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人类疾病的生化和分子遗传学. 先天性代谢病. 本章内容提示. 先天代谢病的类型 几种疾病发病分子机制、疾病相关基因定位、疾病的遗传方式。 氨基酸代谢病: 白化病 PKU 糖代谢病: 半乳糖血症 糖原贮积症 嘌呤代谢病: 自毁容貌综合征 受体蛋白病: 家族性高胆固醇血症. 一、 “ 先天代谢缺陷 ” 概念提出. 1908年 , Garrod A 在皇家伦敦医学院发表了题为 “ 先天性代谢缺陷 ” 的著名报告,他公布了四种人类罕见疾病: 尿黑酸尿症 戊糖尿症 胱氨酸尿症
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人类疾病的生化和分子遗传学 先天性代谢病
本章内容提示 • 先天代谢病的类型 • 几种疾病发病分子机制、疾病相关基因定位、疾病的遗传方式。 氨基酸代谢病:白化病 PKU 糖代谢病:半乳糖血症 糖原贮积症 嘌呤代谢病:自毁容貌综合征 受体蛋白病:家族性高胆固醇血症
一、“先天代谢缺陷”概念提出 • 1908年,Garrod A在皇家伦敦医学院发表了题为“先天性代谢缺陷”的著名报告,他公布了四种人类罕见疾病: 尿黑酸尿症 戊糖尿症 胱氨酸尿症 白化病 Garrod 对尿黑酸尿症的开拓性的研究开辟了生化遗传学这一领域
尿黑酸尿症 • 临床特征:黑尿、大关节、脊柱椎间盘 退行性关节炎——褐黄病。 上腭出现兰色或黑色的色素斑, 眼巩膜、肋软骨出现黑色沉淀 (内源性尿黑酸自身氧化形成的产物沉淀所致)
临床症状 • 新生儿和儿童期: 尿黑酸尿是唯一的特点; • 成人期: 除了尿黑酸尿以外,由于尿黑酸增多,并在结缔组织中沉着,而导致褐黄病(ochronosis),如果累及关节的话则进展为褐黄病性关节炎(ochronotic arthritis)。
推测病因 代谢 转化 正常人:苯丙Aa、色Aa→尿黑酸→ 另一代谢产物→ 不蓄积 尿黑酸患者:苯丙Aa、色Aa ↓ 尿黑酸↑—//→另一代谢产物 ↓ 大量贮积,尿中排出
实验分析 尿黑酸患者 服食尿黑酸→尿中定 量排出 高蛋白饮食(含苯丙Aa、 色Aa)→内源性尿黑酸↑ 受试者 正常人→ 服食尿黑酸→不排出 高蛋白饮食(含苯Aa、 色Aa)→无尿黑酸检出
证实病因——尿黑酸氧化酶 缺乏 • 假设50年后被证实:患者的肝脏中检测不到尿黑 酸氧化酶,此酶负责尿黑酸进一步代谢。 • 苯丙Aa • ↓苯丙Aa羟化酶 • 酪Aa • ↓酪Aa氨基转移酶 • p-羟基苯丙酮酸 • ↓ p-羟基苯丙酮酸氧化酶 • 尿黑酸 • ↓尿黑酸氧化酶 • 延胡索酸+乙酰乙酸
尿黑酸症遗传学分析 • 尿黑酸尿症呈现家族分布:17个尿黑酸尿症家庭中有8个父母是一级表兄妹。一级表兄妹婚配为一种罕见的隐性性状的表现提供了条件 • 是第一种被确认的常染色体隐性遗传病。 • 正常等位基因是未受累个体特异的酶产物所必需的,这是关于基因通过编码的酶施加其影响最初的线索。所以Garrod的工作预言了“一个基因一种酶”的假说。
二、先天代谢缺陷产生机制 1、酶活性异常的遗传基础 • 1)结构基因突变——酶结构改变,稳定性降低,酶动力学改变。 • 2)调节基因突变——酶合成速率下降,催化活性降低, • 3)翻译后修饰加工障碍——酶催化中心不完善,活性下降。
代谢异常机理 • Gene AB BCC/D • transcribtion • mRNA • translatin • Enzyme • S(底物 )A↑ B↑ C↑ D↓ • E F 代谢旁路开放
二、先天代谢缺陷代表疾病 氨基酸代谢病:PKU 白化病 糖代谢病:半乳糖血症 糖原贮积症 嘌呤代谢病:自毁容貌综合征 受体蛋白病:家族性高胆固醇血症
苯丙酮尿症 ☆ • 发病环节:酶缺乏导致旁路代谢产物增多 • 遗传方式:AR • 缺乏的酶:苯丙氨酸羟化酶 • 遗传基因定位: PAH基因 12q24.1 全长90Kb,13个外显子,12个内含子。 目前已发现近200种错义突变
临床症状: • 本病经典型以智能发育不全为主要特征 。 • 旁路代谢产物苯丙酮酸↑苯乳酸↑苯乙酸↑ • 从汗液尿液排出,毛发、皮肤和尿有特殊气味 • 黑色素生成减少,患者毛发和皮肤颜色浅 • 神经递质生成受影响,患儿智力低下。 • 治疗:低苯丙氨酸饮食 • 早期治疗以避免神经系统损伤, • 减少智力损害 • 生化手段可作新生儿筛查
苯丙氨酸、酪氨酸代谢 黑色素 苯丙氨酸 酪氨酸 多巴 儿茶酚胺 甲状腺素 苯丙酮酸 尿黑酸 苯乙酸 苯乳酸 乙酰乙酸
白化病Albinism ☆ • 发病环节:酶缺乏导致代谢终产物缺乏 • 遗传方式:AR • 缺乏的酶:酪氨酸酶,导致终产物黑色素缺乏 • 遗传基因OCA1定位:11q14-q21
临床症状: • 皮肤呈白色,头发呈银白或淡黄色 • 虹膜及瞳孔呈淡红色,视网膜无色素 • 视物模糊,眼球震颤,羞明 • 易患皮肤癌
半乳糖血症(Galactosemia) #发病环节:酶缺乏导致代谢中间产物堆积和排出 #遗传方式:AR #临床表现: 婴儿哺乳后呕吐、腹泻、 对乳类不耐受,继而出现肝硬化、 白内障、智力低下等症状
半乳糖血症(Galactosemia) E2 E1 半乳糖 半乳糖-1-磷酸+2-磷酸尿苷葡萄糖 2-磷酸尿苷半乳糖 葡萄糖-1-磷酸 半乳糖醇 葡萄糖-6-磷酸 E1:半乳糖激酶 E2:半乳糖-1-磷酸尿苷酰转移酶
1. 喂乳后几天出现呕吐、拒食、腹泻、失重。2. 一周后,肝脏损害症状:黄疸、肝肿大、腹水。3. 几个月后,智力发育障碍,蛋白尿,氨基酸尿,白内障。
糖原贮积症Ⅰ( von Gierke病) 葡萄糖-6-磷酸酶 糖原 葡萄糖-1-磷酸 葡萄糖-6-磷酸 葡萄糖 • 缺乏的酶:葡萄糖-6-磷酸酶 • 遗传方式:AR • 基因定位:17q21
临床表现: ⑴ 肝糖原合成过多,引起患儿肝肿大 ⑵ G-6-Pase缺乏, 葡萄糖供应不足,易发生低血糖,长期可致患儿发育不良,消瘦,身体矮小 ⑶动用脂肪供能可以出现酮血症。 ⑷ G-6-P无氧酵解生成大量乳酸,导致酸中毒。
嘌呤代谢病 自毁容貌综合征(Lesch-Nyhan syndrome, LNS) 缺乏的酶:次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (HGPRT) 遗传方式:X连锁隐性遗传。 基因定位:Xq26-q27。 主要的突变类型有:核苷酸取代、插入、缺失和移码突变,可在DNA水平上作产前诊断。
发病机理 HGPRT催化5-磷酸核糖-1-焦磷酸(PRPP)上的磷酸核糖基转移到鸟嘌呤和次黄嘌呤上,使之成为鸟苷酸和次黄苷酸,而它们又可反馈抑制嘌呤前体5-磷酸核糖-1-胺的生成。 此酶如缺乏,则鸟苷酸和次黄苷酸合成减少,嘌呤合成加快,致使尿酸增高,代谢紊乱而致病。
临床表现:1、高尿酸血症和高 尿酸尿症2、痛风性关节炎3、智力迟钝,大 脑瘫痪4、舞蹈样动作,自残行为
家族性高胆固醇血症(FH) • 遗传方式:常染色体显性遗传病, • 发病率:1/500 • 临床特点:血清胆固醇增高(300 ~600 mg/dl,正常人230),低密度脂蛋白(LDL)胆固醇增高(>200mg/dl)。大约50%的患者出现伸肌腱的胆固醇沉积(黄色瘤) • 发病机理:低密度脂蛋白受体缺陷
1、胆固醇调节 正常人—— • LDL受体与LDL颗粒结合→内在化→ LDL颗粒中胆固醇降解为游离胆固醇→细胞内游离胆固醇的氧化衍生物启动调节过程: 1) HMG-CoA还原酶↓↓,胆固醇合成↓ 2)胆固醇酯化和储存增加 3) LDL受体合成减少,对外源胆固醇摄取减少
患者:LDL受体合成减少引起细胞对外源性胆固醇的摄取减少患者:LDL受体合成减少引起细胞对外源性胆固醇的摄取减少
2、LDL受体 ◎基因定位:19chr上,长约45kb,18个外显子, mRNA 5.3kb ◎对基因的分析表明: 配体结合区,由5个Exon编码(2~6个外显子) EGF前体同源区,由8个Exon编码。 糖基化部分,由1个Exon编码。 跨膜区,由第16个Exon和17Exon的部分编码。 胞浆内的尾部,由Exon17剩于的部分和E18的一部 分编码。 ◎LDL受体在内质网合成,再经过高尔基复合体时糖基化,分子量为160kDa,是插入C膜的整合膜蛋白。
3、LDL受体的突变 • 在家族性高胆固醇血症中,鉴定了150 种不同的突变,并发现有多种突变和高度的等位基因异质性。 • 多数突变为受体基因不同等位基因杂合子---既复合杂合子。
LDL受体基因突变可分为5个功能类型: • 1、突变发生在启动子区,不产生mRNA和蛋白; • 2、突变阻断新生的LDL受体蛋白从ER转运到GO; • 3、突变编码的受体可以到达C的表面,但不能与正常地结合配体; • 4、突变编码的受体可以到达C的表面,也能与正常地结合LDL,但不能集中在网络蛋白包被小窝。 • 5、再循环缺陷型突变,突变编码的受体可以结合并内在化LDL。但不能释放内含体中的受体,和回到C的表面。 基于上述的研究,从DNA水平对FH进行筛查和产前诊断已成为可能。
G-6-PD • 朝鲜战争期间,美国士兵使用伯氨基喹啉来预防疟疾,约10%的黑人士兵发生溶血,少数白人士兵(地中海血统)也发生严重的溶血性贫血。 • 后来发现这种药物诱发贫血的基础是G6PD的遗传性缺陷。 • 从此建立了药物遗传学 • 这里,我们主要探讨 G6PD的遗传性缺陷
药物+Hb H2O2 • G6PD 基因:定位于X染色体,全长19kb, 含13个外显子,编码514个氨基酸的蛋白。 GSSG +NADPH GSH px GSH +NADP GR G6PD 6-磷酸葡萄糖酸 6-磷酸葡萄糖
突变类型 外显子 突变位置 突变类型 Aa位置 Aa替代 5 376 A→G 126 天冬酰氨 天冬氨酸 4 202 G→A 68 缬氨酸 蛋氨酸 6 563 C→T 188 丝氨酸 苯丙氨酸 突变导致电泳迁移率改变(E5)和酶活性降低(E4和E6)。
●G6PD的突变型是因为在淀粉凝胶中的电泳迁移率不同而被发现。突变型的G6PD活性下降。●G6PD的突变型是因为在淀粉凝胶中的电泳迁移率不同而被发现。突变型的G6PD活性下降。 • G6PD-B:野生型, • G6PD-A:突变型, • G6PD-A-:二次突变。 ●酶活性 • G6PD-B>G6PD-A>G6PD-A-。 • 后者酶活性是前二者的15%。 ●电泳迁移率: • G6PD-A>G6PD-A-- >G6PD-B。
DNA水平:报道了60多种独立突变, 范围:包括几乎整个编码区 性质:错义突变,多为编码链或非编码链中CpG二核苷 酸发生C→T转换突变。 • 蛋白水平:已报道400多种等位突变型, 其中许多是多态。 • G6PD缺乏症很常见,几乎分布世界各地。
本节要求掌握: 几种常见代谢病 氨基酸代谢病:白化病 PKU 糖代谢病:半乳糖血症 糖原贮积症 嘌呤代谢病:自毁容貌综合征 受体蛋白病:家族性高胆固醇血症 什么病、缺什么酶、何种遗传方式?