Actualités virologiques des tests de dépistage VIH

1. Actualités virologiques des tests de dépistage VIH Séminaire Départemental sur le dépistage de l’infection à VIH dans les Alpes-maritimes 26 Novembre 2007

2. Évolution de la situation IP : début des HAART AZT Inhibiteur de fusion Autres inhibiteurs De RT Anti Intégrases Anti CCR5 1985 1996 2007 > 73% décès > 65 % survivants Début du dépistage Pas de traitement Intérêt = prévention Avec l’évolution des traitements et des techniques Intérêt = individuel par une prise en charge précoce

3. Évolution de la situation Le cadre du dépistage a été organisé • pour apporter un soutien lors du rendu du résultat • pour délivrer des messages de prévention Counseling avant et après la réalisation du test Faut- il changer le paradigme du dépistage ?

4. Pour mémoire • Des succès : • Sécurité transfusionnelle • Prévention de la transmission mère-enfant • Prévention de la transmission du VIH au cours des soins • Prévention de la transmission par partage de matériel d’injection parmi les usagers de drogue • Mais… • Risque d’un « optimisme thérapeutique » conduisant à un relâchement de la prévention • Augmentation des pratiques sexuelles à risque chez les homosexuels • Retard au dépistage

5. En 2005 et 2006, 8 découvertes de SIDA sur 10 surviennent chez des personnes non traitées Traités Dépistés, non traités Non dépistés Accès aux soins et au dépistage Année de diagnostic du SIDA Source: INVS 31/12/2006

6. Surveillance virologique liée à la déclaration obligatoire de séropositivité F. Barin

7. Techniques disponibles Réalisation du dépistage Etat des lieux du dépistage au laboratoire

8. Techniques disponibles au laboratoire • Tests de dépistage: ELISA • Test de confirmation : Western Blot ou test apparenté (immunoblot) • Tests rapides

9. Technique ELISA • Méthode Immunoenzymatique: permet la mise en évidence des anticorps spécifiques anti-VIH présents dans le sang périphérique • Prélèvement: sérum • Durée de la technique: 30mn à 2h.30 selon les techniques • Technique en microplaque automatisable ou sur automate gérable en « unitaire » • Lecture des résultats : mesure spectrophotométrique • Plusieurs générations de tests ELISA • 1° génération : lysat viral purifié • 2° et 3° générations: protéines recombinantes ou de synthèse Meilleure spécificité • 4° génération: détection combinée de l’Antigène P24 = protéine du HIV1 correspondant aux particules et aux protéines virales libres présentes dans le sang périphérique

10. Plaque ELISA

11. Automate de sérologie « Architect »

12. Performances des tests ELISA homologués • Détectent les AC anti-VIH1 et anti-VIH2 • Les antigènes utilisés pour fabriquer ces tests sont les plus représentatifs possibles de l’ensemble des souches virales en circulation • Très bonne sensibilité: 100% chez les sujets en phase chronique d’infection • Spécificité: 98,75 à 99,75 % • toute technique ELISA peut produire des réactions faussement positives

13. Tests rapides • Tests immunologiques à lecture visuelle réalisables sans appareillage sophistiqué • Prélèvement: sérum, plasma, sang total test rapide sur la salive: sensibilité moins bonne • Réponse en 15 à 35 mn • Détectent les Anticorps anti-VIH1 et anti-VIH2 • Réactions non spécifiques possibles, dues à d’autres facteurs que l’infection VIH • Moindre sensibilité que les tests ELISA au moment de la primo-infection

14. Tests rapides Bande témoin de la réaction Bande HIV Test Détermine Négatif Positif

15. Test de confirmation Confirme la spécificité antigénique des anticorps détectés en ELISA Le test utilisé classiquement est leWestern Blot On peut également utiliser un immunoblot avec des protéines recombinantes et des peptides synthétiques Bandelette de nitrocellulose sur laquelle les principaux antigènes viraux sont séparés et disposés en bande Lorsque les AC correspondants sont présents dans le sérum: réaction Ag/Ac et visualisation de la bande Des critères de positivité ont été définis (OMS)

16. Western Blot HIV2 HIV1

17. Immunoblot pouvant remplacer le Western Blot: Test de confirmation et de différenciation HIV1 HIV2 Bandes témoins de la réaction Bandes spécifiques du VIH1 Bandes spécifiques du VIH2

18. Etat des lieux du dépistage au laboratoire Techniques disponibles Réalisation du dépistage

19. Évolution des marqueurs virologiques au cours de la primo-infection Anticorps ARN plasmatique Seuil de détection des marqueurs Antigène P24 J0 (contage) Temps en jours J12 J14-15 J20-21

20. Délai de positivité des différentes techniques J25-26: AC anti VIH par immunoblot par test rapide J 20-21: AC antiVIH par ELISA = ELISA 4° génération J15-16: pic d’Ag P24 J12-14: ARN plasmatique = Charge Virale par technique de Biologie moléculaire Fenêtre silencieuse J0 : contage temps

21. SOMMAIRE

22. Diagnostic d’infection VIH chez l’adulte Consentement obligatoire, confidentialité absolue Résultat rendu par un médecin recommandé • Première étape : dépistage • 2 tests effectués en parallèle : au moins un des 2 doit être un ELISA ELISA de 4° génération les plus couramment utilisés : Détection des AC anti-VIH1, anti-VIH2 et de l’Antigène P24 En cas de résultat positif ou discordant des 2 tests : • Deuxième étape : test de confirmation

23. Au total : 2 TESTS (dont au moins 1 ELISA AC + Ag) NégatifsPositifs ou discordants Résultat test de confirmation : Immunoblot Négatif positifindéterminé séropositivité probable- Contrôle sur un 2° prélèvement 15 jours plus tard confirmation sur 2° prélèvement = 2 tests ELISA - Charge virale si suspicion de primoinfection

24. Place de la Charge Virale dans le dépistage • Diagnostic moléculaire en transfusion sanguine • Charge Virale et DNA proviral pour le diagnostic chez l’enfant né de mère séro-positive • Pas d’utilisation de techniques de Charge Virale pour le diagnostic d’infection VIH chez l’adulte Sauf cas particuliers de suspicion de primo-infection (après discussions avec le médecin prescripteur)

25. Pratique des tests de dépistage à réévaluer

26. Pratique des tests de dépistage à réévaluer • Structures où réaliser le dépistage ? • Un seul test de dépistage ? • Tests rapides • Doivent être évalués surtout pour une utilisation comme test unique • Encadrement • Un test de dépistage positif doit être confirmé par un Western Blot • Détermination sur un nouveau prélèvement

27. Le problème particulier des auto-tests • Utilisation des tests rapides n’entraîne pas l’approbation de leur utilisation en auto-test (« home-tests ») • Home-Tests • Tests par auto-prélèvement à domicile et analyse en laboratoire • Tests par auto-prélèvement à domicile et auto-analyse à domicile • Problèmes liés à l’utilisation de home-tests (auto-analyse) • Erreurs de manipulation • Solitude face au résultat • Manque d’explication du résultat • Démarche de soins • Données épidémiologiques • Risques de dérives ? Mais les auto-tests existent et sont achetables sur Internet….

28. Le problème particulier des auto-tests 21.95 Euros

29. Au total, le point de vue du virologue sur l’évolution de la pratique du dépistage Limites de lastratégie actuelle Il doit y avoir une évolution Mais…. • Encadrement reste nécessaire • Évaluer les tests rapides surtout pour une utilisation comme test unique de dépistage • Les tests rapides sont moins sensibles que l’ELISA en période de primo-infection • Un test de confirmation par Immunoblot est nécessaire en cas de test de dépistage positif • Testsur un nouveau prélèvement