Association LAM du groupe CBF et mastocytose :

1. Association LAM du groupe CBF et mastocytose : E Cornet* (1,5); C Roumier (1,5); P Lepelley (1,5); N Jouy (2); N Philippe (1); A Renneville (1); O Nibourel (1,5); V Soenen (1); C Berthon (3); B Nelken (4); B Quesnel (3,5); C Preudhomme (1,5). (1) Laboratoire d' Hématologie, Centre Hospitalier régional et Universitaire, Lille; (2) IFR114. IMPRT. IRCL, Lille; (3) Service des Maladies du Sang, Centre Hospitalier régional et Universitaire, Lille; (4) Hématologie Pédiatrique, Centre Hospitalier régional et Universitaire, Lille; (5) INSERM U837. Equipe 3. JPArc. IRCL, Lille. 2 cas cliniques

2. LAM CBF et mastocytose :origine commune t(8;21) Pullarkat (Leuk Res 2007) Mastocytose systémique associée à une LAM2 t(8;21) (SM-AHNMD) Mutation cKIT D816V t(8;21) retrouvée dans les Mastocytes (FACS + T-FISH) Blastes myéloïdes Mastocytes t(8;21) t(8;21)

3. Mutations de c-KIT dans les LAM c-KIT Fréquence : (Renneville Leuk 08/ Schnittger Blood 06) <5% des LAM de novo 1/3 des LAM CBF D419 (del/ins exon 8) Boissel. Leukemia 2006 JM V556L Valeur pronostique : (Schnittger Blood 06 / Paschka JCO 06) Dans les LAM CBF : - facteur défavorable indépendant - association à un risque de rechute élevé D816 (exon 17) Paschka JCO 06

4. Mutations c-KIT et mastocytose Valent P. Standards and standardization in mastocytosis: Consensus Statements on Diagnostics, Treatment Recommendations and Response Criteria. EurJClinInvest 2007.

5. Patient 1 Homme de 53 ans, aucun antécédent GB=11 G/L ; Hb=14,6 g/dL ; Plq=53 G/L 53% de blastes circulants MPO+ Bleu de toluidine 55% de blastes 4% éosinophiles Présence de mastocytes

9. LAIP CD34+ CD14- CD65+ Cytométrie en flux (4C) : Cytogénétique conventionnelle et moléculaire (FISH) : inv(16)(p13q22) Biologie moléculaire : Transcrit de fusion CBFß-MYH11 de type A Mutation cKIT D816V LAM2 avec Eosinophiles (LAM2Eo) inv(16) cKIT muté avec mastocytes

10. Patient 2 Jeune homme de 16 ans, aucun antécédent GB=21 G/L ; PN=0,6 G/L; Hb=3,2 g/dL ; Plq=6 G/L 90% de blastes circulants Présence de mastocytes 81% de blastes

14. LAIP CD34+ CD56+ Cytométrie en flux (4C) : Cytogénétique conventionnelle et moléculaire (FISH) : t(8;21)(q22;q22) Biologie moléculaire : Transcrit de fusion AML1-ETO Mutation cKIT D816A LAM1 t(8;21) cKIT muté avec mastocytes

15. Synthèse Absence d’antécédent de mastocytose systémique 2 LAM du groupe CBF Mutation cKIT D816 Mastocytes nombreux et anormaux au diagnostic

16. R2 : 0.83 Suivi MRD patient 1 Moelle Sang LAIP CD34+ CD14- CD65+ 1 : Diagnostic 2 : Post-induction 3 : Post-consolidation 1 Discordance taux transcrit entre sang et moelle Guièze et al, SFH mars 2008 Bonne corrélation du taux de transcrit CBFß-MYH11 entre le sang et la moelle pour les taux > 0,1%

17. Suivi MRD patient 2 LAIP CD34+ CD56+ Moelle Sang 1 : Diagnostic 2 : Post-induction Leroy et al, Leukemia 2005 LAM t(8;21) : Taux de transcrit AML1-ETO => Bonne corrélation entre le sang et la moelle

18. Frottis médullaires Post-consolidation Frottis médullaires Post-induction Les mastocytes persistant après chimiothérapie seraient-ils porteurs de l’anomalie cytogénétique de la population leucémique ?

19. Matériels et méthodes Tri par cytométrie en flux (Beckman Coulter Epics Altra) Moelle Osseuse Totale : Post-conso2 : patient 1 Post-conso1 : patient 2 Blastes résiduels CD34+ CD117+ CD25- Mastocytes anormaux CD34- CD117+ CD25+ FISH interphasique (t(8;21) et inv(16)) RQ-PCR (AML1-ETO et CBF-MYH11) Recherche mutation cKIT D816

20. Résultats FISH interphasique : Patient 1 : inv(16) MO totale : 2/300 pos Patient 2 : t(8;21) MO totale : 4/300 pos Fraction Mastocytes Fraction Blastes MGG (cytospin) 17% pos* 0% pos (* Pureté de tri ?) 90% pos 0% pos

21. Patient 1 1 : Diagnostic 2 : Post-induction 3 : Post-consolidation 1 Moelle Sang Patient 2 Présence du transcrit de fusion dans la fraction Mastocytes Absence ou présence à faible taux du transcrit de fusion dans la fraction Blastes Moelle Sang

22. Mutation D816 cKIT Absence de la mutation cKIT parmi les blastes triés Mastocytes porteurs de la mutation D816 de cKIT (patient 2)

23. Patient 1 Moelle Sang Discordance entre taux médullaire de transcrit persistant et CMF et cytologie LAIP CD34+ CD14- CD65+ Mastocytes persistants sur frottis médullaires

24. Conclusion (1) Les mastocytes : • résistent à la chimiothérapie • restent vraisemblablement fonctionnels (Choc anaphylactique chez le patient 2) • sont phénotypiquement anormaux (CD34- CD117+CD25+)

25. Conclusion (2) inv(16) cKIT D816 Blastes myéloïdes Mastocytes inv(16) cKIT D816 inv(16) cKIT D816 Les mastocytes : • possèdent la mutation cKIT D816 • possèdent l’anomalie cytogénétique clonale de la population leucémique Origine clonale commune probable

26. Conclusion (3) Quid du suivi de la MRD chez ces patients ? Les mastocytes : • posent le problème du suivi de la maladie résiduelle par biologie moléculaire

27. Remerciements IFR114 Institut de Recherche sur le Cancer de Lille Nathalie Jouy Service des Maladies du Sang CHU Lille Céline Berthon Selim Corm Bruno Quesnel Laboratoire d’hématologie Centre de Biologie Pathologie CHU Lille Christophe Roumier Pascale Lepelley Martine Fournier Nathalie Philippe Valérie Soenen-Cornu Olivier Nibourel Aline Renneville Claude Preudhomme Service d’hématologie Pédiatrique CHU Lille Brigitte Nelken Déborah Meyran