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DNL 细胞制备及抗瘤机制

DNL 细胞制备及抗瘤机制. 徐 骎 口腔临床免疫教研室 口腔肿瘤生物实验室. 第一部分 DNL 细胞的制备. 一、概况. 口腔颌面部肿瘤 —— 综合序列治疗 免疫治疗是重要手段之一 机体细胞免疫主要执行抗肿瘤免疫效应 抗肿瘤的免疫细胞 —— NK ， LAK ， TIL ， DNL 等. NK —— nature killer cells 自然杀伤细胞 LAK —— lymphokine activated killer cells 淋巴因子激活的杀伤细胞 TIL —— tumor infiltrating lymphocyte 肿瘤浸润性淋巴细胞

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DNL 细胞制备及抗瘤机制

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Presentation Transcript

  1. DNL细胞制备及抗瘤机制 徐 骎 口腔临床免疫教研室 口腔肿瘤生物实验室

  2. 第一部分 DNL细胞的制备

  3. 一、概况 • 口腔颌面部肿瘤——综合序列治疗 • 免疫治疗是重要手段之一 • 机体细胞免疫主要执行抗肿瘤免疫效应 • 抗肿瘤的免疫细胞——NK，LAK，TIL，DNL等

  4. NK——nature killer cells 自然杀伤细胞 • LAK——lymphokine activated killer cells 淋巴因子激活的杀伤细胞 • TIL——tumor infiltrating lymphocyte 肿瘤浸润性淋巴细胞 • DNL——draining lymph node lymphocyte 肿瘤引流区淋巴结细胞

  5. TIL与DNL 相同点 1）邻近肿瘤 2）强大的抗肿瘤效应，比LAK细胞高 50-100倍 3）良好的基因治疗载体 不同点 1）来源不同 2）TIL细胞数量少，易污染 DNL细胞数量多

  6. 二、实验目的 1、掌握从淋巴结中分离、培养、扩增 DNL的基本方法 2、明确DNL与TIL的异同点

  7. 三、实验材料 1、材料：口腔鳞癌颈清淋巴结 2、器材：显微镜、离心机、超净台、培养皿、 离心管、吸管、培养瓶、尼龙网（200目） 3、试剂：培养液（RPMI1640）、Hank’s液（含 1000u/ml青、链霉素，1000u/ml两性霉素）

  8. 四、实验内容 1、DNL的分离 淋巴结 酶消化法—— 0.5%胶原酶Ⅱ、0.02%DNA酶、0.05%透明质酸酶Ⅳ 机械法 DNL 密度梯度离心

  9. 四、实验内容 2、DNL的培养和扩增 1）培养液——RPMI1640+rIL-2 2000u/ml 2）培养条件——DNL 6×106/ml，37℃， 5%CO2 3）3-5天换液，每次换液加入rIL-2 2000 u/ml，细胞浓度保持在6×106/ml

  10. 细胞计数 • 血细胞计数器：手工计数细胞 • Coulter计数仪：自动计数

  11. 10 9 10 12 [（10+9+10+12）/4]*104=10.25*104/ml(稀释倍数)

  12. 第二部分 DNL抗瘤机制

  13. 以往的研究表明： DNL分泌穿孔素 肿瘤细胞通透性增加 最新研究证实： CTL分泌穿孔素和颗粒酶A（granzyme A） granzyme A激活下游信号传导通路 肿瘤细胞凋亡

  14. DNL体外杀伤口腔鳞癌细胞的作用观察 ——MTT法 原理： 1、MTT——二甲基噻唑二苯基四唑溴盐 2、活细胞线粒体脱氢酶 MTT 结晶形成少，反映活细胞少，杀伤肿瘤细胞作用强 不可溶性紫色甲臜 DMSO溶解，检测OD值

  15. MTT结晶

  16. MTT结晶

  17. DMSO溶解结晶

  18. 小 结 DNL与TIL异同点 DNL制备方法 DNL抗肿瘤机制

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