120 likes | 227 Views
Élősejtszám meghatározás. 2. gyakorlat. Értékelés. Telepszámlálás MPN. Telepszámlálás. Az inkubálás után megszámoljuk a telepeket A telepeket valamennyi, legfeljebb 300 telepet tartalmazó, lemezen megszámoljuk Az értékelésben a 10 és 300 közötti telepet tartalmazó lemezek vesznek részt.
E N D
Élősejtszám meghatározás 2. gyakorlat
Értékelés • Telepszámlálás • MPN
Telepszámlálás • Az inkubálás után megszámoljuk a telepeket • A telepeket valamennyi, legfeljebb 300 telepet tartalmazó, lemezen megszámoljuk • Az értékelésben a 10 és 300 közötti telepet tartalmazó lemezek vesznek részt
Telepszámlálás • Problémák • Szétfutó telepek • Összefolyó telepek Lehetséges megoldás a lemez részekre osztása, és az így kapott mikrobaszám extrapolálása
Az eredmény kiszámítása 90 mm átmérőjű Petri-csészék használatakor: • Maximálisan számolható telep: 300/lemez • Ha a Petri-csésze átmérője nem 90 mm (vagy membránt használtunk) a számolható telepek mennyiségét méretarányosan növelni, vagy csökkenteni kell
Az eredmény kiszámítása • Két hígításból számolunk, úgy hogy legalább 10 telep legyen egy Petri-csészén • A minta mikrobaszámának megadása (N) a következő egyenlettel történik: Ahol SC a két lemezen megszámolt összes telep V az inokulum térfogata (ml) d az első megszámolt lemez hígítási foka (a hígítatlan mintáé 1)
Az eredmény kiszámítása Példa: az első megszámolt hígításban (d=10-2): 168 telep a második megszámolt hígításban: 20 telep Inokulum (V): 1 ml az eredmény: 1,7 x 104 cfu/g(ml)
MPN (Most Probable Number) módszer • Meghatározzuk a különböző hígításokhoz tartozó pozitív csövek számát • A pozitív csövek száma alapján kulcsszámot képezünk • Kulcsszám alapján MPN értéket (táblázatból) határozunk meg • MPN alapján a hígítás figyelembe vételével kiszámítjuk a kiinduló sejtszámot
Értékelés Példa: hígításonként 3 párhuzamos leoltás A kulcsszám első tagja az az utolsó hígítás, amelyben még maximális a pozitív csövek száma: 300 A figyelembe veendő hígítás (d): 10-2
Értékelés • A kulcsszámhoz tartozó MPN érték (táblázatból) MPNd(300) = 2,3
Értékelés • A minta sejtszámának (MPN0) kiszámítása a kulcsszám és a hígítás figyelembe vételével: MPN0 = MPNd/d = 2,3/10-2 MPN0 = 2,3 x 102 /g(ml)
Értékelés • Kategóriák (a kulcsszámok előfordulásának valószínűsége szerint) 1. 2. 0. Figyelembe venni általában csak az 1.és néha a 2. kategóriába tartozó eredményt szabad. A 0. kategóriába tartozó eredmény nem vehető figyelembe!