组织切片制作技术
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组织切片制作技术. 组织标本的处理. 阶段 1. 阶段 2. 阶段 3. 阶段 4. 固定 目的 常用固定液 固定方法. 取材 标记 大小 时间. 脱水 透明 浸蜡. 包埋. 阶段 1. 取材注意事项 : 1 处死动物要迅速 2 标本材料要新鲜 3 取材所使用解剖器械要锋利 4 标本大小 , 形状要适宜 ( 小而薄 ) 5-10mm,2-5mm 5 标本表面的清洁 6 取材部位要准确. 阶段 2. 固定的目的 : 1 防止组织自溶 , 腐败

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Presentation Transcript


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组织切片制作技术


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组织标本的处理

阶段 1

阶段 2

阶段 3

阶段 4

固定

目的

常用固定液

固定方法

取材

标记

大小

时间

脱水

透明

浸蜡

包埋


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阶段 1

取材注意事项:

1 处死动物要迅速

2 标本材料要新鲜

3 取材所使用解剖器械要锋利

4 标本大小,形状要适宜(小而薄) 5-10mm,2-5mm

5 标本表面的清洁

6 取材部位要准确


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阶段 2

固定的目的:

1 防止组织自溶,腐败

2 使标本成分凝固为不溶性物质,与生活状态相仿

3 硬化作用


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固定的方式: 浸泡固定

灌注固定

常用的固定液:

常用的固定液: 10%福尔马林(pH7.0-7.2)

固定时间: 1-2天不定


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阶段 3

脱水:

利用某种化学试剂逐步将标本内部的水分置换出来,以使标本内部处于无水状态的过程。

脱水剂: 无水乙醇

脱水方法: 梯度脱水

70% 80% 90% 95% 100%

30-40分钟


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透明:

利用某些有机试剂既能与脱水剂混合,又能与石蜡液相融合的特性,来置换标本内的脱水剂,为浸蜡作准备。

目的:桥梁作用

常用透明剂: 正丁醇*2 二甲苯*1

时间: 过夜 20分钟


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浸蜡:

透明后的标本投入到温度适宜的熔化的石蜡液中,置换出标本内透明剂的过程

浸蜡材料:

不同熔点的石蜡 54度

时间:2-3小时


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阶段 4

包埋目的:

去除标本中透明剂成分,使熔化的石蜡渗入到标本内部,通过冷却进一步增强整体硬度而成为适宜的石蜡标本固体,便于石蜡切片。


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包埋的具体操作过程:

1 准备好用具

2 包埋器皿内倒入洁净的石蜡液

3 将浸蜡的标本依次取出放入包埋器皿中

4 作好标签

5 将包埋器皿冷却


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包埋的注意事项:

1 标本的切面朝下,一定要接触包埋器的底部

2 包埋时动作迅速,避免气泡产生

3 包埋后应迅速冷却


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组织切片的制作

石蜡切片机


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修切蜡块

原则:

1 近似长方形或正方形

2 标本长轴与蜡块长轴一致

3 标本四周留有1-2mm蜡边


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切片操作

1 固定标本蜡块,使之成垂直面

2 固定切片刀于刀架上

3 调节切片厚度(5-7um)

4 调节蜡块切面与刀刃间的距离

5 左手持毛笔,右手转动轮盘

6 取下石蜡带


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展片、捞片与烤片

水浴展片:

借助于一定热度的水温和水的张力,使得皱缩的石蜡切片舒展而平整,近似达到标本蜡块切面的大小。

展片的标准:

组织变白且周围石蜡透明,组织完整,无裂口或撕裂,无皱褶和气泡


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