1 / 21

第十四章 基 å›  诊 æ–­ å’Œ 基 å›  æ²» ç–— Gene diagnosis and Gene Therapy 第一节 基因诊断 第二节 基å

第十四章 基 因 诊 断 和 基 因 治 疗 Gene diagnosis and Gene Therapy 第一节 基因诊断 第二节 基因治疗. 第一节 基因诊断 重组 DNA 技术极大地丰富了我们对人类遗传病分子病理学的知识，同时也提供了从 DNA 水平对遗传病进行基因诊断的手段。 基因诊断 ： 就是利用 DNA 重组技术从 DNA 水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称 DNA 分析法。. 一、直接诊断.

awen
Download Presentation

第十四章 基 å›  诊 æ–­ å’Œ 基 å›  æ²» ç–— Gene diagnosis and Gene Therapy 第一节 基因诊断 第二节 基å

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. 第十四章 基 因 诊 断 和 基 因 治 疗Gene diagnosis and Gene Therapy第一节 基因诊断第二节 基因治疗

  2. 第一节 基因诊断 重组DNA技术极大地丰富了我们对人类遗传病分子病理学的知识，同时也提供了从DNA水平对遗传病进行基因诊断的手段。 基因诊断：就是利用DNA重组技术从DNA 水平检测人类遗传性疾病的基因缺陷，又称DNA分析法。

  3. 一、直接诊断 • 直接检测致病基因本身的异常。通常使用基因本身或邻近的DNA序列作为探针，或通过PCR 扩增产物，以检测基因点突变、缺失、插入等异常及性质。它主要适用于已知基因异常疾病 的诊断。

  4. 1）α地贫的Gene诊断 α基因不同程度的缺失引起不同类型的α地贫，α基因缺失1～4个。正常Gene组用BamHI切割，可得到14kb的片段，而缺失一个α Gene时可得到10kb片段。 1、Gene 缺失遗传病的诊断 BamHI BamHI α2 α1 14 kb α2 probe 10 kb

  5. 以αGene为探针，Southern blot 方法检测 • αα/αα αα/α- αα/- - α- /- - - - / - - • 正常 缺1 缺2 缺3 缺4 14kb 10kb

  6. 2）DMD/BMD的缺失诊断（进行性肌营养不良或假肥大型）2）DMD/BMD的缺失诊断（进行性肌营养不良或假肥大型） • DMD是一种严重致死性疾病（XR），临床症状表现肌肉进行性萎缩和乏力。BMD临床症状与DMD相似，但症状较轻。 • Gene 定位Xp21 ， Gene 2300kb,79 个Exon ，cDNA全长13974bp 编码3685 Aa，分子量427kD。 • DMD/BMD 70%左右为缺失型，基因很大，缺失可能发生在不同的部位。应用多重PCR扩增检测，判断缺失状态。

  7. 多重PCR扩增后电泳检测结果 病例 1 2 3 4 5 6 7 8 bp 外显子 535 Pm 3 43 50 13 6 47 60 52 113

  8. 2、突变型遗传病的基因诊断 例 如： 镰形细胞贫血的Gene诊断 已知突变基因编码β珠蛋白链的 第6位密码子 GAG——GTG 谷Aa——缬Aa

  9. 1）RFLP诊断 • 已知限制酶MstII • 识别序列 MstII 1.15kb • CCTG AGG 1.35kb x probe • CCTGTGG • 突变后不能识别， • 酶切位点消失，限制酶切片段长度发生变化。

  10. 限制酶切片段电泳后，经Southern Blot检测，结果： 1.35kb 1.15kb βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常 镰状 镰状贫血

  11. 2）ASO探针诊断 已知突变Gene部位和性质，合成寡和苷酸探针，32P标记，进行Southern Blot 杂交/斑点杂交。 Normal βΑGene Probe——与正常 βΑ杂交 Mutation βS Gene Probe——与异常 βS杂交

  12. 斑点杂交结果： βΑ/βΑ βΑ/βS βS/βS 正常探针 突变探针

  13. 二、间接诊断 主要通过Gene和DNA多态的连锁分析作出诊断。当致病基因虽然已知，但其异常尚属未知时，或疾病Gene本身尚属未知时，可通过对受检者及其家系进行连锁分析，推断受检者是否获得了带有致病基因的染色体或DNA 片段。 连锁分析是基于遗传标记与Gene连锁，子代是否获得遗传标记间接地判断做出诊断。 这些遗传标记是基因组中的DAN 多态，如：RFLP，VNTR 等。

  14. 1、Gene异常不明确的遗传病的诊断 • 例：成年型多囊肾病——APKD，AD ，临床表现为腰痛，蛋白尿，血尿，高血压，肾盂性肾炎，肾结石。最终导致肾功能衰竭和尿毒症。 • APKD——Gene定位16p13，但致病基因尚未克隆，基因产物的生化性质和疾病发病机理也尚未阐明，但已证实APKD Gene与α珠蛋白基因3`端附近的一段小卫星DNA序列（3`HVR）紧密连锁，因此，可以通过RFLP连锁分析进行诊断。

  15. 以3`HVR为probe与PvuII酶切后的家系有关成员的Gene组DNA杂交——Southern Blot杂交 Gene组DNA probe （3`HVR） PvuII酶切DNA片段 杂交 结果

  16. 结 果 1 2 1 2 3 4 5 5．7kb 3．4kb 2．3kb

  17. 结果分析 • 患者（I1、II1和II2）有3.4kb片段,说明致病基因与3.4kb片段连锁,并按孟德尔方式遗传.II5不含3.4kb片段,产前诊断正常.

  18. PCR—RFLP诊断 甲型血友病的基因诊断，已知甲型血友病XR，获得家系成员基因组DNA 。 PCR 142 bp BcLI 142bp 99 bp 43bp 电泳 结果分析 ？ Bcl I p1 p2 142bp Bcl I - 99bp 43bp Bcl I +

  19. 问:1/ Ⅱ2、Ⅲ1诊断；2/ Ⅲ1是男或是女发病？ Ⅰ 1 2 Ⅱ 1 2 3 III 1 142bp 99bp

  20. 结果分析 1）先症者II2具有99bp片段而发病，该片段来自母亲。 2）II2有142bp/99bp杂合子。142bp来自父亲，为正常片段，99bp片段是来自母亲而成为携带者。 3）Ⅲ1为99bp片段 如果是 男性 为患者（99bp片段来自母亲）；女性为携带者（来自父母双方）

  21. 基因诊断意义 • 现证病人的诊断：争取有效、针对性治疗。 • 产前诊断：意义更为重要，预防遗传病患儿的出生 END

More Related