Citogenetica ii
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Citogenetica II. La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l ’ analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith. CML, Leucemia Mieloide Cronica.

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Presentation Transcript
Citogenetica ii
Citogenetica II

La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei cromosomi al microscopio. Ferguson-Smith

By NA


Cml leucemia mieloide cronica
CML, Leucemia Mieloide Cronica

  • La CML è stata la prima malattia neoplastica dell’uomo in cui una specifica anomalia del cariotipo, il cromosoma Philadelphia (Ph), sia stata associata alla insorgenza della leucemia.

By NA


Cml leucemia mieloide cronica1
CML, Leucemia Mieloide Cronica

ABL

ABL/BCR

BCR/ABL

BCR

Nel 95% dei casi di CML

cromosoma non normale

chr Philadelphia (1961)

Indagini FISH E MOLECOLARI

Traslocazione reciproca braccio lungo chr.9 e il braccio lungo chr.22: t(9;22)(q34;q11).

  • SI FORMANO DUE GENI DI FUSIONE:

  • ABL-BCR su DER9 (nessuna proteina prodotta)

  • BCR-ABL su Ph (proteina di fusione coinvolta nella proliferazone cellulare)

By NA




Fish nella cml 4 spot e colocalizzazione
FISH nella CML 4 spote colocalizzazione

By NA


Cml esempi
CML esempi

By NA


Cml esempi1
CML esempi

By NA


Aml leucemia mieloide acuta
AML, Leucemia Mieloide Acuta

INVERSIONE inv(16)(p13;q22) (CBFB-MYH11)

By NA



Traslocazioni complesse in aml
Traslocazioni complesse in AML

Esempio dell’uso di librerie totali per evidenziare riarrangiamenti

t(8;13;14)

By NA


Leucemia acuta promielocitica apl geni coinvolti pml rar
Leucemia Acuta Promielocitica (APL) geni coinvolti PML-RAR)

La traslocazione t(15;17)(q22;q21) è associata clinicamente alla leucemia acuta promielocitica (APL)

In verde chr17

In rosso chr15

15 der15 der17 17

By NA


Leucemia acuta promielocitica apl
Leucemia Acuta Promielocitica (APL)

La FISH permette di trovare traslocazioni criptiche (quelle che non si vedono dall’analisi del cariotipo)

t(15;17)(q22;q21)

15 der15 der17 17

By NA


Linfomi non hodgkin
Linfomi Non Hodgkin

t(8;14)

by GP&NA

By NA


Linfomi non hodgkin1
Linfomi Non Hodgkin

TRASLOCAZIONE t(14;18)(q32;q21)

catene pesanti immunoglobuline

oncogene

BCL2

By NA


Caso i
Caso I

  • Paziente 38enne all’inizio della gravidanza decide di ricorrere alla diagnosi prenatale sotto indicazione del consulente genetico che l’ha informata dell’aumentato rischio di aneuploidie cromosomiche fetali nelle madri con età avanzata.

  • Due precedenti gravidanze dalle quali ha avuto due figli fenotipicamente normali.

  • Assenza di aborti spontanei.

traslocazione reciproca t (13;19) nel feto

traslocazione reciproca t (13;19) nel padre

By NA


Procedura diagnostica
Procedura diagnostica

  • ANALISI CITOGENETICA:

  • campione di liquido amniotico aspirato con l’amniocentesi;

  • allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo;

traslocazione reciproca t (13;19) nel feto

By NA


Procedura diagnostica1
Procedura diagnostica

  • campione di sangue periferico di entrambi i genitori ;

  • allestimento del preparato citogenetico e analisi del cariotipo;

traslocazione reciproca

t(13;19) nel padre

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish i

13

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11.2

12

13

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13.3

13.2

13.1

12

12

13.1

13.2

13.3

13.4

13.3

13.2

13.1

12

12

13.1

13.2

13.3

13.4

13

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13.3

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19

Evidenziare i breakpoints mediante la FISH I

19

13

der(13)

der(19)

By NA



Evidenziare i breakpoints mediante la fish iii
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH III

Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.

individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo.

per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi.

Cy3

Cy5

Fluor-X

By NA



Evidenziare i breakpoints mediante la fish v
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH V

RP11-84C17

chr19:7,777,647-777,8013

RP11-298C17

chr19:9,998,865-10,195,739

RP11-19I2

chr19:11,643,368-11,816,255

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish vi

der(19)

chr 19

Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VI

chr19:7,163,629-7,377,296

der(13)

chr 19

chr19:6,726,912-6,917,544

Il breakpoint sul cromosoma 19 è situato tra la sonda prossimale RP11-52O9 e la sonda distale RP11-717H11.

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish vii

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12

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Evidenziare i breakpoints mediante la FISH VII

RP-1152O9

RP11-717H11

RP11-717H11

19

RP-1152O9

der(19)

der(13)

By NA




Evidenziare i breakpoints mediante la fish x
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH X

La sonda RP11-976L2 emette fluorescenza sul cromosoma 13 e sul der(13) (freccia rossa).

La sonda RP11-1140C18 emette invece tre segnali : sul cromosoma 13, sul der(19) (freccia verde) e sul der(13) (freccia verde).

IL BREAKPOINT SUL CROMOSOMA 13 CADE ALL’INTERNO DEL BAC 1140C18

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish xi

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Evidenziare i breakpoints mediante la FISH XI

RP11-1140C18

RP11-1140C18

RP11-976L2

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH

Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.

individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo.

per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi.

Cy3

Cy5

Fluor-X

By NA


Evidenziare i breakpoints mediante la fish1
Evidenziare i breakpoints mediante la FISH

Dopo aver individuato la regione sul cromosoma 13 e sul 19 presumibilmente coinvolta nella traslocazione, selezionare i corrispondenti BAC da utilizzare per la FISH.

individuare i BAC che vengono tagliati dal breakpoint; in questo caso dovrei avere tre segnali: uno sul cromosoma normale e un segnale su ciascun derivativo.

per abbreviare i tempi si puo’ eseguire una coibridazione marcando contemporaneamente due o tre sonde di DNA con diversi fluorocromi.

Cy3

Cy5

Fluor-X

By NA