GALERIE API 20E : ensemencement, lecture et interprétation
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GALERIE API 20E : ensemencement, lecture et interprétation. La galerie API 20 E. 1- Présentation de la galerie. Galerie de 20 microtubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram – appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE.

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GALERIE API 20E : ensemencement, lecture et interprétation

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Presentation Transcript


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

GALERIE API 20E : ensemencement, lecture et interprétation


La galerie api 20 e

La galerie API 20 E

1- Présentation de la galerie

Galerie de 20microtubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram – appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE.

Cupule

Microtube contenant le milieu déshydraté


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

1- GALERIE API 20E :

son ensemencement


La galerie api 20 e1

La galerie API 20 E

1- Présentation de la galerie

Galerie de 20microtubes prêts à l’emploi permettant de réaliser 23 tests biochimiques afin d’identifier des bacilles Gram – appartenant à la famille des ENTEROBACTERIACEAE.

Cupule

Microtube contenant le milieu déshydraté

La suspension bactérienne introduite dans le tube dissout les substrats déshydratés.


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Préparation de l’inoculum pour ensemencer la galerie API 20 E

2- Préparation de l’inoculum

1 seule colonie sur GO

isolement

Prélèvement

d’une souche pure sur GNI

5 mL d’eau distillée stérile

5 mL d’eau distillée stérile

Souche pure sur GNI


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Ensemencement de la galerie API 20E

3- Ensemencement de la galerie API 20 E

Introduire la suspension bactérienne dans chaque tube à l’aide d’une pipette Pasteur stérile ouverte, pointe appuyée à l’intérieuret sur le côté pour éviter la formation de bulles

Pour certains caractères:

Remplir le tube de suspension puis Recouvrir d’huile de paraffine

Pour les tests : ADH, LDC, ODC, H2S, URE

Remplir de suspensionle tube et la cupule

Pour les tests :

CIT VP GEL


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

2- GALERIE API 20E :

sa lecture


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

2-1- Les réactifs à ajouter pour la lecture


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Après 24h d’incubation à 37°C, cupules ans lesquelles on doit rajouter des réactifs

4- Lecture de la galerie API 20 E

Chlorure de fer III

Naphtyl-1-amine

Napht-1-ol


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

2-2- Aspect des résultats positifs et négatifs


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

+ Réactif TDA

+ Réactif Kovacs

+ Réactifs VP 1 et 2

+ Réactif TDA

+ Réactif Kovacs

+ Réactifs VP 1 et 2

Les 10 premiers tests

Testsnégatifs

4- Lecture de la galerie API 20 E

Tests positifs après ajout des réactifs utiles


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Les 10 derniers tests

Tests négatifs

Tests positifs

Après ajout des réactifs Nit 1 et Nit 2 : lecture de la NR (ici NR +)


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

2-3- Explication des résultats positifs


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

ONPG

Mise en évidence

de la béta-galactosidase

Substrat : ONPG

Réaction : ONPG + eau

Galactose + orthonitrophénol jaune


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

ADH, LDC, ODC

Mise en évidence de :

- l'arginine désaminase

- lysine décarboxylase

- ornithine décarboxylase

Substrats :

- arginine (dans ADH),

- lysine (dans LDC)

- ornithine (dans ODC)

Réactions : dégradations libérant des produits basiques

Révélateur : rouge de phénol

Rouge/Rose = +

Jaune/Orangé = -

Rouge/Orangé = +

Jaune = -


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Citrate

Mise en évidence de la dégradation du citrate comme seule source de carbone.

Réaction : dégradation consommant des H+, donc responsable d’une alcalinisation.

Substrat : citrate

Révélateur : BBT


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

H2S

Mise en évidence de production de sulfure

Substrat : thiosulfate de sodium

Révélateur : Fe3+

Résultat positif : présence d’un précipité noir de sulfure de fer


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Urée

Mise en évidence de la présence d'une uréase

Substrat : urée

Réaction : urée + eau CO2 + 2 NH3, d’où alcalinisation.

Révélateur : Rouge de phénol

Lecture :

attention un orange clair sera -,

un orange foncé sera considéré comme +


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

TDA

Mise en évidence d'une tryptophane désaminase

Substrat : Tryptophane

Produit obtenu : Acide indol pyruvique

Révélateur : -

Réactif ajouté : Chlorure de fer III donnant un produit marron foncé en présence d’acide indol pyruvique


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Indole

Mise en évidence d'une tryptophanase

Substrat : Tryptophane

Produit : Indole

Révélateur : -

Réactif ajouté :

Kovacs (ou James)


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Voges Proskauer

Mise en évidence de la production d'acétoïne, de 2,3 butane diol et de butane dione

Substrat : Pyruvate

Révélateur : -

Réactifs ajoutés :

VP1 et VP2

(1- naphtol et KOH)


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Béta galactosidase

Lecture directe

Arginine DihydrolaseLysine DécarboxylaseOrnithine Décarboxylase

Lecture directe

BBT

Utilisation du citrate

Lecture directe

Lecture directe

Production d’H2S

Rouge de Phénol

Uréase

Lecture directe

Lecture indirecteAjouter une goutte de réactif chlorure de fer III

Tryptophane désaminase

Lecture indirecteAjouter une goutte de réactifKovacs

Tryptophanase ou production d’indole

Lecture indirecteAjouter 1 goutte de VP1 et VP2 Attendre 10 minutes

production d’acétoïne (3-hydroxybutanone

gélatinase

Lecture directe

BBT

Utilisation de substrats carbonés (glucides)

BBT

Lecture directe

Lecture indirecteAjouter 1 goutte de NIT1 et NIT2 et zinc éventuellement

Nitrate réductase


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

3- GALERIE API 20E :

son interprétation (identification de la souche)


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Validation et possibilité d’interprétation si :

  • Cupule Glu +

  • Ou 3 autres cupules au moins positives


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

Démarche d’identification :

- apporter la preuve que la bactérie appartient bien à la famille des Enterobacteriaceae (montrer qu’elle a les 7 caractères définissant la famille)

- identifier le genre, voire l’espèce :

* approche dichotomique, ou utilisation de tableaux des caractères

* codage API

* approche probabiliste utilisant un logiciel informatique


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

5- Identification de la souche

Lecture des résultats de la galerie :

-

+

+

+

+

5

1

7

5

5

3

5

2

7

Résultats reportés sur la fiche d’identification

Code n°: 5 215 773 (55)

Se référer au catalogue pour identifier la souche à l’aide du code


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

5- Identification de la souche (suite)


M thode d identification probabiliste p340 dtk

Méthode d’identification probabiliste (p340 DTK)

  • Le nom du micro-organisme est obtenu par un calcul de probabilité

  • A chaque caractère d’un micro-organisme donné fait référence une probabilité d’être + ou –

  • La probabilité que ce soit un taxon donné correspond aux produits des probabilité attribué à chaque caractère (si + = % de positivité ou si - =100%-% de positivité)

    = Le logiciel classe tous les résultats pour donner le ou les taxons les plus probables.


Galerie api 20e ensemencement lecture et interpr tation

typicité

Indice de typicité : comparaison entre le profil trouvé et le profil réel de la souche


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