Sesión 20 martes 14 de Octubre: Fundamentos de la Neurobiología I. Dr. Osvaldo Alvarez.

1. Sesión 20 martes 14 de Octubre: Fundamentos de la Neurobiología I. Dr. Osvaldo Alvarez. Elementos básicos de electricidad aplicados a membranas biológicas. Potencial de membrana y su dependencia de las especies de iones. Ecuación de Nernst –Plank. La ecuación Goldman-Hodgkin-Katz para el potencial de reposo Potencial de acción; curso temporal y su descripción macroscópica (experimentos de Hodgkin y Huxley de 1952). http://einstein.ciencias.uchile.cl Curso Troncal 2008.

2. Conducción de la electricidad en soluciones de electrolitos

3. Pregunta.¿Cuantas moléculas atraviesan la ventana durante un tiempo t? A vt Hay n moléculas por m3. La ventana tiene un área A m2. Las moléculas viajan a una velocidad de v ms-1

4. Pregunta.¿Cuantas moléculas atraviesan la ventana durante un tiempo t? A vt

5. Pregunta.¿Cuantas moléculas atraviesan la ventana durante un tiempo t? A vt Las moléculas contenidas en volumen Avt

6. Respuesta. Las contenidas en el volumen Avt , que son nAvt. n = moléculas por unidad de volumen (m-3) A = Área de la ventana ( m2 ) v = velocidad de las partículas ( m s-1 ) t = intervalo de tiempo ( s )

7. Número de moléculas que atraviesan la ventana en un tiempo t es nAvt. Número de moles que atraviesan la ventana en un tiempo t es nAvt/N = cAvt (mol). N= número de Avogadro, ( mol-1 ) c es la concentración en moles m-3 Flujo = J = Número de moles que pasan la ventana por unidad de área y por unidad de tiempo = cv (mol m-2 s-1).

8. Movimiento en un medio viscoso Velocidad = movilidad ·fuerza movilidad = velocidad por unidad de fuerza ¿Cuál es la fuerza que impulsa la electrodifusión?

9. Energía internaE = q - w = energía que entra al sistema en forma de calor menos la que sale del sistema en forma de trabajo. ( joule) EntalpíaH = E + PV = E + producto presión volumen EntropíaS = qrev / T Cambio de Entropía = calor absorbido en un proceso reversible / temperatura. Sus unidades son joule/ kelvin Energía LibreG = H - TS Definición de Energía libre.

10. Energía libre en sistemas abiertos. j= potencial químico el componente j. Cambio de la Energía libre del sistema que se produce al agregar 1 mol de componente j, manteniendo constantes T, P y la cantidad de todos los otros componentes. ( joule / mol ).

11. Potencial químico standard del compuesto j, oj es el cambio de Energía libre asociado con agregar 1 mol del compuesto j, estando en su estado de referencia. Es decir a una concentración = 1. ¿Cuál es el cambio de Energía libre asociado con agregar dnj moles estando a una concentración cualquiera? ? ¿Qué relación hay entre el potencial químico y la concentración?

12. Examinemos la termodiámica de la un cambio de concentración. Inicialm1 cajas disponibles Finalm2 cajas disponibles ¿Qué hace que las moléculas se difundan ocupando todo el volumen? El estado final tiene más entropía que el inicial. Ecuación de Boltzmann para la entropía. k es la constante de Boltzmann y W la probabilidad estadística del sistema. W es el número de maneras distintas que se puede arreglar internamente el sistema.

13. Cálculo de la entropía. Las cajas son todas del mismo volumen. Se podría poner las N moléculas en una sola caja. Inicialm1 cajas disponibles Finalm2 cajas disponibles Estado inicial: vamos a poner N moléculas en m1 cajas W ¿De cuántas maneras puedo poner la primera molécula? m1 ¿De cuántas maneras puedo poner la segunda molécula? m1 ¿De cuántas maneras puedo poner las dos primeras moléculas? m12 ¿De cuántas maneras puedo poner N moléculas para el estado inicial? m1N ¿De cuántas maneras puedo poner N moléculas para el estado final? m2N

14. Cálculo de la entropía. Inicialm1 cajas disponibles Finalm2 cajas disponibles Para 1 mol de soluto R = kN = 8.3143 joulemol-1K-1

15. El número de moles de soluto no cambia cuando se el soluto se difunde desde una condición inicial ci Vi hasta una final cf Vf. El cambio de entropía asociado al cambio de concentración es: El cambio de energía libre asociado al cambio de concentración es (*): Y si cf = 1 entonces: (*) G = H - TS. Suponemos soluciones ideales: H = 0 para la difusión.

16. Potencial químico standard del compuesto j, oj es el cambio de energía libre asociado con agregar 1 mol del compuesto j, estando en su estado de referencia. Es decir a una concentración = 1. ¿Cuál es el cambio de energía libre asociado con agregar dnj moles estando a una concentración cualquiera? concentración = cj concentración = cj dnj dnj concentración = 1 concentración = 1

17. Si el componente j es un ion, es decir lleva una carga eléctrica zeo, tenemos que considerar el trabajo eléctrico de traer el ion hasta la solución Se define como potencial eléctrico en un punto del espacio, , como el “Trabajo de traer una carga eléctrica unitaria desde el infinito hasta el punto”. Se mide en volt ( joule/coulomb ). El trabajo para dn moles de iones de valencia z es zFdn, donde Fes el número de Faraday (96500 coulomb/mol).

18. Volvemos al movimiento de las moléculas en un medio viscoso. Flujo = concentración  movilidad  fuerza ¿Cuál es la fuerza que impulsa la electrodifusión? Es menos el gradiente de potencial químico.

19. Electrodifusión en una sola dimensión: Ecuación de Nernst-Planck

20. Membrana selectiva, deja entrar K+ pero no Cl-. KCl c’ KCl c’’ JK JCl JCl = 0 ( Condición impuesta en el planteamiento) JK= ? implica transporte de carga eléctrica. movimiento de carga eléctrica. ¿Qué pasa con el potencial eléctrico?

21. JK La capacidad eléctrica de las membranas biológicas es 1 F/cm2 KCl c’ KCl c’’ - + Las dos soluciones separadas por la membrana constituyen un condensador eléctrico. Al transportar carga se genera una diferencia de potencial eléctrico. La relación entre carga q y potencial  es la capacidad eléctrica C del condensador, que se mide en Farad (coulomb/volt).

22. JK c’ ’ c’’ ’’ - + A medida que pasa el tiempo la concentración c’ disminuye y la concentración c’’ aumenta; el potencial ’ disminuye y el potencial ’’aumenta. Esto continúa hasta que las concentraciones y potenciales no cambien más. Se llega a un estado de equilibrio en que JK = 0.

23. Este paréntesis se hace 0. Ec. de Nernst RT/F = 25 mV a 20oC

24. c’ ’ c’’ ’’ - + Ec. de Nernst ¿Cómo se mide este potencial?¿Cómo se conectan las soluciones a los cables de los instrumentos eléctrónicos? Usando electrodos, por ejemplo el electrodo de plata/plata clorurada. http://en.wikipedia.org/wiki/Silver_Chloride_Electrode

25. Alambre de Ag clorurado Alambre de Ag clorurado Electrodo Tubo de ensayo con KCl 1M Si llega un electrón por el alambre de plata, se combina con un Ag+ y se libera un ion Cl- del AgCl. Ag Ag+ + e- Si se va un electrón por el alambre de plata, se libera un Ag+ que se combina con un ion Cl- para formar AgCl. Ag+ + Cl- AgCl http://en.wikipedia.org/wiki/Silver_Chloride_Electrode

26. Potenciales de unión líquida. Zona de mezcla JK JCl KCl’ KCl’’ JK= JCl no hay transporte de carga eléctrica. Esta es la condición que implica una diferencia de potencial que no cambia en el tiempo.

27. En un punto en la zona de mezcla: (Electroneutralidad) Integrando entre los bordes de la zona de mezcla

28. Conductividad específica molar a dilución infinita El potencial de unión líquida que se desarrolla entre dos soluciones de KCl es despreciable porque las movilidades de K+ y Cl- son muy parecidas Robinson y Stokes. Electrolyte solutions. Butterwoths. London 2ª edicion 1959.

29. Construcción de un electrodo Alambre de Ag clorurado Tubo de ensayo con KCl 1M Electrodo Puente de agar-KCl 1M http://en.wikipedia.org/wiki/Silver_Chloride_Electrode

30. Ecuación de Henderson del potencial de juntura para mezclas más complejas. Henderson.xls En http://einstein.ciencias.uchile.cl http://www.moleculardevices.com/pdfs/pCLAMP_AppNote_LJP_Corrections.pdf

31. c’ ’ c’’ ’’ Ec. de Nernst.Deducida para corriente = 0 - + V ¿Cómo se mide este potencial sin tomar corriente? Se construye un vólmetro que no tome corriente usando amplificadores operacionales. http://en.wikipedia.org/wiki/Operational_amplifierhttp://en.wikipedia.org/wiki/Operational_amplifier_applications

32. Midiendo voltaje tomando corriente V2 R1 V1 R2 Midiendo voltaje sin tomar corriente V1 R1 http://en.wikipedia.org/wiki/Field-effect_transistorhttp://en.wikipedia.org/wiki/Operational_amplifierhttp://en.wikipedia.org/wiki/Operational_amplifier_applications

33. Amplificador operacional con realimentación negativa V1 R1 Si A >> 1 Si A >> 1

34. Integración de la ecuación de Nernst-Plank

35. Coeficiente de Difusión, D. Ecuación de Einstein: Unidades del Coeficiente de Difusión: Potencial reducido, adimensional

36. Integración por partes Multiplico ambos lados por ezU Recordar esto Aplicar a:

37. ? ? Recordar esto

38. Para integrar el lado izquierdo necesitamos conocer U en función de x. Recordar esto

39. Suposición de Goldman: el campo eléctrico es constante en el interior de la membrana ( dU/dx = constante). intracelular membrana extracelular + J U 0 U extracelular U intracelular - x 0  En esta ecuación  es el espesor de la membrana. Vamos a integrar la ecuación de Nernst-Planck entre los bordes de la membrana. Condiciones de borde: Borde Intracelular x = 0, c(0) = c’int, U(0)=Um Borde Extracelular x = , c() = c’ext, U()= 0.

40. En estado estacionario, el flujo, J, es igual en todos los puntos de la membrana.La ecuación de Nernst-Planck en punto x en el interior de la membrana. Separo las variables . Uso la suposición de campo constante . Integro desde x = 0 hasta x =  .

41. Estamos integrando la ecuación de Nernst-Planck entre los bordes de la membrana. Condiciones de borde: Borde Intracelular x = 0, c(0) = c’int, U(0)=Um Borde Extracelular x = , c() = c’ext, U()= 0.

42. Las concentraciones en los bordes interno y externo de la membrana, c’int y c’ext, se relacionan con las concentraciones en las soluciones internas y externas, c y cextmediante el coeficiente de partición . Definición de la permeabilidad de la membrana, P. Esta es la ecuación de flujo de Goldman - Hodgkin - Katz

43. ¿Cuánto es el flujo para Um 0? Otra manera de verlo: Usar ex -1  x para x 0

44. JNa JK JCl Na+K+Cl- Na+K+Cl- Potencial eléctrico de una membrana permeable a Na, K y Cl, que separa soluciones que contienen estos tres iones. Condición de potencial eléctrico constante es corriente cero INa + IK + Icl = 0. Condición de corriente cero es JNa + JK - Jcl = 0.

45. Multiplica el flujo de Cl- por eUm /eUm Multiplica el flujo de Cl- por -1/-1 para dejar todas las expresiones con denominador común JNa + JK - JCl = 0

46. La suma tiene que ser cero La ecuación Goldman-Hodgkin-Katz para el potencial de reposo

47. La densidad de corriente llevada por un ion. La densidad de corriente llevada por un ion.

48. IK INa Vm, mV Las curvas I/V para K y Na según GHK y las concentraciones intra y extracelulares en el axón de jibia

49. Caso límite de la ecuación GHK: cin cex, UNernst = 0 La ecuación GHK se reduce a la ley de Ohm. Para cin cex Admitiendo estas aproximaciones:

50. Iones en una célula de jibia. Na+ 50 mMK+ 440 mMCl- ? in -60 mV Na+ 440 mMK+ 10 mMCl- 450 mM ex 0 mV Si la membrana es permeable al ion cloruro y no hay una bomba de cloruro, esperamos que el cloruro esté en equilibrio. La concentración la podemos calcular usando la ecuación de Nernst. Cl = m El experimento confirma que la concentración intracelular de cloruro es efectivamente 41 mM.