实验九 水质的微生物检测（综合实验）

1. 实验九 水质的微生物检测（综合实验） 实验目的 了解水质微生物检验的原理 学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法

2. 水中细菌总数的测定——平板菌落计数法 • 水中大肠菌群数量的测定

3. 水中大肠菌群数量的测定 • 大肠菌群——能在37 ℃24-48h内发酵乳糖产酸与产气、需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 • 主要包括埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属的细菌。 • 粪便中存在大量的大肠菌群细菌，在水体中存活的时间和对氯的抵抗力与肠道致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌相似。易于培养和观察。

4. 乳糖蛋白胨培养基 乳糖蛋白胨培养基 典型菌落 产气 不产气 报告为大肠菌群阳性 报告为大肠菌群阴性

5. 乳糖起选择作用；溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用乳糖起选择作用；溴甲酚紫起产酸指示，还有抑制其他细菌作用

6. 实验方法和步骤 • 1．水样的采取 • 自来水：先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流5 min后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 • 池水、河水或湖水：应取距水面10- 15 cm的深层水样，先将灭菌的带塞玻璃瓶，瓶口向下浸人水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流人瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放人冰箱中保存。

7. 多管发酵法检测水样中大肠菌群 • 自来水检查 • 初发酵试验接种水样总量为300ml：在2个含有50 ml三倍浓缩的乳糖蛋白脉发酵烧瓶中，各加入100 ml水样。在10支含有5 ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管中，各加入10 ml水样。混匀后，37℃培养24h，24 h未产气的继续培养至48 h。通过平板分离、涂片、染色、镜检和复发酵试验检查各发酵管（瓶）中是否有大肠菌群存在。 • 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查阅接种水样总量为300ml检数表，即得大肠菌群数。MPN 法（Most Probable Number）最大可能數法

9. 池水、河水或湖水等的检查 • (1）将水样稀释成10-1与10-2． • (2)分别吸取lml 10-1与10-2的稀释水样和l ml原水样，各注入装有10 ml普通浓度乳糖蛋白胨发酵管中。另取10 ml和100 ml原水样，分别注人装有5 ml和50 ml三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液的试管（瓶）中。 • （3）初发酵实验、平板分离和复发酵实验 • （4）发酵结果查阅接种水样总量为111.11ml检索表。

11. 实验内容及安排 实验安排 • 水样采取 • 初发酵试验（第10周完成） • 平板分离 （第10周完成） • 涂片，革兰氏染色，镜检 （第11周完成） • 复发酵试验 （第11周完成）

12. 综合实验论文 • 说明多管发酵法检测水样中大肠菌群的原理和操作过程。 • 记录并报告实验结果。 • 结果分析与讨论，经检查，水样是否合乎饮用标准？

13. 谢谢！