大型溞活动抑制实验

1. 大型溞活动抑制实验

2. 内 容 1 简介 5 实验步骤 2 实验目的与内容 6 结果与讨论 3 实验原理 7 注意事项 实验材料与方法 4 8 习题或思考

3. 1.简介 大型溞(Daphnia Magna)是水生生态系统食物链的重要环节，以其为指示生物评价污染物毒性具有灵敏度高、繁殖率高、重复性好等优点，已被广泛采纳为标准水生指示生物，而且实验测定方法国际上比较规范。

4. 1.简介 大型溞(Daphnia magna)的生命周期分为：卵、幼溞、青年溞、成溞，其寿命依赖条件有很大的变化，每年的大多数时期，种群几乎完全是由雌性组成。 图1 大型溞雌性与雄性个体照片

5. 2.实验目的与内容 实验目的 • 了解大型溞的生命周期变化 • 观察正常和畸形大型溞的结构 • 掌握大型溞急性毒性实验方法 实验内容 • 观察正常大型溞游动的情况 • 使用倒置显微镜观察正常大型溞结构和雌雄的区别 • 测定化合物对大型溞的24 h活动抑制的EC50值

6. 3.实验原理 剂量反应关系指不同剂量外源化学物质与其引起的效应发生率之间的关系。量反应关系曲线有直线型、抛物线型和S曲线型，见图2。S曲线型较为常见 。

7. 4.实验材料与方法 • 实验仪器 溶解氧测定仪、水硬度仪、生化培养箱、倒置显微镜、超声波清洗仪、pH计、烧杯等 • 实验试剂 根据具体情况选择受试化合物(农药、医药等)。 氯化钙；硫酸镁；碳酸氢钠；氯化钾；盐酸；氢氧化钠。

8. 4.实验材料与方法 • 毒性实验方法 本实验参照采用国际标准ISO 6341-1982和OECD 202的大型溞活动抑制测定方法，测定物质或废水对大型溞的半数效应浓度(24 h-EC50)，用于判断物质和废水的毒性程度。

9. 5.实验步骤 2 3 4 1 化 合 物 的配 制 正 式 实 验 准 备 实 验 预 实 验

10. 5.实验步骤 • 准备实验 • 试验用水：适于培养溞类的任何水，无论是天然水或标准稀释水，都可用于测试试验。 • 化合物的配制 • 配制贮备液时，难溶于水的物质可用适当的方法将其溶解或分散，包括采用超声波装置和使用对溞低毒的助溶剂，并应加设助溶剂对照试验。 • 预试验 • 在正式实验之前，先进行较大范围浓度系列的初步试验，为正式试验设置受试物的浓度提供依据。

11. 5.实验步骤 • 正式实验 • 根据预试验的结果，至少设五个浓度组，必须设置空白对照。 • 每个浓度组和对照组要用25只溞，分成5组，每组5只。实验温度18~22 ℃。在自然光照下进行，光暗比为12:12。记录24 h溞类累计活动抑制数。 • 在实验开始和结束时，应测定实验用水的pH值，溶解氧，硬度等。

12. 6.结果与讨论 • 以表格形式记录预实验和正式实验的结果。 • 概率单位图解法估算EC50，并利用统计分析软件的概率回归分析方法计算EC50和95％置信区间。

13. 7.注意事项 • 为了保证大型溞对毒物良好的敏感性，溞龄最好在6-24 h之间。 • 实验结束时，实验溶液中的溶解氧浓度应高于空气饱和值的60％。 • 实验结束时，对照组中活动受抑制溞类数应少于10％。 • 受试物实测浓度不能低于设置浓度的80％。 • 定期测定参比物的24 h EC50，以检查供试溞的敏感性。满足参比 物质重铬酸钾的24 h EC50值≤2.0 mg/L，溞敏感度符合要求。

14. 8.习题与思考 • EC50是否还有其它的计算方法？如果有，哪种更好一些？ • 2. 对于水溶解性差的物质，助溶剂的使用是否能保证数据的可靠性？

15. Thank You !