רקומביננטי
Download
1 / 11

רקומביננטי DNA - PowerPoint PPT Presentation


  • 129 Views
  • Uploaded on

רקומביננטי DNA. הכנה ושיבוט DNA רקומביננטי. שימוש בסמני ברירה. סימני הברירה בפלסמיד pBR322. לפלסמיד זה שני גנים המקנים לעמידות לשני סוגי אנטיביוטיקה ampicillin ו tetracyclin . ה DNA הזר הוחדר באתר החיתוך S al l . הפלסמיד הוחדר לחיידקים (טרנפורמציה).

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' רקומביננטי DNA' - chiquita-arama


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript

הכנה ושיבוט DNA רקומביננטי



סימני הברירה בפלסמיד pBR322.

  • לפלסמיד זה שני גנים המקנים לעמידות לשני סוגי אנטיביוטיקה ampicillin ו tetracyclin.

  • ה DNA הזר הוחדר באתר החיתוך Sall.

  • הפלסמיד הוחדר לחיידקים (טרנפורמציה).

  • חיידקים שקיבלו את הפלסמיד ללא ה DNAהזר היו עמידים לשני סוגי האנטיביוטיקה.

  • חיידקים שקיבלו את הפלסמיד עם ה DNAהזר היו עמידים כנגד ampicillinולא נגד tetracyclin.


תוצאות הזריעה בצלחת המכילה ampicillinוסובסטרט X-gal (bromo-chloro-indolyl-galactopyranoside).

  • פרוק סובסטרט זה ע"י האנזים lacZמקנה צבע כחול למושבה.

חיידקים עם פלסמיד רקומביננטי

חיידקים ללא פלסמיד רקומביננטי



זיהוי המושבה בעזרת גלאי probe

הדפס של המושבות המכילות את הפלסמיד עם הרצף המבוקש

אינקובציה של הגלאי ושטיפה.

יצירת הדפס של המושבות ע"ג נייר

הוספת הגלאי

חשיפה לנייר צילום.

גידול חיידקים הרקומביננטיים בצלחת פטרי.

מקום מושבות שפלטו קרינה

ליזיס של החיידקים ודנטורציה של ה DNA.


זיהוי גן בעזרת תוצר

  • גם לאחר שמוצאים את החיידקים שקיבלו את הפלסמיד הרקומביננטי, יש עוד מקום לבדוק האם הגן מתבטא בחיידק?

  • תהליך זה יכול להיעשות ע"י זיהוי התוצרים.

  • תיאור השיטה:

  • יוצרים הדפס של המושבות ע"ג נייר ניטורצולוז. החלבונים נספחים לנייר.

  • מדגירים את הנייר עם נוגדן כנגד החלבון.

  • שטיפה.

  • מדגירים עם נוגדן שניוני מסומן רדיואקטיבית.

  • שטיפה.

  • בדיקה באוטורדיוגרפיה.



שימוש בגלאיProbe לזיהוי DNA

Radioactiveprobe (DNA)

Mix with single-stranded DNA fromvarious bacterial(or phage) clones

Single-strandedDNA

Base pairingindicates thegene of interest



ad