • calor, baja fuerza iónica, pH alcalino, urea, …


Efecto hipercr mico

efecto hipercrómico


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

efecto hipercrómico por desnaturalización del DNA


Cin tica de reasociaci n

cinética de reasociación


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

Curvas Cot


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

Cot1/2 = 1/k

Cot1/2 puro = f Cot1/2 mezcla

X R = f N

1/2 = 1/(1 + k Cot )

1/2

X = a Cot

1/2


Genoma nuclear humano

genoma nuclear humano


No todo el dna codifica prote nas

no todo el DNA codifica proteínas

Britten y Kohne, 60’s


Centrifugaci n

centrifugación

rotores y centrífugas


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

centrifugación diferencial


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

centrifugación zonal

gradiente

de sacarosa

separación

por tamaño


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

centrifugación isopícnica

gradiente

de CsCl

separación

por densidad


Separaci n dna2c y dnass

SeparaciónDNA2c y DNAss

1. centrifugación isopícnica

2. tratamiento con nucleasas específicas de

DNA2c o DNAss

3. columnas de hidroxiapatito:

retienen DNA2c y pasa el DNAss (el DNA2c puede ser eluido aumentando la temperatura o la concentración salina)

4: filtros de nitrocelulosa: unen DNAss y no DNA2c


Electroforesis

electroforesis


Radio

marcaje radiactivo

radio


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

isótopos pesados

- isótopos más usados en biología:

N14 y N15; C12 y C13

- uso en centrifugación isopícnica


Hibridaci n molecular

hibridaciónmolecular


Hibridaci n dna rna

hibridación DNA/RNA


Hibridaci n en filtro

hibridación en filtro


Hibridaci n en colonia

hibridación en colonia


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

FISH


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

FISH

centrómeros

telómeros


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

cariotipo espectral humano


Chips de dna

chips de DNA


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

microarrays


Southern

la solución sube a través del gel

al filtro y a la pila de papeles absorventes

pocillos con DNA

esponja

gel

filtro

electroforesis

gel

Southern

DNA en

el filtro

solución salina

transferencia

hibridación

con una sonda

electroforesis +

transferencia +

hibridación =

Southern

la sonda hibrida

con las secuencias

complementarias

el filtro se expone a

una película o una

placa sensibles

Southern


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

electroforesis

hibridación


Tema 3 propiedades de los cidos nucleicos m todos de an lisis

Southern (DNA)

Northern (RNA)

Western (proteínas)


Problemas

problemas

capítulo 1

2ª ed.: 14-24 (el 23 no)

3ª ed.: 14-23

1 h de clase: 30-octubre-2009


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