Vitrifikacija jajnih stanica
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 20

Vitrifikacija jajnih stanica PowerPoint PPT Presentation


  • 104 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

Vitrifikacija jajnih stanica. Tamara Tramišak Milaković KBC Rijeka. Brrr. VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god. Što je vitrifikacija ?.

Download Presentation

Vitrifikacija jajnih stanica

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


Vitrifikacija jajnih stanica

Vitrifikacija jajnih stanica

Tamara Tramišak Milaković

KBC Rijeka

Brrr...

VIII hrvatski kongres o ginekološkoj endokrinologiji, humanoj reprodukciji i menopauzi s međunarodnim sudjelovanjem

Hotel Neptun-Istra, Brijuni, 8. – 11.09.2011.god.


To je vitrifikacija

Što je vitrifikacija ?

Vitrifikacija je revolucionarna tehnika zamrzavanja koja kombinira visoke koncentracije krioprotektanta s vrlo brzim hlađenjem... Pri čemu jajna stanica i okolna otopina postaju amorfna struktura slična staklu bez stvaranja kristala leda.

(Herrero i sur. 2011)


Kratka povijest vitrifikacije

Kratka povijest vitrifikacije...

KRIOPROTEKTANT ..... 1898. osnovna istraživanja o fizikalnom aspektu vitrifikacije, glicerol (Tammann)

VITRIFIKACIJA .... 1937. pionirski rad - vitrifikacija kao metoda zamrzavanja (Luyet)

ERITROCITI .... 1968. prva uspješna vitrifikacija eritrocita s krioprotektantom glicerolom (Rapatz i Luyet)

ZAMETCI ... 1985. prva uspješna vitrifikacija mišjih zametaka, osnova vitrifikacije u embriologiji (Rall i Fahy)

TRUDNOĆA I POROD.... 1999. iz VITRIFICIRANE humane oocite

(Kuleshova i sur. 1999)


Klini ke indikacije za zamrzavanje jajnih stanica

Kliničke indikacije za zamrzavanje jajnih stanica

očuvanje plodnosti kod onkoloških pacijentica

privremeno nepostojanje spermija partnera

etički razlozi ili zakonska regulativa

donacija jajnih stanica

odgođeno majčinstvo


Vitrifikacija jajnih stanica

Zašto je teško zamrznuti/

vitrificirati jajnu stanicu ?

  • Plazma membrana slabije permeabilna za vodu i

  • krioprotektante

  • - Diobeno vreteno osjetljivo na promjene temperature

  • Dehidracija i rehidracija može narušiti segregaciju

  • kromosoma

  • Povećani rizik od starenja oocite zbog procesa zamrzavanja

  • Zamrzavanje narušava fiziologiju jajne stanice

Rienzi i sur. 2010.


Sporo zamrzavanje vs vitrifikacija

Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Sporo zamrzavanje

Vitrifikacija

  • Potrebni su programirani

  • krio-aparati

  • Traje nekoliko sati

  • Niske koncentracije

  • permeabilnih krioprotektanata

  • Seeding

  • Nije potrebna posebna oprema

  • Traje cca. 30 minuta

  • Više koncentracije krioprotektanta

  • Veća brzina hlađenja

  • Veća brzina otapanja

  • Zahtijeva puno iskustva

Saragusty i Arav 2011


Sporo zamrzavanje vs vitrifikacija1

Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

  • Smith i suradnici (2010) prospektivno istraživanje – usporedba sporog zamrzavanja i vitrifikacije. Preživljavanje oocita, oplodnja i učestalost kliničkih trudnoća veći nakon vitrifikacije (75% vs. 65%; 77% vs.67%; 38% vs. 13%)

  • Kim i suradnici (2010) nakon vitrifikacije jajnih stanica plodnih žena postiže se visoka uspješnost trudnoća (80%)

  • Ciotti i sur. (2009) repolimerizacija diobenog vretena brža je nakon vitrifikacije

  • Molinari i sur. (2010) tijekom sporog zamrzavanja zona pelucida gubi svoju strukturnu organizaciju i postaje tanja, a diobeno vreteno postaje manje organizirano


Sporo zamrzavanje vs vitrifikacija2

Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Bromfield i suradnici (2009) sporo zamrzavanje dovodi do rastavljanja diobenog vretena

Grifo i Noves (2010) 23 pacijentice; uspješnost oplodnje i stvaranje blastocisti veće je nakon sporog zamrzavanja (oplodnja 84% vs. 75%, P=0,04; stvaranje blastocisti 52% vs. 35%, P=0,02)

Martinez-Bourgos i sur. (2011) randomizirano istraživanje, sestrinske donorske jajne stanice, veće preživljavanje i brži povratak diobenog vretena nakon vitrifikacije (86,8% vs. 50%; 93,5% vs. 72%)

Chen i Yang (2009) preživljavanje nakon vitrifikacije je veće, povratak diobenog vretena brži (2h)


Sporo zamrzavanje vs vitrif ikacija

Sporo zamrzavanje vs. vitrifikacija

Borini i sur. (2010) multicentrično istraživanje sporog zamrzavanja, 2209 svježih ciklusa, 940 sekundarnih ciklusa, sporo zamrznute jajne stanice imale lošiji ishod nego svježi ciklusi

Rienzi i sur. (2010) 224 sestrinske oocite, nema razlike između svježih i vitrificiranih jajnih stanica u uspješnosti oplodnje ili razvoju zametaka

Magli i sur. (2010) sporo zamrzavanje u odnosu na vitrifikaciju ima negativan učinak na potencijal jajnih stanica


Osnove vitrifikacije

Osnove vitrifikacije

Za uspješnu vitirifkaciju potrebni su:

krioprotektant,

odgovarajuća brzina hlađenja,

dovoljno niska temperatura skladištenja,

odgovarajuća brzina otapanja


Za to je jajnu stanicu te ko zamrznuti

Zašto je jajnu stanicu teško zamrznuti?

Jedna od najvećih stanica u tijelu sisavaca

Sferični oblik - manji omjer površine i volumena od drugih stanica nepravilnog oblika

Ima manju permeabilnost za krioprotektante u usporedbi sa zigotama i zametcima

Osjetljive na fizičko/kemijska oštećenja

(Kuwayama 2005)


Uloga krioprotektanta

Uloga krioprotektanta

  • Započinje proces dehidracije stanice

  • Smanjuje točku ledišta otopine

  • Stvara vodikove veze s molekulama vode eliminirajući na taj način stvaranje leda

  • Smanjuje negativan učinak uzrokovan visokim koncentracijama soli

  • Saharoza ne ulazi u stanicu, ali uzrokuje dehidraciju stanice promjenom osmotskog tlaka


Nosa i otvoreni sustav

Nosači (otvoreni sustav)

Cryoleaf

(Chian i sur. 2005)

Open pulled straws (OPS) (Vajta i sur. 1998)

Cryoloop

(Lane i sur. 1999)

Electron microscopic copper grids (Steponkus i sur. 1990)

Thin glass surface (Arav 1992)

Cryotop

(Kuwayama i Kato 2000)

Hemi-straw system

(Vanderzwalmen i sur. 2000)


Nosa i zatvoreni sustav

Nosači (zatvoreni sustav)

Cryotip

(Kuwayama i sur. 2005)

Closed pulled straw

(Chen i sur. 2001)

Cryotop CL

(


Sigurnost vitrifikacije

Sigurnost vitrifikacije

Postoji rizik od unakrsne kontaminacije uzorka preko tekućeg dušika. To se može izbjeći:

1) upotrebom nosača zatvorenog sustava

2) pohranom u parama LN2 (istraživanja su u tijeku)

3) korištenjem tekućeg dušika steriliziranog UV-zrakama


Kako odabrati jajnu stanicu za vitrifikaciju

Kako odabrati jajnu stanicu za vitrifikaciju?

Samo snažne i zdrave oocite biti će u stanju izaći na kraj sa izlaganjem krioprotektantima, mehaničkim i osmotskim stresom, promjenama temperature i medija, sa ponovnim oblikovanjem diobenog vretena i staničnom trodimenzionalnom organizacijom u kratkom vremenskom periodu

Dismorfične jajne stanice (npr. akumulacija velikih vakuola, jako granulirana citoplazma ili vrlo veliko polarno tjelešce) su indikator narušene distribucije staničnih komponenti (Ubaldi i Rienzi 2008)


Vitrifikacija jajnih stanica

Postupci vitirifikacije jajnih stanica učinjeni od 2009.g.

do 31.07. 2011.g. na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka


Vitrifikacija jajnih stanica

Ishodi sekundarnih ciklusa učinjenih u 2010. i prvoj polovici 2011. godine na Specijalističkom zavodu za humanu reprodukciju Klinike za ginekologiju i porodništvo KBC Rijeka

1 – % preživjelih jajnih stanica u odnosu na broj otopljenih jajnih st.

2 - % oplođenih jajnih stanica u odnosu na broj preživjelih jajnih st.

3 - % zametaka u ET u odnosu na broj oplođenih jajnih st.

4 - % prijenosa zametaka u odnosu na broj sekundarnih ciklusa

5 - % kliničkih trudnoća u odnosu na broj prijenosa zametaka


Hvala

Hvala...


  • Login