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LE MALATTIE DEL SANGUE

LE MALATTIE DEL SANGUE. EMOPATIE NON NEOPLASTICHE. LEUCOCITOSI. LEUCOCITI. LEUCOPENIE. CARATTERISTICHE GENERALI PATOGENESI QUADRI SPECIFICI. PIASTRINOSI. PIASTRINE. PIASTRINOPENIE. POLIGLOBULIE. ERITROCITI. ANEMIE. EMOPATIE NEOPLASTICHE. Leucemia linfoblastica acuta

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LE MALATTIE DEL SANGUE

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Presentation Transcript

  1. LE MALATTIE DEL SANGUE

  2. EMOPATIE NON NEOPLASTICHE LEUCOCITOSI LEUCOCITI LEUCOPENIE CARATTERISTICHE GENERALI PATOGENESI QUADRI SPECIFICI PIASTRINOSI PIASTRINE PIASTRINOPENIE POLIGLOBULIE ERITROCITI ANEMIE

  3. EMOPATIE NEOPLASTICHE Leucemia linfoblastica acuta Leucemia linfatica cronica Leucemia prolinfocitica Leucemia a cellule capellute Linfomi di Hodgkin Linfomi non Hodgkin CELLULE LINFOIDI LEUCOCITI Leucemia mieloide acuta Leucemia mieloide cronica Sindromi mielodisplastiche Mielofibrosi idiopatica CELLULE MIELOIDI PIASTRINE Trombocitemia primitiva Policitemia vera ERITROCITI

  4. APLASIA MIDOLLARE: emocromo EsameRisultatiU.M.Intervallo di riferimento Globuli bianchi (WBC) 1.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi (RBC) 4.0 x106/µL 4.5 - 5.5 Emoglobina (Hb) 8.5 gr/dl 14.0 - 18.0 Ematocrito (Hct) 28.0 % 42.0 - 52.0 MCV 88.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 26.0 pg 27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 - 37.0 Piastrine (Plt) 22.0 x103/µL 130.0 - 400.0 Neutrofili 44.0 % 40.0 - 74.0 Linfociti 45.0 % 20.0 - 45.0 Monociti 8.0 % 3.4 - 9.0 Eosinofili 1.5 % 0.0 - 8.0 Basofili 1.5 % 0.0 - 15.0

  5. APLASIA MIDOLLARE: biopsia midollare

  6. APLASIA MIDOLLARE: biopsia ossea

  7. LEUCEMIA ACUTA: emocromo EsameRisultatiU.M.Intervallo di riferimento Globuli bianchi (WBC) 40.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi (RBC) 4.1 x106/µL 4.5 - 5.5 Emoglobina (Hb) 9.2 gr/dl 14.0 - 18.0 Ematocrito (Hct) 30.0 % 42.0 - 52.0 MCV 88.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 27.0 pg 27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 - 37.0 Piastrine (Plt) 40.0 x103/µL 130.0 - 400.0 Neutrofili 10.0 % 40.0 - 74.0 Linfociti 74.0 % 20.0 - 45.0 Monociti 12.0 % 3.4 - 9.0 Eosinofili 2.5 % 0.0 - 8.0 Basofili 1.5 % 0.0 - 1.5

  8. LEUCEMIA ACUTA: biopsia midollare

  9. LEUCEMIA ACUTA: biopsia ossea

  10. LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA: emocromo EsameRisultatiU.M.Intervallo di riferimento Globuli bianchi (WBC) 56.2 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi (RBC) 4.5 x106/µL 4.5 - 5.5 Emoglobina (Hb) 11.0 gr/dl 14.0 - 18.0 Ematocrito (Hct) 35.0 % 42.0 - 52.0 MCV 84.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 30.0 pg 27.0 - 31.0 MCHC 33.0 gr/dl 32.0 - 37.0 Piastrine (Plt) 420.0 x103/µL 130.0 - 400.0 Neutrofili 73.0 % 40.0 - 74.0 Linfociti 20.0 % 20.0 - 45.0 Monociti 4.0 % 3.4 - 9.0 Eosinofili 1.0 % 0.0 - 8.0 Basofili 2.0 % 0.0 - 1.5

  11. LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA: biopsia midollare

  12. LEUCEMIA MIELOIDE CRONICA: biopsia ossea

  13. LEUCEMIA LINFATICA CRONICA: emocromo EsameRisultatiU.M.Intervallo di riferimento Globuli bianchi (WBC) 25.0 x103/µL 4.0 - 10.8 Globuli rossi (RBC) 4.5 x106/µL 4.5 - 5.5 Emoglobina (Hb) 14.0 gr/dl 14.0 - 18.0 Ematocrito (Hct) 43.0 % 42.0 - 52.0 MCV 86.0 fl 82.0 - 94.0 MCH 33.0 pg 27.0 - 31.0 MCHC 34.0 gr/dl 32.0 - 37.0 Piastrine (Plt) 250.5 x103/µL 130.0 - 400.0 Neutrofili 20.0 % 40.0 - 74.0 Linfociti 76.0 % 20.0 - 45.0 Monociti 4.0 % 3.4 - 9.0 Eosinofili 0.0 % 0.0 - 8.0 Basofili 0.0 % 0.0 - 1.5

  14. LEUCEMIA LINFATICA CRONICA: biopsia midollare

  15. LEUCEMIE ACUTE: Fisiopatologia e Clinica Eziopatogenesi ed epidemiologia

  16. LEUCEMIE ACUTE : FISIOPATOLOGIA • INSUFFICIENZA MIDOLLARE • 2) INFILTRAZIONE DI TESSUTI E ORGANI NON EMOPOIETICI DA PARTE DELLE CELLULE BLASTICHE • 3) LIBERAZIONE DI CITOCHINE

  17. LEUCEMIE ACUTE : CLINICA • INSUFFICENZA MIDOLLARE • INSUFFICIENTE PRODUZIONE ERITROCITI: • astenia, cardiopalmo, dispnea • INFUFFICIENTE PRODUZIONE PIASTRINE: • porpora, ecchimosi, epistassi, gengivorragie, disturbi del visus, ipermenorrea, metroraggie; piu rare: macroematuria, emorragie tratto GI, SNC • INSUFFICIENTE PRODUZIONE LEUCOCITI: • infezioni

  18. LEUCEMIE ACUTE : il DANNO DELLE CELL. LEUCEMICHE

  19. EZIOPATOGENESI DELLE LEUCEMIE ACUTE HSC Fattori ambientali Alterazione genetica progenitore mieloide/linfoide X ? ? altro evento trasformante Condizioni ereditarie cellule leucemiche Cellule mature

  20. FATTORI AMBIENTALI ED EPIDEMIOLOGIA • Radiazioni ionizzanti • Sorgenti elettriche/magnetiche Agenti fisici • Benzene (sigarette, industrie • inquinamento atmosferico) • Altri composti aromatici • Ossido di etilene • Fenossi-erbicidi • Uretano, nitrosamine (sigarette) • Chemioterapia (es. alchilanti) Agenti chimici • HTLV-1 • EBV Agenti virali

  21. CONDIZIONI EREDITARIE • Sindrome Down (trisomia 21) • Sindromi con deficit del “DNA-repair” • (S. Bloom, Anemia di Fanconi) • Sindromi da immunodeficienza • (S. Wiskott Aldrich) Sindromi ereditarie Alto rischio familiare di LA • Monosomia del 7 (SMD) • Mutazione AML-1

  22. LEUCEMIE ACUTE: ALTERAZIONI GENETICHE TRASLOCAZIONI CROMOSOMICHE Promoter/Enhancer Gene cromosoma A Promoter/Enhancer Gene cromosoma B Gene di fusione A/B Promoter/Enhancer I Gene di fusione B/A Promoter/Enhancer Gene del cromosoma A regolato dal promoter del gene del cromosoma B II Promoter/Enhancer

  23. TRASLOCAZIONE AML1-ETO CBFβ AML1 Sito CBF Geni target ETO AML1 NCor Sito CBF HD Geni target

  24. RAS signalling cascade

  25. RAS signalling pathways

  26. DELEZIONI CROMOSOMICHE E MONOSOMIE Alcun tipi di delezioni del 5q Delezione del cromosoma 17 (p13) Monosomia 7 e delezione 7q Perdita di geni oncosoppressori

  27. Cytogenetic Abnormalities in Adult ALL t(9;22) (20-30%) BCR-ABL TAL1 TAL2 LCK TAN1 LYL1 RHOM1 RHOM2 TCL1 HOX11 7q35 (3-5%) Diploid and others (30-40%) TCR b 14q11 (5%) TCR a/ d ? 13q14 Ig k Ig l Ig H 8q24 (1-2%) C-MYC ETV6-AMLI E2A-PBX1 t(12;21) (1-2%) t(1;19) (5-7%) AF4-MLL p16/p14/p15 t(4;11) (5-7%) AF1P AF10 ENL ? ATM MLL 9p21 (7-15%) 11q23 (3-4%) Faderl S, et al. Cancer. 2003;98:1337-1354.

  28. EPIDEMIOLOGIA DELLE LEUCEMIE ACUTE Incidenza: 3,5 casi/100000 abitanti/anno • Ogni età • Età mediana: 60-65 • Esposizione professionale • o iatrogena a Rx, benzene, • chemioterapici LAM • 80% delle LA per età < 15 aa • 20% delle LA nell’adulto • Agenti ambientali (?) • eziologia virale (EBV, HTLV-1) LAL

  29. LEUCEMIE ACUTE: PROCEDURE DIAGNOSTICHE

  30. LEUCEMIE ACUTE DIAGNOSI SANGUE PERIFERICO ASPIRATO MIDOLLARE IMMUNOFENOTIPO (Citofluorimetria) CARIOTIPO BIOLOGIA MOLECOLARE

  31. CITOFLUORIMETRIA

  32. Citofluorimetria: definizione Tecnica multiparametrica che misura le caratteristiche fisiche e/o chimiche di cellule in sospensione all’interno di un fluido di trasporto • Tre componenti: • Fluida • Ottica • Elettronica

  33. Citofluorimetria: principi base Nel citofluorimetro, singole cellule passano allineate attraverso un sistema di rilevazione ottico/elettronico. scatter di luce Parametri misurati fluorescenza

  34. Camera di flusso (componente fluida) Injector Tip Sheath fluid Fluorescence signals Focused laser beam All’interno della camera di flusso, le particelle sono in fila grazie alla differenza di pressione tra il campione ed il fluido di trasporto Il raggio laser, di forma ellittica, è focalizzato in modo da colpire le cellule Al centro del canale di conta=fluido di trasporto

  35. Componente ottica LIGHT SOURCE Un microscopio usa la luce per illuminare le cellule sul vetrino Un citofluorimetro usa una fonte di luce monocromatica da focalizzare sulle cellule Fonte di luce: LASER (Light Amplification by Stimulated Emission Radiation)

  36. Forward scatter Laser FALS Detector Forward scatter = indicatore relativo delle dimensioni cellulari

  37. Side (90o) scatter Laser FALS Detector 90oLS Detector Indicatore relativo della complessità cellulare interna (granuli)

  38. Misura della fluorescenza Le diverse emissioni di colore per diverse sostanze fluorescenti vengono separate da filtri ottici per cui si possono analizzare separatamente le diverse fluorescenze Laser FALS Detector Frequency Fluorescence I fotomoltiplicatori trasformano I segnali luminosi in impulsi elettrici Direttamente proporzionali alla luce Raccolta e gli impulsi vengono elaborati Da un software (conversione analogico-digitale) Fluorescence detector (PMT3, PMT4 etc.)

  39. Misura della fluorescenza: utilità • Le cellule possono essere identificate grazie alle loro molecole di superficie e relativo specifico marker (CD, “cluster di differenziazione”) • Anticorpi monoclonali per specifici antigeni CD possono essere utilizzati per identificare il tipo di cellula • L’anticorpo monoclonale può essere coniugato con un Fluorocromo (FITC, PE, Tandem ECD, PC5) e si può eseguire un test di immunofluorescenza diretta

  40. Citofluorimetria: analisi e output dei dati I segnali luminosi, trasformati in impulsi elettrici, vengono processati da un sistema di conversione analogico-digitale Plot degli eventi in scala grafica Istogramma one-parameter Dot-plots a due dimensioni

  41. Citofluorimetria: selezione della popolazione da analizzare Cluster analysis (software per analisi dei dati): analisi di tutti i marker in relazione a tutti gli eventi analisi di tutte le sottopopolazioni cellulari Gating (filtro dei dati): Forward scatter versus side-scatter CD45 versus side scatter analisi di una singola sottopopolazione per volta

  42. Analisi citofluorimetrica nelle leucemie acute: immunofenotipo • Diagnosi delle leucemie acute • Classificazione delle leucemie acute • Monitoraggio malattia minima residua (sensibilità 10-3 – 10-4)

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