臨床實驗室如何應用形態學進行絲狀菌鑑別檢驗
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臨床實驗室如何應用形態學進行絲狀菌鑑別檢驗. 芮弗士醫事檢驗中心 技術主任 呂振富. 演講內容. 黴菌感染的主因 絲狀黴菌鑑定的基本觀念 實驗室如何準備絲狀黴菌鑑定的設備與材料 黴菌生理與型態介紹 ( 圖譜 ). 黴菌引起的感染主因. 多數為機緣性的感染,最常見者為酵母菌感染,尤其下列病人: 免疫力下降者 長期使用抗生素、類固醇、細胞毒藥物者 使用 IV 導管者 DM 患者 IV 毒癮者. 絲狀黴菌鑑定很簡單. 大部分黴菌都有特殊形態,包括: 菌落: 顏色 ( 正面與背面 ) 、質地、邊緣、可溶性色素等

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Presentation Transcript


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臨床實驗室如何應用形態學進行絲狀菌鑑別檢驗

芮弗士醫事檢驗中心

技術主任 呂振富


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演講內容

  • 黴菌感染的主因

  • 絲狀黴菌鑑定的基本觀念

  • 實驗室如何準備絲狀黴菌鑑定的設備與材料

  • 黴菌生理與型態介紹(圖譜)


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黴菌引起的感染主因

  • 多數為機緣性的感染,最常見者為酵母菌感染,尤其下列病人:

  • 免疫力下降者

  • 長期使用抗生素、類固醇、細胞毒藥物者

  • 使用IV導管者

  • DM患者

  • IV毒癮者


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絲狀黴菌鑑定很簡單

  • 大部分黴菌都有特殊形態,包括:

  • 菌落:顏色(正面與背面)、質地、邊緣、可溶性色素等

  • 顯微形態:細胞大小、顏色、分生方式,及長成的形態等

  • 輔助試驗:

  • 非常少數需要用到生化鑑定作為輔助

  • 溫度

  • 其他試驗


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任何顯微鏡觀察應特別重視大小量尺觀念

  • 顯微鏡之目鏡測微尺

  • 若無測微尺,則可以對照大小均勻的細胞:

  • Stapylicoccus aureus:直徑約1μm

  • 正常RBC:直徑約7.5μm


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臨床分離絲狀黴菌

  • 常見的黴菌:酵母菌、酵母樣菌,約占臨床分離的黴菌之85-95%

  • 絲狀黴菌較少:約占臨床分離的黴菌之5-15%

  • 皮膚絲狀(癣)菌:皮膚科醫師通常會依據驗診斷癣或溼疹或其他皮膚病,所以很少開立檢驗


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絲狀黴菌檢體與培養菌絲染色

  • 染色劑與染色方法很簡單:

  • 10%KOH(可加派克藍色墨水或螢光劑CFW):黴菌檢體觀察用,軟化角質與化痰

  • Lactophenol cotton blue:絲狀黴菌鑑別用

  • 子囊孢子染色:耐酸染色(Kinyoun法,3%HCL酒精脫色)

  • 其他輔助染色:

  • Gram stain

  • Calcofluor White


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黴菌初培養用培養基

  • 常見黴菌的初培養用培養基很簡單:

  • Sabouraud Dextrose Agar(SDA):典型的形態與色素

  • BHI:挑剔性真菌用

  • SABHI:SDA+BHI(建議用)

  • Mycoselor IMA:選擇性培養基,含氯黴素與Cycloheximide

  • Potato Dextrose Agar(PDA):可刺激產孢與色素

  • 其他:CHROagar(酵母菌)、DTM or RSM(皮膚絲狀菌)

  • 培養基若不常用,建議買來後再單片密封包裝,避免乾燥。


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黴菌鑑定用培養基

  • 常見黴菌的鑑定用培養基很簡單:

  • Sabouraud Dextrose Agar(SDA):典型的形態與色素,Slide culture

  • Potato Dextrose Agar(PDA):可刺激產孢與色素,Slide culture

  • Cornmeal Agarwith 1% dextrose:刺激紅髮癬產生紅色素

  • 毛髮穿洞試驗

  • Trichophyton agars

  • Urea agar(Christensen)

  • SDA with 15% NaCl

  • Tyrosine or Xanthine agar

  • Germ tube test with H2O for 一些暗色菌絲的大分生孢子

  • 培養基若不常用,建議買來後再單片密封包裝,避免乾燥。


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黴菌培養設備與注意事項

  • 培養的培養箱:

  • 室溫培養箱:一般是建議使用低溫培養箱。若否則只要室內溫度能維持25-30 oC ,適當的防護,到處都作為培養箱

  • 37 oC培養箱:除非出現雙形性的黴菌或鑑定需要,否則很少用到。若與細菌共用培養箱,應注意污染細菌的問題

  • 注意保濕(防乾燥):慢速生長菌的培養時間通常需要7-14天,可使用薄的PE塑膠袋密封。(酵母菌只要48-72小時)


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鑑定絲狀黴菌的基礎

  • 引起的疾病

  • 檢體內的黴菌特性

  • 培養溫度環境與培養時間

  • 培養基上的形態:正面與背面顏色、質地、色素

  • 顯微鏡的形態:無性生殖結構、有性生殖結構、菌絲分隔、菌絲顏色

  • 本所黴菌形態的工具書:

  • 美國ASM出版的 Medical Important Fungi

  • Identifying Filamentous Fungi

  • 其他


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如何準備顯微觀察的標本

  • 膠帶黏附法

  • 傳統 的Riddell Slide Culture 技術

  • 簡化的Slide Culture 技術


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黴菌生理與型態介紹

(絲狀黴菌圖譜為主)


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