Tema 3.
Download
1 / 55

Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis - PowerPoint PPT Presentation


  • 376 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis. contenido. • Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2) • Propiedades f ísicas: - absorción luz UV - desnaturalización - reasociación

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha

Download Presentation

Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Tema 3.

Propiedades de los ácidos nucleicos

Métodos de análisis


contenido

• Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2)

• Propiedades físicas: - absorción luz UV

- desnaturalización

- reasociación

- viscosidad

• Caracterización: - efecto hipercrómico

- curvas Cot

- secuenciación (tema 29)

• Aislamiento y caracterización: - centrifugación

- electroforesis

• Detección: - marcaje radiactivo

- hibridación: tipos, FISH, chip, Southern

- amplificación (PCR - tema 29)


UV

Absorción de luz ultravioleta (UV)


desnaturalización y reasociación


viscosidad

  • Viscosidad del DNA en solución

  • disminuye al

  • fragmentarse:

  • agitación mecánica, sonicación (ultrasonido)

  • desnaturalizarse:

  • calor, baja fuerza iónica, pH alcalino, urea, …


efecto hipercrómico


efecto hipercrómico por desnaturalización del DNA


cinética de reasociación


Curvas Cot


Cot1/2 = 1/k

Cot1/2 puro = f Cot1/2 mezcla

X R = f N

1/2 = 1/(1 + k Cot )

1/2

X = a Cot

1/2


genoma nuclear humano


no todo el DNA codifica proteínas

Britten y Kohne, 60’s


centrifugación

rotores y centrífugas


centrifugación diferencial


centrifugación zonal

gradiente

de sacarosa

separación

por tamaño


centrifugación isopícnica

gradiente

de CsCl

separación

por densidad


SeparaciónDNA2c y DNAss

1. centrifugación isopícnica

2. tratamiento con nucleasas específicas de

DNA2c o DNAss

3. columnas de hidroxiapatito:

retienen DNA2c y pasa el DNAss (el DNA2c puede ser eluido aumentando la temperatura o la concentración salina)

4: filtros de nitrocelulosa: unen DNAss y no DNA2c


electroforesis


marcaje radiactivo

radio


isótopos pesados

- isótopos más usados en biología:

N14 y N15; C12 y C13

- uso en centrifugación isopícnica


hibridaciónmolecular


hibridación DNA/RNA


hibridación en filtro


hibridación en colonia


FISH


FISH

centrómeros

telómeros


cariotipo espectral humano


chips de DNA


microarrays


la solución sube a través del gel

al filtro y a la pila de papeles absorventes

pocillos con DNA

esponja

gel

filtro

electroforesis

gel

Southern

DNA en

el filtro

solución salina

transferencia

hibridación

con una sonda

electroforesis +

transferencia +

hibridación =

Southern

la sonda hibrida

con las secuencias

complementarias

el filtro se expone a

una película o una

placa sensibles

Southern


electroforesis

hibridación


Southern (DNA)

Northern (RNA)

Western (proteínas)


problemas

capítulo 1

2ª ed.: 14-24 (el 23 no)

3ª ed.: 14-23

1 h de clase: 30-octubre-2009


ad
  • Login