Long-term Engraftment of Single Genetically Modified Human Epidermal Holoclones Enables Safety Pre-a...
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Long-term Engraftment of Single Genetically Modified Human Epidermal Holoclones Enables Safety Pre-assessment of Cutaneous Gene Therapy PowerPoint PPT Presentation


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Long-term Engraftment of Single Genetically Modified Human Epidermal Holoclones Enables Safety Pre-assessment of Cutaneous Gene Therapy. F Larcher, E Dellambra, L Rico, S Bondanza, R Murillas, C Cattoglio, F Mavilio, JL Jorcano, G Zambruno, M Del Rio. Avant - propos. Le DICS-X ou X-SCID

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Long-term Engraftment of Single Genetically Modified Human Epidermal Holoclones Enables Safety Pre-assessment of Cutaneous Gene Therapy

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Presentation Transcript


Long term engraftment of single genetically modified human epidermal holoclones enables safety pre assessment of cutaneo

Long-term Engraftment of Single Genetically Modified Human Epidermal Holoclones Enables Safety Pre-assessment of Cutaneous Gene Therapy

F Larcher, E Dellambra, L Rico, S Bondanza, R Murillas, C Cattoglio, F Mavilio, JL Jorcano, G Zambruno, M Del Rio


Avant propos

Avant - propos

  • Le DICS-X ou X-SCID

    Le DICS (Déficit Immunitaire Combiné Sévère) est un groupe de troubles génétiques rares caractérisé par des anomalies profondes de l'évolution et de la fonction des LT, LB et des cellules NK. La forme la plus courante est le DICS lié à l'X (environ 50 % des cas). Par son attachement au chromosome X, le DICS-X n'affecte que les garçons. Il se caractérise par 1 anomalie du gène codant la chaîne gamma courante (γc) commune aux récepteurs de plusieurs interleukines (IL2, 4, 7, 9, 15), conduisant à une absence totale de LT et de cellules NK. Il touche en moyenne un bébé sur 200.000 à la naissance (5 nvx-nés/an en France) .


Possibilit s th rapeutiques

Possibilités thérapeutiques

  • Greffe de moelle osseuse

  • Thérapie génique avec utilisation d’un vecteur

  • (Thérapie génique avec utilisation de méga nucléase ?)


Rappels historiques

Rappels historiques

  • 1990  premier essai de thérapie génique sur une fillette ADA-SCID mené par WF Anderson et RM Blaese avec un vecteur rétroviral

  • 1999 Vecteur rétroviral pour pallier la déficience du gène IL2RG (récepteur) responsable du X-SCID équipe du Pr Alain Fischer, hôpital Necker (INSERM U768).


Rappels historiques1

Rappels historiques

  • 2002  suspension des essais thérapeutiques : cas de leucémie chez deux enfants traités par thérapie génique

  • 2003  début d’explication insertion à proximité d’un proto-oncogène LMO2 + les 2 enfants étaient les plus jeunes et avaient reçues plus de cellules


Probl matique

Problématique

Volonté de pré-évaluer un isolat de cellules souches (CS) modifiées génétiquement et de leur progéniture.

Pas possible pour l’instant techniquement sur CS hématopoïétiques donc tentées avec CS épidermiques

But: Génerer une peau humaine à partir de CS isolées, modifiées et pré-évaluées.


Les cs pidermiques

Les CS épidermiques

  • Les CS épidermiques sont retrouvées sous la forme de kératinocytes (90% des cellules de l’épiderme)

  • 3 types de CSE en fonction de leur possibilité à former des colonies:

    • Holoclones (potentiel le plus élevé)

    • Méroclones

    • Paraclones (potentiel le plus faible)


R sultats isolation des holoclones et proc dure de greffe

Résultats: Isolation des holoclones et procédure de greffe


R sultats d termination des holoclones

Résultats: détermination des holoclones


Apparence macroscopique de l architecture de l piderme

Apparence Macroscopique de l’architecture de l’épiderme


R sultats histologie

Résultats: Histologie

En m, expression de p63 marqueur d’une grande capacité proliférative


R sultats stabilit et int gration chromosomique

Résultats: Stabilité et intégration chromosomique


R sultats sites d int gration proviraux

Résultats : Sites d’intégration proviraux


Conclusion

Conclusion

  • Nécessité technique rigoureuse de greffe et culture organotypique

  • Intérêt de développer et tester les cellules modifiées avant transplantation

  • Technique peu compatible avec le tissu hématopoïétique

  • Risques non négligeables de mutagénèse


Clinique

Clinique

Intérêt de cette expérience chez les enfants atteints de Xeroderma Pigmentosum mais aussichez des patients atteints de diverses génodermatoses.


Alternative th rapeutique

Alternative thérapeutique

Une méganucléase est une protéine qui coupe l'ADN à un endroit très précis sur un chromosome. Une fois que l'ADN est coupé, il doit être réparé par les systèmes endogènes naturels de maintenance de la cellule. En fournissant une molécule d'ADN fabriquée spécifiquement (appelée matrice de réparation) qui sera utilisée comme matrice nucléique pour réparer la cassure, on peut diriger le mécanisme de réparation vers un processus d'insertion, de suppression ou de correction.


Long term engraftment of single genetically modified human epidermal holoclones enables safety pre assessment of cutaneo

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