1 / 16

Izolacja limfocytów

K. S. K. Zbieranie komórek na filtr szklany. S. Pomiar radioaktywności w liczniku scyncylacyjnym. Stymulatory proliferacji: PHA, Con A, antygeny swoiste. Kontrola: medium. H 3 tymidyna. K. K. S. S. Hodowla 24h. Hodowla  48h. Izolacja limfocytów. Legenda: limfocyt

chi
Download Presentation

Izolacja limfocytów

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. K S K Zbieranie komórek na filtr szklany S Pomiar radioaktywności w liczniku scyncylacyjnym Stymulatory proliferacji: PHA, Con A, antygeny swoiste Kontrola: medium H 3 tymidyna K K S S Hodowla 24h Hodowla  48h Izolacja limfocytów Legenda: limfocyt limfocyt z wbudowanym izotopem S - hodowla stymulowana K - hodowla kontrolna Ryc. Schemat przebiegu izotopowego testu proliferacji limfocytów

  2. 1/1024 1/128 1/512 1/256 1/16 1/64 1/32 1/8 1/4 1/2 Pos. Neg. miano Pacjent 64 1 8 2 512 3 <2 4 32 5 128 6 32 7 4 8 Hemaglutynacja bierna Wynik dodatni Wynik ujemny

  3. Zawiesina komórek Komórki po przejściu przez filtr ( do liczenia) Filtr miliporowy Roztwór czynnika chemotaktycznego Kierunek chemotaksji Ryc.Schemat komory do badania chemotaksji wg Boydena

  4. I A II B III I II III Schemat płytki agarozowej z układem wyciętych dołków zawierających: I - czynnik chemotaktyczny, II - zawiesinę badanych komórek, III - płyn kontrolny. Schemat pomiaru chemotaksji ( A ) i migracji spontanicznej ( B ). Ryc.„ Agarozowa „ metoda chemotaksji

  5. Izolacja komórek efektorowych Wspólna hodowla ok 4 h Pomiar radioaktywności nadsączy hodowli Znakowane 51Cr komórki docelowe Legenda: - Komórki efektorowe ( badane) - Komórki docelowe zawierające izotop - Izotop wolny Ryc.Schemat przebiegu testu cytotoksycznego NK

  6. Hodowla Brak proliferacji - limfocyty identyczne antygenowo Hodowla Proliferacja - limfocyty o różnych antygenach Wzorcowe limfocyty o znanych antygenach HLA-D, po działaniu mitomycyny Limfocyty badane Legenda: Antygeny HLA - D na limfocytach Ryc. Schemat zasady mieszanej hodowli limfocytów ( MLR).

  7. Odczyn antyglobulinowy Coombsa: A - bezpośredni, B - pośredni Erytrocyt z antygenami Rh Przeciwciało anty Rh Przeciwciało antyglobulinowe Legenda: A Erytrocyty wzorcowe z antygenem Rh Przeciwciała anty-gammaglobulinowe B Aglutynacja Surowica badana z przeciwciałami anty - Rh Erytrocyty wzorcowe opłaszczone przeciwciałami anty - Rh

  8. Test zahamowania migracji leukocytów - metoda kapilarowa Płyn odżywczy z antygenem Płyn odżywczy bez antygenu - kontrola Strefa migracji w podłożu bez antygenu Strefa migracji w podłożu z antygenem Naklejone parafiną szkiełko nakrywkowe Otwory do wprowadzania płynów do wnętrza komory Przyklejone do brzegów komór fragmenty kapilar z odwirowanymi leukocytani krwi obwodowej pacjenta

  9. Aglutynacja bakteryjna Bakterie z antygenami somatycznymi Przeciwciała przeciw antygenom somatycznym Aglutynacja somatyczna” O „ ( grudkowa ) Bakterie z antygenami rzęskowymi Przeciwciała przeciw antygenom rzęskowym Aglutynacja rzęskowa” H „ ( obłoczkowa )

  10. Przebieg reakcji precypitacji w zależności od stężenia reagentów Strefa nadmiaru antygenów W środowisku reakcji pozostają niezwiązane antygeny. Kompleksy immunologiczne są małe i nie wszystkie precypitują Strefa ekwiwalwncji. W reakcji immunologicznej biorą udział wszystkie antygeny i przeciwciała. Powstające kompleksy immunologiczne są duże i całkowicie precypitują Strefa nadmiaru przeciwciał. W środowisku reakcji pozostają niezwiązane przeciwciała. Kompleksy immunologiczne są małe i nie wszystkie precypitują.

  11. Immunoelektroforeza rakietkowa wg Laurella Płytka szklana z żelem agarozowym zawierającym swoiste przeciwciała skierowane przeciw badanym antygenom Kierunek elektroforezy Strefy precypitacji - „rakietki” Anoda + Katoda - Pojemniki w żelu do nanoszenia wzorców antygenowych Pojemniki w żelu do nanoszenia badanego materiału

  12. Test ASO Streptolizyna 1 U Rozcienczenie surowicy 1/25 1/100 1/500 1/1000 5% Erytrocyty królicze (inkubacja 45 min37st C) hemoliza Brak hemolizy

  13. Odczyn wiązania dopełniacza - OWD Antygen wzorcowy Surowica ujemna Antygen związany przez przeciwciała Wolny antygen Dopełniacz Inkubacja1/2 godz 37C Dopełniacz związany przez swoisty kompleks immunologiczny Wolny dopełniacz Erytrocyty w kompleksie z przeciwciałami anty - erytrocytalnymi Hemoliza krwinek uczulonych zależna od dopełniacza Brak hemolizy krwinek uczulonych Wynik testu ujemny Wynik testu dodatni

  14. Test immunoenzymatyczny typu ELISA Antygeny wzorcowe na fazie stałej Surowica badana z przeciwciałami Dokładne płukanie Przeciwciała antygammaglobulinowe wyznakowane enzymem Dokładne płukanie Substrat dla enzymu chromogen Pomiar intensywności zabarwienia środowiska reakcji Reakcja barwna

  15. Test immunoenzymatyczny typu „kompetycyjnego” Surowica badana z praeciwciałami Antygeny wzorcowe na fazie stałej Dokładne płukanie Wzorcowe przeciwciała wyznakowane enzymem Substrat dla enzymu chromogen Pomiar intensywności zabarwienia środowiska reakcji Reakcja barwna

  16. Test immunoenzymatyczny typu „ kanapkowego”. Dokładne płukanie Przeciwciała wzorcowe na fazie stałej Surowica badana z antygenami Dokładne płukanie Przeciwciała wzorcowe anty - antygenowe wyznakowane enzymem Substrat dla enzymu chromogen Pomiar intensywności zabarwienia środowiska reakcji Reakcja barwna

More Related