Vitrifikacija jajnih stanica
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 20

Vitrifikacija jajnih stanica PowerPoint PPT Presentation


  • 112 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Vitrifikacija jajnih stanica. Tamara Tramišak Milaković KBC Rijeka. Brrr. VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god. Što je vitrifikacija ?.

Download Presentation

Vitrifikacija jajnih stanica

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Vitrifikacija jajnih stanica

Tamara Tramišak Milaković

KBC Rijeka

Brrr...

VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem

Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god.


Što je vitrifikacija ?

Vitrifikacija je revolucionarna tehnika zamrzavanja koja kombinira visoke koncentracije krioprotektanta s vrlo brzim hlađenjem... Pri čemu jajna stanica i okolna otopina postaju amorfna struktura slična staklu bez stvaranja kristala leda.

(Herrero i sur. 2011)


Kratka povijest vitrifikacije...

KRIOPROTEKTANT ..... 1898. osnovna istraživanja o fizikalnom aspektu vitrifikacije, glicerol (Tammann)

VITRIFIKACIJA .... 1937. pionirski rad - vitrifikacija kao metoda zamrzavanja (Luyet)

ERITROCITI .... 1968. prva uspješna vitrifikacija eritrocita s krioprotektantom glicerolom (Rapatz i Luyet)

ZAMETCI ... 1985. prva uspješna vitrifikacija mišjih zametaka, osnova vitrifikacije u embriologiji (Rall i Fahy)

TRUDNOĆA I POROD.... 1999. iz VITRIFICIRANE humane oocite

(Kuleshova i sur. 1999)


Kliničke indikacije za zamrzavanje jajnih stanica

očuvanje plodnosti kod onkoloških pacijentica

privremeno nepostojanje spermija partnera

etički razlozi ili zakonska regulativa

donacija jajnih stanica

odgođeno majčinstvo


Zašto je teško zamrznuti/

vitrificirati jajnu stanicu ?

  • Plazma membrana slabije permeabilna za vodu i

  • krioprotektante

  • - Diobeno vreteno osjetljivo na promjene temperature

  • Dehidracija i rehidracija može narušiti segregaciju

  • kromosoma

  • Povećani rizik od starenja oocite zbog procesa zamrzavanja

  • Zamrzavanje narušava fiziologiju jajne stanice

Rienzi i sur. 2010.


Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Sporo zamrzavanje

Vitrifikacija

  • Potrebni su programirani

  • krio-aparati

  • Traje nekoliko sati

  • Niske koncentracije

  • permeabilnih krioprotektanata

  • Seeding

  • Nije potrebna posebna oprema

  • Traje cca. 30 minuta

  • Više koncentracije krioprotektanta

  • Veća brzina hlađenja

  • Veća brzina otapanja

  • Zahtijeva puno iskustva

Saragusty i Arav 2011


Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

  • Smith i suradnici (2010) prospektivno istraživanje – usporedba sporog zamrzavanja i vitrifikacije. Preživljavanje oocita, oplodnja i učestalost kliničkih trudnoća veći nakon vitrifikacije (75% vs. 65%; 77% vs.67%; 38% vs. 13%)

  • Kim i suradnici (2010) nakon vitrifikacije jajnih stanica plodnih žena postiže se visoka uspješnost trudnoća (80%)

  • Ciotti i sur. (2009) repolimerizacija diobenog vretena brža je nakon vitrifikacije

  • Molinari i sur. (2010) tijekom sporog zamrzavanja zona pelucida gubi svoju strukturnu organizaciju i postaje tanja, a diobeno vreteno postaje manje organizirano


Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Bromfield i suradnici (2009) sporo zamrzavanje dovodi do rastavljanja diobenog vretena

Grifo i Noves (2010) 23 pacijentice; uspješnost oplodnje i stvaranje blastocisti veće je nakon sporog zamrzavanja (oplodnja 84% vs. 75%, P=0,04; stvaranje blastocisti 52% vs. 35%, P=0,02)

Martinez-Bourgos i sur. (2011) randomizirano istraživanje, sestrinske donorske jajne stanice, veće preživljavanje i brži povratak diobenog vretena nakon vitrifikacije (86,8% vs. 50%; 93,5% vs. 72%)

Chen i Yang (2009) preživljavanje nakon vitrifikacije je veće, povratak diobenog vretena brži (2h)


Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Borini i sur. (2010) multicentrično istraživanje sporog zamrzavanja, 2209 svježih ciklusa, 940 sekundarnih ciklusa, sporo zamrznute jajne stanice imale lošiji ishod nego svježi ciklusi

Rienzi i sur. (2010) 224 sestrinske oocite, nema razlike između svježih i vitrificiranih jajnih stanica u uspješnosti oplodnje ili razvoju zametaka

Magli i sur. (2010) sporo zamrzavanje u odnosu na vitrifikaciju ima negativan učinak na potencijal jajnih stanica


Osnove vitrifikacije

Za uspješnu vitirifkaciju potrebni su:

krioprotektant,

odgovarajuća brzina hlađenja,

dovoljno niska temperatura skladištenja,

odgovarajuća brzina otapanja


Zašto je jajnu stanicu teško zamrznuti?

Jedna od najvećih stanica u tijelu sisavaca

Sferični oblik - manji omjer površine i volumena od drugih stanica nepravilnog oblika

Ima manju permeabilnost za krioprotektante u usporedbi sa zigotama i zametcima

Osjetljive na fizičko/kemijska oštećenja

(Kuwayama 2005)


Uloga krioprotektanta

  • Započinje proces dehidracije stanice

  • Smanjuje točku ledišta otopine

  • Stvara vodikove veze s molekulama vode eliminirajući na taj način stvaranje leda

  • Smanjuje negativan učinak uzrokovan visokim koncentracijama soli

  • Saharoza ne ulazi u stanicu, ali uzrokuje dehidraciju stanice promjenom osmotskog tlaka


Nosači (otvoreni sustav)

Cryoleaf

(Chian i sur. 2005)

Open pulled straws (OPS) (Vajta i sur. 1998)

Cryoloop

(Lane i sur. 1999)

Electron microscopic copper grids (Steponkus i sur. 1990)

Thin glass surface (Arav 1992)

Cryotop

(Kuwayama i Kato 2000)

Hemi-straw system

(Vanderzwalmen i sur. 2000)


Nosači (zatvoreni sustav)

Cryotip

(Kuwayama i sur. 2005)

Closed pulled straw

(Chen i sur. 2001)

Cryotop CL

(


Sigurnost vitrifikacije

Postoji rizik od unakrsne kontaminacije uzorka preko tekućeg dušika. To se može izbjeći:

1) upotrebom nosača zatvorenog sustava

2) pohranom u parama LN2 (istraživanja su u tijeku)

3) korištenjem tekućeg dušika steriliziranog UV-zrakama


Kako odabrati jajnu stanicu za vitrifikaciju?

Samo snažne i zdrave oocite biti će u stanju izaći na kraj sa izlaganjem krioprotektantima, mehaničkim i osmotskim stresom, promjenama temperature i medija, sa ponovnim oblikovanjem diobenog vretena i staničnom trodimenzionalnom organizacijom u kratkom vremenskom periodu

Dismorfične jajne stanice (npr. akumulacija velikih vakuola, jako granulirana citoplazma ili vrlo veliko polarno tjelešce) su indikator narušene distribucije staničnih komponenti (Ubaldi i Rienzi 2008)


Postupci vitirifikacije jajnih stanica učinjeni od 2009.g.

do 31.07. 2011.g. na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka


Ishodi sekundarnih ciklusa učinjenih u 2010. i prvoj polovici 2011. godine na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka

1 – % preživjelih jajnih stanica u odnosu na broj otopljenih jajnih st.

2 - % oplođenih jajnih stanica u odnosu na broj preživjelih jajnih st.

3 - % zametaka u ET u odnosu na broj oplođenih jajnih st.

4 - % prijenosa zametaka u odnosu na broj sekundarnih ciklusa

5 - % kliničkih trudnoća u odnosu na broj prijenosa zametaka


Hvala...


  • Login